新型纳米转染试剂转染PNP自杀基因体外杀伤实验

将壳聚糖纳米粒包裹的报告基因pEGFP-N1质粒转染至HEK293细胞,并在HEK293细胞中成功表达荧光蛋白的基础上,进一步将本室自行构建的PNP基因的真核高效表达载体质粒pcDNA3-PNP转染至HEK293细胞。转染72h后,对转染的HEK293细胞给予前体药6-MPDR至终浓度40μg/ml,一天后,采用MTT比色法测定药物对细胞增值的影响,并进行统计学处理。实验结果表明采用壳聚糖纳米粒转染试剂转染并给予前体药6-MPDR的实验组活细胞数,与用壳聚糖转染但不给前体药6-MPDR的对照组活细胞数相比,有显著差异(P<0.05),说明新筛选出的壳聚糖纳米粒转染试剂可以将PNP自杀基因递送至靶细胞中,并在细胞中进行表达,从而使PNP/6-MPDR自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。分别采用相同工作浓度的脂质体与壳聚糖纳米粒转染试剂转染相同浓度的基因质粒,壳聚糖纳米粒对靶细胞生长数量影响很小,说明的壳聚糖纳米粒细胞毒性大大低于阳离子脂质体的细胞毒性。

双特异性抗体介导的CD_3AK体外杀伤实验研究

目的:研究在双特异性抗体的介导下CD3AK细胞(CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞)对人小细胞肺癌细胞株LTEP-sml细胞毒作用。方法:用51Cr-Na2CrO4释放试验检测单抗(2D6、UCHT1)和双特异性抗体(WST-HT)与CD3AK共同对人小细胞肺癌细胞株的杀伤活性。结果:双特异性抗体外能明显增强CD3AK细胞对人小细胞肺癌的杀伤活性。结论:与单纯CD3AK相比加入双特异性抗体后的CD3AK细胞的细胞毒活性显著增强。

东方田鼠血清体外杀伤日本血吸虫童虫效果的初步观察

目的 观察灭活补体和未灭活补体的东方田鼠血清体外杀伤日本血吸虫童虫的效果。方法 将血吸虫童虫分别与灭活补体和未灭活补体的东方田鼠阳性 /阴性血清、昆明鼠阳性 /阴性血清共同培养于 37℃ 5 %CO2 培养箱中 ,在培养 16～ 2 0h、4 0～ 4 4h观察记录各孔内死、活童虫数 ,并计算童虫死亡率。结果 培养 2 0～ 2 4h和 4 4～ 4 8h ,各种血清样本孔中的平均童虫死亡率分别为 :东方田鼠阳性血清 37.92 %± 16 .36 %和 4 0 .15 %± 15 .81%、灭活东方田鼠阳性血清 13.4 0 %± 4 .5 3%和 12 .2 9%± 1.84 %、东方田鼠阴性血清 17.79%± 9.2 1%和 2 4 .73%± 6 .2 5 %、灭活东方田鼠阴性血清血清 8.6 7%± 2 .0 6 %和 10 .4 5 %± 2 .71%、昆明鼠阳性血清 7.5 4 %± 1.85 %和 16 .39%± 2 .6 0 %、灭活昆明鼠阳性血清 7.2 3%± 1.83%和 12 .2 3%± 1.94 %、昆明鼠阴性血清 6 .5 0 %± 2 .76 %和 18.85 %± 6 .2 9%、灭活昆明鼠阴性血清 7.4 9%± 6 .2 8%和 14 .99%± 5 .16 %、血清空白 3.2 3%和 8.2 9%。结论 东方田鼠血清具有明显的杀伤日本血吸虫童虫作用 ,其中的补体可能是在东方田鼠抗血清杀伤日本血吸虫童虫中起决定作用的因子。

自然杀伤细胞对宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的治疗效果

目的探讨自然杀伤(NK)细胞对人宫颈癌HeLa细胞的体外杀伤作用以及不同浓度NK细胞对宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的治疗效果。方法采用含红色荧光蛋白(RFP)和荧光素酶报告基因(Luc)的慢病毒感染HeLa细胞,荧光倒置显微镜检测细胞中RFP基因的表达,体外成像技术检测Luc基因的表达。分别将不同浓度的NK细胞作用于HeLa-RFP/Luc细胞24、48、72 h,CCK-8法检测NK细胞对靶细胞的杀伤作用。将HeLa-RFP/Luc细胞接种于BALB/c-nu裸鼠皮下,建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型,待肿瘤生长至100 mm3时,随机分为模型组、NK高剂量组、NK低剂量组、空白对照组,每组10只。给药4个疗程后,观察各组裸鼠的一般状况,每周测量体重及瘤体大小,体外活体成像观察裸鼠瘤体的荧光变化。治疗周期结束后,剥离瘤体,称重,取脾脏组织,采用ELISA法检测脾脏组织液中肿瘤相关基因的表达。结果NK细胞对HeLa-RFP/Luc细胞的体外杀伤率呈时间和剂量依赖性,效靶比越大则杀伤作用越强,且作用72 h后,各效靶比的杀伤率均达90%以上。成功筛选出共表达RFP和Luc基因的HeLa-RFP/Luc细胞株。NK细胞治疗对裸鼠的体重无明显影响(P>0.05),但随着治疗周期的延长,治疗组裸鼠瘤体体积和荧光值的增长速率均明显低于模型对照组(P<0.05)。与模型对照组相比,NK细胞治疗后各组裸鼠雌激素E2水平均无明显变化(P>0.05),IL-2、IFN-γ水平显著升高,IL-4水平显著降低(P<0.05)。结论NK细胞治疗可延缓人宫颈癌HeLa细胞的生长,下调促肿瘤因子的表达,且在治疗3个疗程后效果最佳。