转hGM-CSF基因骨髓基质细胞在体外扩散盒中的表达

目的 研究转人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)基因骨髓基质细胞系在体外扩散盒中的表达。方法 采用阳离子脂质体介导法将构建好的真核表达载体pIRESIneo hGM CSF导入人骨髓基质细胞系HFCL ,建立转基因人骨髓基质细胞系HFCL hGM CSF ,用Southernblot和Northernblot方法分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录 ,并将其移入体外扩散盒中 ,用ELISA法检测其蛋白表达量。结果 Southernblot和Northernblot分析表明hGM CSF基因已整合到HFCL细胞基因组DNA中 ,在mRNA水平上可以检测到其表达 ,移入扩散盒的HFCL hGM CSF细胞稳定分泌hGM CSF ,量为 5 1 6± 0 5ng 10 6 细胞 天。结论 转hGM CSF基因骨髓基质细胞可以在体外扩散盒中持续稳定表达hGM CSF 。

癌细胞体外扩散盒细胞培养技术

1 扩散盒的制备用有机玻璃制成外经15mm,内经9 mm,高3 mm,上开口的小盒,盒的侧壁打一个φ1 mm的小孔,置蒸馏水中浸泡数天,烤干后,用与盒面大小相同的微孔滤膜(φ=0.22μm)、高级快速胶(HJ-914)密封盒面,置80℃烤箱干烤4h灭菌,紫外线下照射1～2h,备用。