NK-92细胞对人卵巢癌细胞体外杀伤活性

目的 研究NK 92细胞对人卵巢癌细胞的体外杀伤活性以及放射线照射后对其杀伤活性的影响。方法 以体外培养人卵巢癌细胞系HO 8910为靶细胞 ,以NK 92的敏感细胞株K5 6 2作为对照 ,应用 4h51Cr释放法检测不同效靶比情况下体外培养NK 92细胞的杀伤活性 ,并应用医用电子直线加速器对NK 92细胞进行照射处理 (0、4 0 0cGy)后再检测其杀伤活性变化。结果 NK 92细胞未照射组 ,效靶比较低时 (1∶1、5∶1)对于HO 8910细胞杀伤率为 39%～4 5 % ,随效靶比升高 ,杀伤率随之上升 ,10∶1时杀伤率显著上升为 5 9% ,2 0∶1时杀伤率仅上升了 6 % ;对于K5 6 2细胞 ,杀伤率为 5 8%～ 71%。照射后 2d ,4 0 0cGy组NK 92细胞对HO 8910细胞不同效靶比的杀伤率与 0cGy组相比有所降低 ,其总体杀伤率为 4 2 %～ 6 2 % ,对K5 6 2细胞杀伤范围在 4 4 %～ 6 1%之间。结论 NK 92细胞对人卵巢癌细胞系HO 8910具有较高的杀伤活性 ,经放射线照射后仍保留一定的杀伤活性。

转导单链免疫毒素基因的PBMCs对人肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤活性

目的:用携带分泌型抗肝癌单链免疫毒素基因(sFv-TNF-α)的重组逆转录病毒感染人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs),使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv-TNF-α融合蛋白,观察转导的PBMCs对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用.方法:用感染性重组病毒产生细胞C22(PA317/PST)产生的病毒上清转导人PBMCs,采用PCR和RT-PCR方法对转导的PBMCs(PBMCs/PST)进行DNA和mRNA水平的分析.PBMCs/PST与SMMC-7721共培养,MTT法检测PBMCs/PST表达产物对肝癌细胞的体外杀伤活性.结果:PCR及RT-PCR结果显示PBMCs/PST中扩增出外源目的基因对应的电泳条带.MTT法检测结果,分泌型抗肝癌单链免疫毒素对体外培养肝癌细胞SMMC-7721的杀伤率为(38.2±6.7)%.结论:分泌型抗肝癌单链免疫毒素基因可以在PBMCs中整合并稳定表达,其分泌的表达产物对SMMC-7721具有一定的体外杀伤作用.

抗肝癌单链双功能抗体在Hut-78细胞系中的表达及体外杀伤活性

目的 用携带分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因(sFv TNF α)的重组逆转录病毒感染T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv TNF α融合蛋白 ,观察转导的T细胞对体外培养肝癌细胞的杀伤作用 .方法 用感染性重组病毒产生细胞C2 2 (PA317/PST)产生的病毒上清转导人T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,采用PCR、RT PCR、细胞原位杂交及免疫组织化学染色等方法 ,对转导的Hut 78细胞进行DNA、mRNA及蛋白水平的分析 .转导的Hut 78细胞分别与SMMC 772 1、HHCC共培养 ,MTT法检测Hut/PST细胞表达产物对两种肝癌细胞的杀伤作用 .结果 PCR、RT PCR结果显示转导Hut细胞中扩增出外源目的基因对应的电泳条带 .neo基因探针原位杂交显示转导细胞质内有较强的紫蓝色阳性反应信号 ,其阳性率约为 95 % .鼠抗人TNF α多克隆抗体免疫组织化学染色 ,转导细胞质内有明确的棕黄色阳性反应信号 .MTT法检测结果 ,分泌型抗肝癌单链双功能抗体对体外培养的两种肝癌细胞的杀伤率分别为 15 .4 %和2 6 .5 % .结论 分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因可以在T细胞中整合并稳定表达 ,其分泌的表达产物对两种肝癌细胞均具有一定的亲合活性 ,并且具有一定的体外杀伤作用 .

