C1烟煤中自然产出的纳米二氧化硅对BEAS-2B细胞的体外毒性

背景与目的中国云南省宣威地区是世界非吸烟女性肺癌发病率最高的地区之一,其发病率是中国其他地方的20倍,前期研究认为,这种高肺癌发病率可能与当地出产和使用的烟煤燃烧产物中含有的二氧化硅颗粒物有关。本研究将从宣威地区出产的烟煤(C1烟煤)燃烧产物中分离二氧化硅颗粒物并进行表征,同时研究这种自然产出的二氧化硅颗粒物对正常人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的体外毒性。方法①物理法从C1烟煤燃烧后的底灰中分离二氧化硅颗粒物,扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察分离出的颗粒物形态,能谱分析显微组分的依存关系,透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察单颗粒形貌,激光粒度分析仪分析其颗粒物粒径分布,BET氮吸附比表面积仪测定颗粒物表面积;②应用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)比色法检测分离出的二氧化硅处理组(实验组)、工业生产的纳米二氧化硅处理组和结晶型二氧化硅处理组(对照组)的细胞成活率变化,测定经刺激24h-72h后细胞内活性氧化酶(ROS)和乳酸脱氢酶(LDH)含量变化。结果①我们从C1烟煤燃烧后的底灰中分离出二氧化硅颗粒物,这些颗粒物粒径大小不一,30nm到120nm的颗粒物占86.8%,形态各异,表面不光滑,赋存有铝、钙和铁等元素;②相同浓度下,与工业生产的纳米二氧化硅和结晶型二氧化硅相比,自然产出的纳米二氧化硅对BEAS-2B有更高的体外毒性。结论①物理法能从C1烟煤底灰中分离出天然的纳米二氧化硅颗粒物,且不改变原有的形貌特征和显微组分的依存关系;②天然产出的纳米二氧化硅因形貌不规则、高比表面积和复杂的化学组分可能比工业生产的纳米二氧化硅和结晶型二氧化硅具有更高的细胞毒性。

秋水仙碱对大鼠肾细胞NRK体外毒性机制初步探讨

目的：考察秋水仙碱体外肾毒性及其主要机制。方法：体外培养大鼠肾细胞NRK,通过MTT试验、细胞形态学改变、乳酸脱氢酶释放率、Hoechst/PI双染色法、流式细胞术考察秋水仙碱对大鼠肾细胞NRK是否具有毒性作用,进而阐明秋水仙碱肾毒性产生的可能机制。结果：秋水仙碱在0.1~10μmol/L浓度范围内,对NRK细胞的抑制率呈浓度依赖性。1μmol/L处理组细胞形态学发生明显改变,乳酸脱氢酶释放率随着给药浓度的增加也逐渐增加。Hoechst/PI双染荧光观察10μmol/L处理组细胞处于晚期凋亡及坏死状态,Annexin V-PI双染流式检测细胞凋亡率随着给药浓度的增加而升高。结论：秋水仙碱在0.1~10μmol/L的浓度范围内具有较强的体外肾毒性,其机制可能是秋水仙碱将细胞阻滞在G2/M期,影响细胞的分裂从而诱导细胞凋亡,对细胞产生毒性。

盐酸洛拉曲克长循环脂质体的制备及其对肝癌细胞的体外毒性

目的:研制出具有缓释作用的盐酸洛拉曲克长循环脂质体并考察其理化特性以及在体外的抗瘤效应.方法:用两亲性聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)对脂质体膜进行修饰,以薄膜挤压-硫酸铵梯度法制备盐酸洛拉曲克长循环脂质体;用MTT法比较盐酸洛拉曲克长循环脂质体与盐酸洛拉曲克普通脂质体及游离的盐酸洛拉曲克的体外细胞毒性.结果:制备的盐酸洛拉曲克隐形脂质体包封率达68%左右,粒径110nm左右;与普通脂质体及游离的盐酸洛拉曲克相对照,长循环脂质体显示了较好长效的毒性作用,2h组长循环脂质体的ID50明显高于另外两组,而48h组的ID50则与另外两组无显著差别.结论:新制备的盐酸洛拉曲克长循环脂质体在体外显示了其较好的缓释效应,可以弥补盐酸洛拉曲克在体内半衰期比较短的缺点.

