体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性分析

目的探讨体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性。方法采用6周龄BALB/c小鼠进行抗原免疫,构建杂交瘤细胞并克隆。采用动物体内诱导单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体,分别采用G柱亲和层析、蓝胶+Q柱离子交换层析两种方法进行纯化,核酸蛋白检测仪记录波长280 nm下的光密度(optical density,OD),紫外分光光度计测量成品浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测该阻断剂(CN302)对假阳性样本的阻断能力。结果G柱亲和层析法提取阻断剂的收率(3个批次分别为6.49、6.12、6.27 g/L)高于蓝胶+Q柱离子交换层析法(3个批次分别为1.78、1.68、1.61 g/L)。两种纯化方法的纯度均高达95%以上。G柱亲和层析法、蓝胶+Q柱离子交换层析法所得阻断剂的活性分别为106.54%、92.45%;与空白组相比,两种纯化方式所得阻断剂CN302对假阳性样本的检出率均降低,其OD值均小于0.2,与基准阻断剂大致相同。G柱亲和层析法所得阻断剂CN302未冻融的活性为99.86%,冻融5次后活性为99.83%。无阻断剂存在时,对假阳性样本检测的OD值约为2.5,最高可达到4.0;加入阻断剂后,OD值明显降低;阻断剂CN302对假阳性样本检测的OD值低于其他阻断剂。结论本研究所得阻断剂能显著消除样本内源性干扰,且活性几乎全部保留。G柱亲和层析法提取抗体的收率和阻断能力均高于蓝胶+Q柱离子交换层析法。

TGF-β1壳聚糖缓释微球的制备和体外检测

【目的】通过制备新型的转化生长因子鄄茁1(TGF鄄茁1)缓释系统,并对其载药、体外释药及降解特性进行检测,评估应用生物可降解壳聚糖微球作为TGF鄄茁1控制释放载体的可行性。【方法】应用三聚磷酸钠(TPP)作为交联剂,以乳化交联法制备具有控制释放功能的负载TGF鄄茁1的壳聚糖微球;以牛血清白蛋白(BSA)作为模板蛋白,应用相同的方法制备负载BSA的微球。应用扫描电镜、微镜粒度分、药物包封率测定、体外药物释放动力学检测等方法分析微球的特性。【结果】制备的微球球形良好,球体表面光滑,具有较高的TGF鄄茁1包封效率90.1%)。持续7d的药物释放试验表明,BSA与TGF鄄茁1两种蛋白均可以从微球中缓慢释放,其中TGF鄄茁1的释放率低于BSA的释放率。溶菌酶溶液降解作用下,4周的体外降解过程中,可见微球质量持续下降并伴有明显的微球形貌改变。【结论】应用乳化交联法可制备负载TGF鄄茁1的壳聚糖缓释微球。这种新型药物控制释放系统在细胞因子的控制释放及软骨组织工程中有潜在的应用价值。

酶免疫分析法体外检测过敏原在荨麻疹病因筛查中的价值

目的 : 评价酶免疫分析法 (ELISA)体外检测过敏原在荨麻疹病因筛查中的临床应用价值。方法 : 采用ELISA检测 15 4例荨麻疹患者和 11例健康对照者血清食入性及吸入性过敏原特异性IgE。结果 : 15 4例荨麻疹患者总阳性率为 6 8.8% ,明显高于健康对照组 9.1%的阳性率 (P <0 .0 1)。其中食入组阳性率为 4 4 .8% ,鳕 (带鱼、金枪鱼 )阳性率最高 ,螃蟹、虾、龙虾次之。吸入组阳性率 4 8.1% ,尘 (粉 )螨阳性率最高 ,屋尘次之。结论 : ELISA体外检测过敏原在荨麻疹病因筛查中具有实际应用价值。

干扰素诱导Mx-Cre转基因小鼠表达的重组酶活性的体外检测

利用ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、免疫组化、免疫金标电镜、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ从ＤＮＡ水平、蛋白水平分析干扰素诱导后Ｍｘ－Ｃｒｅ转基因小鼠肝组织中Ｃｒｅ重组酶的表达及其表达产物的活性。在对Ｍｘ－ｃｒｅ转基因小鼠基因组中整合有ｃｒｅ基因进行确定后，通过干扰素诱导Ｍｘ－ｃｒｅ转基因小鼠表达Ｃｒｅ重组酶，结果表明转基因小鼠肝细胞核和细胞质中均有Ｃｒｅ重组酶的表达，并在超微水平进一步证实。将含表达的Ｃｒｅ重组酶的肝细胞核抽提液加入到带有ｌｏｘＰ位点的ＤＮＡ中进行重组，分析证明Ｍｘ－Ｃｒｅ转基因小鼠表达的Ｃｒｅ重组酶具有重组活性，从而建立了体外检测Ｍｘ－Ｃｒｅ转基因小鼠表达的Ｃｒｅ重组酶活性的方法。