CD_3AK细胞与LAK细胞的诱导和体外杀伤活性的比较

目的:探讨CD3AK细胞与LAK细胞的诱导、增殖动力学和杀伤活性的变化。方法:采用抗CD3单克隆抗体(anti-CD3McAb)和rIL-2及PHA(植物血凝素)共刺激法诱生扩增CD3AK细胞,用等量rIL-2和PHA共刺激法诱生LAK细胞,观察它们的增殖动力学变化;用MTT法以K562细胞和H7402细胞为靶细胞,测定CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性。结果:微量的anti-CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,其扩增能力显著高于LAK细胞(P<0.001);CD3AK细胞对K562细胞和H7402细胞的杀伤活性显著高于LAK细胞(P<0.05)。结论:CD3AK细胞的扩增能力及杀伤活性均较LAK细胞为强。

CD_3AK细胞对膀胱癌细胞的体外杀伤活性研究

目的 探讨CD3 AK细胞的某些生物学特征、了解其对膀胱癌细胞的体外杀伤活性。方法 采用抗CD3 单抗和IL -2共同刺激健康人外周血单个核细胞诱导出CD3 AK细胞 ,体外动态观察CD3 AK细胞的形态特征及增殖能力 ,并与LAK细胞进行比较 ;以流式细胞仪测定细胞表型 :用MTT法测定CD3 AK、LAK细胞对膀胱癌细胞株 (T2 4)的杀伤活性。结果 ⑴CD3 AK细胞增殖能力高于LAK细胞 ;⑵CD3 AK细胞为异质细质细胞群 ,其细胞类型主要是CD8+ 细胞 ;⑶在效靶比为 10 :1及 2 0 :1时 ,培养 4d的CD3 AK细胞对T2 4细胞的杀伤率为均高于同期培养的LAK细胞对T2 4的杀伤率。结论 ⑴CD3 AK细胞制备简便 ,增殖能力强 ,可以为临床提供充足的过继免疫效应细胞 ;⑵CD3 AK细胞是一明显优于LAK细胞的抗肿瘤效应细胞 ,对膀胱癌细胞具有较强的杀伤作用。CD3 AK细胞在膀胱癌过继免疫治疗中具有重要的临床应用前景。

CD_3AK细胞对白血病细胞的体外杀伤作用

ＣＤ３单克隆抗体（ＣＤ３ＭｃＡｂ）对Ｔ细胞具有强烈的丝裂原作用。本文显示将ＣＤ３ＭｃＡｂ联合ＩＬ－２激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）对人急性白血病新鲜细胞和Ｋ５６２细胞均有明显杀伤作用。正常人ＣＤ３ＡＫ细胞对各型急性白血病杀伤活性无差别；正常人与白血病缓解期的ＣＤ３ＡＫ细胞杀伤力类同，且自体与异体亦无区别；但是，复发期ＣＤ３ＡＫ细胞杀瘤作用明显减弱。

抗CEA免疫毒素的表达、纯化、复性与生物学活性的研究

以抗癌胚抗原 (Carcinoembryonicantigen ,CEA)单链抗体与假单胞菌外毒素 (PseudomonasexotoxinA ,PEA)的截短和修饰形式PE38 KDEL构建重组免疫毒素CEA PE38 KDEL ,并在大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)_star中表达。采用镍离子螯合层析法纯化变性的包涵体样品 ,并用连续梯度透析的方法对纯化后的包涵体进行复性。采用流式细胞术鉴定复性产物与靶细胞的结合活性 ,结果表明免疫毒素CEA PE38 KDEL具有与靶细胞特异性结合的活性。以MTT法检测免疫毒素对肿瘤细胞的体外杀伤活性 ,结果表明该免疫毒素对SW1116和CNE_2细胞具有特异性杀伤活性。证明了经包涵体复性的抗CEA免疫毒素CEA PE38 KDEL对表达CEA抗原的肿瘤细胞具有良好的结合和杀伤活性。