兰州市不同地区大气飘尘对巨噬细胞体外毒性的研究

本文采用大白鼠腹腔巨噬细胞体外染毒培养的方法,探讨了兰州市不同地区大气飘尘对大白鼠腹腔巨噬细胞存活率及细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)的活性的影响及其地区间差异.研究结果表明:三地区不同浓度的大气飘尘对大白鼠腹腔巨噬细胞的存活率及胞内三种酶的活性均有不同程度的影响,各项指标均存在剂量—反应关系和地区差异,以西固区危害最为严重,城关区次之,榆中较轻.

柴胡皂苷d对人肝细胞L-O2体外毒性机制探讨

目的:考察柴胡主要成分之一柴胡皂苷d(ssd)体外肝毒性以及主要机制。方法:通过MTT试验、细胞形态学改变、DNAladder、DAPI荧光染色法、乳酸脱氢酶释放率、溶血试验等方法考察ssd对人肝细胞L-O2是否具有毒性作用,进而阐明ssd肝毒性产生的可能机制。结果:MTT法测得ssd的半抑制浓度(IC50)为2.44μmol/L,5μmol/L处理组细胞形态学发生明显改变,乳酸脱氢酶释放率增高和溶血试验结果发现毒性作用呈剂量依赖性,但DNAladder和DAPI荧光检测均未见明显细胞凋亡。结论:ssd具有较强的体外肝毒性,其机制可能是由于ssd诱导细胞膜通透性增加从而导致细胞损伤或坏死,而不是诱导细胞凋亡。

β磷酸三钙／硅橡胶复合材料的制备和体外毒性试验

目的 制备β磷酸三钙／硅橡胶（β—TCP／SR）复合材料，进行体外毒性试验，对其生物安全性进行初步评价。方法 将粉末状β磷酸三钙（β—TCP-1）和颗粒状β磷酸三钙（β—TCP-2）分别与硅橡胶基胶混合，模压成型制备出两种复合材料β—TCP-1／SR和β—TCP-2／SR，对复合材料进行大体形貌观察，参照ISO和国家标准对两种复合材料进行溶血试验、细胞毒性试验，对所得数据进行统计学分析。结果 共混法成功制备出复合材料，陶瓷材料分布于复合材料中；溶血率β—TCP-1／SR〈β—TCP-2／SR〈SR〈5％；细胞毒性试验，各材料毒性评级均〈2级，无明显细胞毒性。结论 共混制备钙磷陶瓷／硅橡胶复合材料的方法可行，体外毒性试验证明材料安全无毒。

氟尿嘧啶磁性丝心蛋白-壳聚糖微球体外对癌细胞的毒性作用

采用改良的MTT比色法测定不同培育时间和浓度下,氟尿嘧啶(1)磁性丝心蛋白-壳聚糖微球(magneticfibroin-chitosanmicrospheres,MFCMs)在体外对人肝癌细胞株SMMC-7721和人肺腺癌细胞株A549生长的抑制作用。结果表明,1MFCMs对SMMC-7721的抑制表现为明显的时效和量效特征;对A549的抑制主要呈时效关系。由半数有效浓度(IC50)可知,1MFCMs对A549比SMMC-7721更敏感。1MFCMs与1注射剂对两种癌细胞的抑制率有显著差异(P<0.05)。

药物毒性的体外试验评价

本文评价了药物体外毒性试验在新药研制过程中的作用,并着重介绍了体外毒性试验中常用的培养细胞系与细胞培养系统在毒性研究中的进展。

3种细胞因子在体外对阿糖胞苷细胞毒性的影响

采用对碘硝基四唑(INT)比色法,观察了17例急性髓性白血病(AML)患者和8例正常人的骨髓,在体外对阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性,同时分别观察了粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)3种细胞因子对其敏感性影响.结果显示AML细胞与正常细胞对Ara-C敏感性存在显著差异;G-CSF、GM-CSF、IL-3此3种因子均能增加Ara-C对AML细胞的杀伤作用.3种细胞因子的作用有很大异质性,3种基因重组造血因子(rhHGF)均不能增加Ara-C对正常骨髓细胞的细胞毒性.