疫苗中和抗体体外检测方法的研究进展

中和抗体是抗病毒免疫的主要因素，也是疫苗免疫治疗效果的重要检测指标之一。预防疫苗的免疫保护性主要体现于是否可诱导出高滴度的中和抗体，因此中和抗体活性也是疫苗评估和质控的重要依据。迄今为止，根据已知抗原特性、抗原与抗体反应特点以及结果判定方法的不同，已建立了多种病毒中和抗体活性的体外测定方法。本文就近年来关于中和抗体活性体外测定方法的最新研究进展做一综述。

变态反应患者过敏原体外检测与分析

目的探讨变态反应性疾病患者外周血清中总IgE和过敏原特异免疫球蛋白E(sIgE)的情况以及它们的相互关系。方法采用德国Mediwiss公司生产过敏原检测系统以免疫印迹法定量检测血清中总IgE和过敏原特异性sIgE抗体。结果272例变态反应性疾病患者在吸入组总IgE阳性检出率86.8%(236/272),食物组总IgE阳性检出率为26.1%(71/272);过敏原特异性抗体sIgE阳性检出率为80.5%(219/272),检出2种和2种以上sIgE阳性率为60.3%(164/272);189人检测到吸入组过敏原,64人检测到食物组过敏原,36人为吸入组和食物组混合过敏原。吸入组过敏原检出阳性项次共357项,最常见的过敏原为户尘螨,阳性率为44.1%(120/272),其次为猫毛皮屑、狗毛皮屑组合26.8%(73/272),蟑螂24.6%(67/272)和树花粉组合15.4%(42/272;,食物组检出阳性项次共74项,主要食物组过敏原阳性检出率依次为蟹、虾9.2%(25/272)、羊肉7.4%(20/272)、腰果3.7%(10/272)、小麦、2.6%(7/272)。对主要致病过敏原特异性sIgE浓度(分级)分析,户尘螨4~6级阳性检出率显著高于其它过敏原(P<0.01)。结论体外总IgE和过敏原特异免疫球蛋白E(sIgE)检测,可以为临床确认过敏性体质、寻找相应过敏原、为变态反应性疾病的预防、诊断和治疗提供依据。

450例患者过敏原体外检测结果分析

目的了解上海市周浦地区过敏患者的食入性与吸入性过敏原情况,为过敏性疾病的预防和治疗提供依据。方法选取2014年3月至2014年7月上海市周浦医院门诊及住院患者450例,采用酶联免疫吸附试验对患者进行食入性过敏原和吸入性过敏原特异性IgE(sIgE)抗体检测。结果 450例患者以吸入性过敏原过敏为主,分别为屋尘螨和粉尘螨组合、狗上皮、猫毛、真菌混合、榆树花粉和梧桐花粉,其sIgE抗体阳性率分别为19.33%、17.78%、17.56%、14.44%、12.44%和12.22%。食入性过敏原中以鸡蛋、蟹、花生、牛奶的sIgE抗体阳性率较高,分别为16.89%、12.67%、10.89%和10.44%。结论上海市周浦地区吸入性过敏原阳性率较食入性过敏原高,建立常见过敏原的检测对临床患者过敏性疾病的预防和治疗有较好的指导意义。

体外检测特异性IgE抗体5000例结果分析

目的探讨体外测试变应原在临床上的应用。方法应用变应原试剂检测2010年至2011年期间5 000例门诊患者血清中的特异性IgE抗体,同时选取100例吸入组阳性者接受皮内试验检测。结果体外检测试验与皮内试验(体内方法)符合率为90%。结论体外测试具有准确性、灵敏性和安全性,是应用前景很好的过敏原检测方法。

特异性变应原体外检测的研究进展

临床上特异性变应原检测对变态反应疾病的防治具有重大意义。目前常用的过敏原体外检测方法有血清特异性IgE检测、白细胞组织胺释放试验、人嗜碱粒细胞脱颗粒试验等,其中血清特异性IgE的检测最为重要,检测方法有RAST、荧光免疫标记分析法、ELISA等,检测系统有UNICAP-100检测系统、MAST变应原检测系统等,近来蛋白芯片检测技术成为另一新方法。

抗菌药物敏感性体外检测系统质量控制标准

药物敏感试验通过在体外检测,判断抗菌药物对病原体有无抑制或杀灭作用。本文讨论目前抗菌药物敏感性体外检测方法及系统,美国临床实验室标准化委员会(CLSI)及国际标准化组织(ISO)相关质量控制标准及美国FDA质量控制指南,以期为加强我国药敏试验相关体外诊断产品的质量控制和标准体系建设提供借鉴。

支气管哮喘与变应性鼻炎患者血清特异性IgE体外检测结果对照分析

目的通过对支气管哮喘及变应性鼻炎患者血清特异性IgE检测,了解两者体外过敏因素的差异。方法采用美国Dexall变应原半定量快速检测试剂盒A板,对85例支气管哮喘患者及56例变应性鼻炎患者进行血清特异性IgE检测。结果两组患者体外过敏因素相似,但支气管哮喘患者的体外过敏原以螨及室尘为主,一年四季均可发病,无季节性。变应性鼻炎患者的体外过敏原以树花粉(榆树、柳树、杨树)为主,发病有明显的季节性。结论支气管哮喘与变应性鼻炎均属于变态反应性疾病,虽然两者过敏因素相似,但是有一定的差异性,可分别进行针对性预防和治疗。