自然杀伤细胞系NK-92治疗卵巢癌的体外及动物实验研究

目的研究放射线照射后的自然杀伤细胞系NK92对人卵巢癌细胞的体外杀伤活性及对卵巢癌动物模型的治疗效果。方法医用电子直线加速器照射NK92细胞,照射剂量分别为0、1、2、4、8、16Gy,将NK92细胞按照上述不同照射剂量分为6组。台盼蓝拒染法进行细胞计数,氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖活性,51Cr释放法检测NK92细胞对靶细胞HO8910的杀伤活性。观察照射后的NK92细胞对NOD/SCID鼠卵巢癌皮下移植瘤的治疗效果,NOD/SCID鼠分肿瘤组(仅注射人卵巢癌细胞系HO8910细胞)和治疗组(同时注射HO8910和8Gy组NK92细胞)。结果(1)体外实验:4、8Gy组NK92细胞数量在照射后的第5天分别减少到10%、0%;照射后48h,与0Gy组NK92细胞相比,4、8Gy组增殖活性分别降至29%、6%。对HO8910细胞杀伤结果显示,4、8Gy组杀伤率分别在42%～62%、33%～58%之间。(2)动物实验:接种后30、40、50d,肿瘤组NOD/SCID鼠瘤结节体积分别为(0.214±0.061)cm3、(0.382±0.051)cm3、(0.428±0.021)cm3,治疗组分别为(0.047±0.019)cm3、(0.167±0.021)cm3、(0.343±0.022)cm3,治疗组与肿瘤组相比均有减小,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组NOD/SCID鼠全部存活到120d,肿瘤组于接种后74～82d全部死亡,中位生存时间为76d,与治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论放射线照射后的NK92细胞治疗卵巢癌是有效的。

腹腔内注射TNF基因转染的LAK细胞对于腹水型肝癌小鼠的疗效

在逆转录病毒介导下将TNF基因转染入鼠LAK细胞中,结果发现,转染TNF基因的LAK细胞比正常LAK细胞和转染对照基因的LAK细胞分泌更高水平的TNF,其体外生长能力和杀伤活性均显著升高,抗TNF单抗可显著抑制其体外杀伤活性,表明其杀伤活性升高是由基因转染后所表达的TNF介导的.将较低数量的TNF基因转染的LAK细胞与IL～2联合腹腔内注射后,对腹水型肝癌小鼠有显著的治疗效果.

锤头状核酶抑制CTLL-2细胞凋亡而增强其对Yac-1细胞杀伤活性的实验研究

目的 研究抗fas的锤头状核酶对小鼠细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)系CTLL 2细胞fas基因的表达及其介导的细胞凋亡抑制作用 ,探索供者淋巴细胞输注 (DLI)时增强T细胞抗白血病的新途径。方法设计并合成抗fas的锤头状核酶基因 ,将其导入CTLL 2细胞 ,通过RT PCR、Westernblot和流式细胞仪分别检测核酶对CTLL 2细胞fasmRNA和Fas蛋白表达的抑制 ,以MTT法检测CTLL 2细胞与Fas抗体结合后的增殖活性 ,以半胱天冬酶 3(caspase 3)活性检测试剂盒检测细胞caspase 3蛋白酶活性 ,以流式细胞仪检测细胞凋亡 ,以乳酸脱氢酶法检测CTLL 2细胞的体外杀伤活性。结果锤头状核酶基因导入CTLL 2细胞后 ,可使其表面的Fas表达降低达 5 0 % ,细胞经Fas抗体 (JO2 )处理后 ,与空白对照、转染空载体的细胞相比 ,转染核酶的细胞增殖活性增加了 1倍 ,caspase 3活性降低近 5 0 % ,而细胞的凋亡率显著降低 ,只有 37% ,且CTLL 2细胞的体外杀伤活性为对照组的 2倍。结论该核酶具有切割fas基因的良好活性 ,并可抑制Fas介导的CTLL 2细胞凋亡 ,增加该细胞存活率 ,从而增强对Yac 1细胞的杀伤活性。

基础理论

云南省肿瘤医院2003～2006年恶性肿瘤住院病例构成比分析，树突状细胞激活效应细胞的最佳效靶比及其体外杀伤活性的研究，树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养对多药耐药肿瘤细胞系的杀伤活性，PADRE／MUC4重组腺病毒转染树突状细胞诱导特异性CTL体外杀伤作用研究。

妇科（060437～060487）

纤溶酶原激活剂在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其与肿瘤侵袭的关系；妇科电视腹腔镜手术并发症的临床分析与对策；35例恶性滋养细胞肿瘤脑转移的临床转归；X线立体定向放射治疗妇科恶性肿瘤转移灶27例的临床疗效观察；脐血来源的细胞毒性T淋巴细胞对人卵巢癌裸鼠移植瘤治疗的研究；^131I标记抗卵巢癌细胞胰相关抗体体外杀伤活性的实验研究;