真菌毒素DON和ZEN的体外联合毒性评价

选取BEL7402细胞对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)的联合毒性进行评价。首先将不同浓度的DON、ZEN以及其混合物染毒对数期的BEL7402细胞,刺激24 h后,对细胞增殖率、ROS活性氧水平、钙离子水平、细胞凋亡率以及凋亡相关靶点基因的表达等指标进行监测分析,并对两种毒素的联合毒性作用进行评价。结果表明,真菌毒素DON、ZEN均可抑制细胞活性,IC_(50)分别为9.3、27.2μg/m L,可导致细胞氧化应激损伤,提高细胞内活性氧水平以及钙离子浓度,显著上调凋亡关键基因p53、Bax,下调Bal-2基因,诱导细胞产生早期凋亡甚至坏死,多种毒性指标验证了这两种毒素对细胞的联合毒性作用表现为加和作用。

反复熔铸Ni-Cr烤瓷合金体外细胞毒性实验(MTT法)

目的:初步评价反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同熔铸次数Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液培养小鼠结缔组织成纤维细胞(L-929)的结果,从而对反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性进行初筛。结果:各浓度实验组细胞生长形态良好、细胞毒性级为0～1级;经过2～5次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液、不同培养时间的A492均值与经过1次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金相应A492均值无显著性差异(P>0.05)。结论:初步认为Ni-Cr烤瓷合金经过1～5次熔铸后具有较好的生物相容性。

医疗器械体外细胞毒性试验相关标准的比较及有关内容的商榷

八十年代末,国际标准化组织成立了TC194医疗器械生物学评价技术委员会,研究制定＂生物材料和医疗器械生物学评价标准＂,相继推出了ISO 10993系列标准。中国是从70年代后期开始研究生物材料和医疗器械的生物学评价,1983年由以中国药品生物制品检定所为主的研究单位对生物材料生物学评价试验项目选择（短期）和试验方法进行了研究。1987年卫生部根据研究结论,

Comfort义齿粘附剂的体外细胞毒性评价

目的 评价作者自行研制的新型Comfort义齿粘附剂 (Comfort_DA)的体外细胞毒性。方法 Comfort_DA置于细胞培养液 72h制备出材料的浸提液 ,用同一培养液再稀释为 5 0 %、75 %浓度后分别加入含人口腔成纤维细胞悬浮液的培养板中 ,其中空白对照组仅加入新鲜培养液。 3块培养板分别继续在 5 %CO2 、37℃培养箱内开放培养2d、3d和 4d后 ,四唑盐比色法观察细胞的活性以研究细胞增殖率 ,用分光光度计以 4 90nm波长测光密度值 (OD) ,组间方差分析并评定该材料的毒性级。结果 空白对照组、Comfort_DA的 5 0 %和 75 %浓度组间OD值的差别有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;各组浓度Comfort_DA的毒性程度为“0～ 2”级。结论 作者所研制的新型Comfort_DA仅有较轻微的细胞毒性。

纤维矿物粉尘体外细胞毒性及防治的实验研究

目的 :评价工业上常用纤维矿物粉尘表面游离OH-的毒性并用有机弱酸对其进行减毒处理 ,探讨其损伤机制。方法 :以细胞死亡率、乳酸脱氢酶 (lactatedehydrogenaseLDH)、超氧化物歧化酶 (superoxidedismutaseSOD)、丙二醛 (malondialdehydeMDA)为毒性指标 ,观察纤维矿物粉尘对肺泡巨噬细胞的毒性 ,并用低浓度的有机弱酸处理各粉尘 ,观察对人红细胞 (RBC)的溶血率及MDA的变化。结果 :不含OH-的斜发沸石、纤维硅灰石未表现出细胞毒性 ,纤维坡缕石及纤维水镁石因含不同的OH-而表现出不同的细胞毒性。用低浓度的有机弱酸处理纤维坡缕石及纤维水镁石后能显著降低其对RBC的毒性。结论 :纤维矿物粉尘的细胞毒性与其表面OH-呈正相关 ;

