建立可量化的体外血小板、牙龈炎生物模型--研究牙膏的功效作用

目的:研究并运用可量化的体外血小板生物模型、牙龈上皮细胞(HEGCs)炎症模型与体内大鼠牙龈炎模型,从诸多层面研究添加有白芨提取物或氨甲环酸牙膏的功效作用。方法:①建立新型的体外血小板生物模型,通过研究血小板聚集率、环磷酸腺苷(cAMP)和血栓素B 2(TXB 2)含量指标,综合评价添加白芨提取物或氨甲环酸的牙膏对牙龈止血的功效。②研究建立脂多糖(LPS)诱导的HEGCs炎症模型,可量化地检测细胞因子IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α含量,据此评价添加白芨提取物或氨甲环酸的牙膏在抗炎方面的作用。③建立大鼠牙龈炎模型,综合运用X-ray形态观察、记录牙龈指数(GI)、菌斑指数(PI)、探针出血指数(BOP)、检测口腔唾液中免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)以及大鼠血浆中细胞因子IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α含量等,全面验证本研究建立的体外血小板、牙龈炎生物模型的有效性。结果:①在可量化的体外血小板生物模型方法研究中:添加白芨提取物或氨甲环酸牙膏的血小板聚集率比正常血浆高8.6%~40.4%,cAMP含量比正常血浆中低122nmol/L^328nmol/L(P<0.001),TXB 2含量比正常血浆中高1.6ng/L^6.3ng/L(P<0.05);血小板生理反应的3项指标综合表现出添加白芨提取物或氨甲环酸牙膏止血效果的显著性。②体外HEGCs牙龈炎症模型实验中,添加有白芨提取物或氨甲环酸牙膏的HEGCs所分泌的细胞因子与阴性对照牙膏的比较结果为:抗炎因子IL-10含量比阴性对照牙膏组高21ng/L^90ng/L(P<0.01)、炎症因子IL-6含量比阴性对照牙膏组低12ng/L^45ng/L(P<0.01)、炎症因子IL-1β含量比阴性对照牙膏组低1ng/L^7ng/L(P<0.05)、肿瘤坏死因子TNF-α含量比阴性对照牙膏组低3ng/L^23ng/L(P<0.05),且均具有统计学意义。③用于验证的大鼠牙龈炎模型,X-ray影像及牙龈探针诊断指数(PI、GI、BOP)也同时显示出,添加白芨提取物或氨甲环酸的牙膏组的牙龈组织有明显的修复作用。并且大鼠唾液中的IgA、IgM、IgG含量分别比牙龈炎对照组增加52ng/L^446ng/L(P<0.01)、0.5ng/L^1.8ng/L(P<0.05)、0.01ng/L-0.8ng/L,同时大鼠血浆中的细胞因子IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α含量变化明显(P<0.05)。从而有效地验证了研究建立的体外血小板生物模型和HEGCs炎症模型与体内动物牙龈炎特征指标具有正相关性,结果表明本研究建立的体外生物模型的可靠与有效性。结论:研究显示添加白芨提取物或者添加氨甲环酸的牙膏在大鼠体内模型与体外血小板生物模型上的止血效果呈正相关性,同时动物体内炎症介质和细胞因子的抑制作用与体外HGECs牙龈炎模型的检测结果也显示出良好的一致性,为未来逐渐淘汰动物体内炎症模型提供了可靠的方法依据。

口腔生物膜体外模型的建立和应用评估

目的 :通过建立体外生物膜模型 ,模拟口腔内生态环境以探索生物膜在龋病发生发展中的作用。方法 :利用发酵罐与恒流培养室的组合构建简易的体外生物膜模型 ,通过恒流培养室内液体培养基连续的流动循环 ,模拟出口腔内液体持续冲刷的生态环境。在羟磷灰石片上定植 4种口腔常驻菌 ,以形成实验性生物膜 ,并通过每 1 2h定时给以蔗糖底物 ,模拟致龋环境 ,观察系统中实验菌CFU计数、pH动态变化等各项反应及不同环境下所形成生物膜的微结构变化。结果 :本研究建立的系统能较好的控制各项实验参数 ,加入蔗糖底物后表现出明显的致龋反应。结论 :本组建立的体外模型有着良好的可靠性与可重复性 ,可用于对口腔生物膜的各项体外研究。

荷叶、五倍子提取物对口腔细菌及生物膜影响

目的:初步研究荷叶水提取物、乙醇提取物以及五倍子水提取物对口腔细菌及生物膜的影响,探讨两者防龋应用前景。方法:荷叶、五倍子经提取分别得荷叶水提取物、荷叶乙醇提取物以及五倍子水提取物;将自口内分离所得"口腔细菌"接种于BHI平板,并经上述提取物处理后,计数菌落及测量抑菌圈;在载玻片上定植分离得到"口腔细菌",以形成生物膜体外模型,再于实验组分别加入经1∶3∶9浓度梯度稀释后的提取物,培养完成后经结晶紫染色,在显微镜下观察摄像,以同质量分数的蔗糖溶液、蒸馏水及乙醇溶液作为对照。结果:五倍子3个浓度梯度的类药敏实验组,均有明显的抑菌圈,荷叶提取物原液1∶3梯度稀释者有较明显的抑菌圈,且其菌落数与纯水组差异有统计学意义(P<0.05);建立口腔生物膜体外模型,并经显微镜数字摄像系统所摄得图像可见,相比于对照组荷叶水、乙醇提取物及五倍子作用后所形成的口腔生物膜染色均较浅,结构均较稀疏,且其作用随着提取物浓度的增大而增大。结论:荷叶提取物、五倍子可有效抑制口腔细菌;荷叶提取物及五倍子对口腔生物膜形成均有较明显的抑制作用。