缺氧预适应对体外培养神经元的神经保护作用存在一个时间窗

目的本实验采用体外培养皮质神经元研究缺氧预适应对谷氨酸损伤模型的保护作用,同时探索一定缺氧浓度下最佳保护作用的缺氧时间。方法原代培养神经元,确立谷氨酸损伤模型,对培养至第7天的细胞进行8%氧浓度和不同时间的缺氧预适应及谷氨酸损伤,用MTT法检测细胞的存活率。应用SPSS 17.0进行统计学分析。结果 8%O2缺氧4-8 h,皮质神经元谷氨酸损伤模型实验组与对照组相比,存活率提高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 8%O2缺氧4-8 h对谷氨酸损伤模型中的原代体外培养皮质神经元具有保护作用,该保护作用至少可持续6 h。

促红细胞生成素预处理在脑缺血性损伤中神经保护作用的体外研究

目的在体外研究重组人促红细胞生成素（rh EPO）预处理在脑缺血性损伤中的神经保护作用及其合适的剂量范围、时间窗。方法取处于生长稳定期的高纯度原代皮质神经元,分为正常对照组、糖氧夺获（OGD）损伤组、rh EPO预处理组。rh EPO预处理组是在不同时间（OGD损伤前24 h、48 h、72 h）给予不同浓度（0.01 U/ml、0.1 U/ml、1 U/ml、10 U/ml、100 U/ml）的rh EPO,最后以MTT比色法检测存活率,光镜下观察细胞形态变化。结果rh EPO（0.01 U/ml、0.1 U/ml、1 U/ml、10 U/ml）预处理可明显增加OGD损伤的原代皮质神经元的存活率（P〈0.05）,其中当浓度为1 U/ml时保护作用最强（P〈0.05）;rh EPO（1 U/ml）预处理24 h、48 h可明显增加OGD损伤的原代皮质神经元的存活率（P〈0.05）,其中rh EPO预处理48 h的保护作用强于24 h。在光学显微镜下,观察到的细胞形态和数量的变化与以上结果相符。结论 rh EPO预处理对OGD损伤的皮质神经元具有神经保护作用,其有效浓度为0.01～10 U/ml,其中最佳剂量为1 U/ml,其有效时间窗为OGD前48 h或24 h,最佳干预时间窗为OGD前48 h。

天使综合征致病基因UBE3a在大鼠神经元细胞中的克隆和表达检测

目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行酶切构建pEGFP-UBE3a的真核表达重组质粒。用磷酸钙转染方法将重组质粒转染入体外培养的神经元细胞,分别在体外培养8天和14天时通过倒置荧光显微镜观察重组蛋白的表达和定位情况。结果:PCR扩增获得人胎脑组织cDNA文库中UBE3a cDNA全长2559 bp,构建真核表达重组质粒pEGFP-UBE3a成功,经DNA测序与Gen-Bank中的人UBE3a cDNA序列一致。经倒置荧光显微镜观察重组质粒的表达情况,结果显示转染重组质粒的细胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白表达,且UBE3a在早期神经元的细胞质和细胞核中广泛表达,并弥散在轴突和树突,而在成熟神经元细胞核中的表达明显富集。结论:本实验成功构建了pEGFP-UBE3a真核表达质粒,EGFP-UBE3a蛋白在体外培养的神经元细胞中能够有效表达,且随着神经元的成熟逐步向核内富集,为进一步研究UBE3a基因在天使综合征发生发展中的作用奠定了基础。

低能量氦-氖激光照射对体外培养大鼠海马神经元微管结合蛋白表达的影响

目的探讨氦-氖激光照射对体外培养神经元微管结合蛋（MAP2）表达的影响。方法采用无血清细胞培养方法，分离并体外培养新生大鼠海马神经元，并以低能量氦-氖激光对其照射，于培养后14d神经元生长旺盛时期取出各组培养皿内盖玻片进行MAP2免疫学组织化学染色，光镜下观察，拍照计数，与其他对照组比较，观察激光照射对神经元微管结合蛋白（MAP2）表达的影响。结果将氦-氖激光照射组与对照组比较，阳性表达细胞轮廓清晰，照射后阳性表达MAP2的培养神经元数目为（15．85±2．79）个／高倍视野，明显高于对照组[（9．23±2．56）个／高倍视野]的数量，且组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论氦-氖激光照射能促进体外培养新生大鼠海马神经元MAP2的表达。