四甲基偶氮唑盐法评价牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的体外细胞毒性

背景:越来越多的新型材料被纳入口腔领域应用的视野,对生物材料进行生物相容性评价是进入临床试验前的重点研究内容。目的:通过体外细胞毒性实验评价自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的生物相容性。方法:根据ISO标准,采用四甲基偶氮唑盐比色法行体外细胞毒性实验,阴性对照组为DMEM培养液,阳性对照组为含有0.1%苯酚的DMEM培养液,实验组为受试材料的浸提液。测试人牙龈成纤维细胞在牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料浸提液中培养1,3,5d的吸光度值,观察细胞形态变化,计算细胞相对增殖率,判断细胞毒性的级别。结果与结论:实验组体外细胞毒性实验吸光度值均与阴性对照组差异无显著性意义(P>0.05),与阳性对照组差异有显著性意义(P<0.01),自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料体外细胞毒性级别为0～1级,初步认为其具有良好的生物相容性。

采用微团培养技术探讨双酚A的体外发育毒性

采用微团培养观察了不同浓度的双酚A(0～ 5 0mg L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响 ,旨在了解双酚A的体外发育毒性特点及其可能的作用机制。结果显示 :双酚A对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用 ,表现为染毒组肢芽细胞集落形成数量减少 ,细胞毒性试验吸光度值下降 ,并呈现出明显的剂量 反应关系。双酚A对肢芽细胞的 5 0 %增殖抑制浓度 (IP50 )和5 0 %分化抑制浓度 (ID50 )分别为 38 74mg L和 2 7 93mg L ,IP50 ID50 =1 39。按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准 ,双酚A属于阳性致畸物 。

纳米羟基磷灰石-氧化锆复合陶瓷体外细胞毒性研究

目的 :为今后将纳米羟基磷灰石 氧化锆复合陶瓷应用于口腔种植修复 ,先对该材料进行体外细胞毒性试验 ,评价其初步生物安全性。方法 :体外培养L92 9小鼠成纤维细胞用不同材料的浸提液培养 1、4、7天 ,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化 ;用四氮唑盐比色法 (MTT)检测 ,计算细胞相对增殖度 ,用六级毒性分类法评级。结果 :培养期细胞贴壁生长 ,形态良好 ,随着培养天数增加细胞大量增殖 ,毒级为 0～ 1级。结论 :初步证实了该材料具有人体应用的生物安全基础 ,无细胞毒性。

披针叶黄华碱体外细胞毒性的研究

目前，一些植物中的生物碱成分已被开发成抗癌药应用于临床，并显示出很好的临床效果。披针叶黄华碱具有多方面的药理作用，特别是该类化合物的抗癌活性引起了研究人员的兴趣。披针叶黄华碱所含的生物碱成分多样，生物碱单体是否具有抗癌作用及在总碱中所起的作用，有待于进一步研究。本试验对披针叶黄华碱的体外细胞毒性进行了研究，现报道如下。

口腔临床常用烤瓷合金对小鼠肺成纤维细胞体外毒性研究

目的比较镍铬、钴铬、纯钛、钯基、金铂等5种常用烤瓷合金的细胞毒性。方法本研究于2011年7—10月在福建医科大学附属口腔医院中心实验室进行。按照ISO10993标准,采用CCK-8法测定第1、3、5、7天时烤瓷合金浸提液培养的小鼠肺成纤维细胞(L929细胞)的OD值,同时观察L929细胞形态,并且计算细胞相对增殖率(RGR),评价5种烤瓷合金对L929的细胞毒性。结果第7天时,除金铂合金外,其他4组烤瓷合金的OD值与阴性对照组的差别均有统计学意义(P<0.05);L929细胞的RGR由高到低分别为金铂合金(98.4%)、钯基合金(95.2%)、纯钛合金(83.0%)、镍铬合金(74.0%)、钴铬合金(72.6%)。细胞形态学观察发现:金铂合金组、钯基合金组以及纯钛合金组的细胞形态与阴性对照组相比无明显差别;而钴铬合金组和镍铬合金组的细胞排列稀疏,少量细胞皱缩变圆。结论金铂合金、钯基合金以及纯钛合金的细胞毒性为1级,具有较好的生物相容性;钴铬合金、镍铬合金的细胞毒性为2级,结合细胞形态观察认为生物相容性仍然合格。