子宫内膜腺上皮及基质细胞分离、培养作为子宫内膜异位症体外细胞模型的探索

目的 :探索在位子宫内膜腺上皮及基质细胞的分离、培养作为子宫内膜异位症 (EMs)的体外细胞模型。方法 :通过酶解、系列过滤、沉降及贴壁纯化等技术 ,分离、纯化及培养 15份EMs患者的在位子宫内膜腺上皮细胞及其基质细胞 ,并拟传代。结果 :11份标本获得成功 ;每 1g新鲜子宫内膜组织可得到 (8～ 12 )× 10 6个原代基质细胞及 (4～ 8)× 10 6个原代腺上皮细胞 ;基质细胞纯度率可达 95 %以上 ,腺上皮细胞的纯度率约为90 %。基质细胞可以有限的传代 ,腺上皮细胞不能传代。通过改良步骤 ,可提高基质细胞的产量。结论 :在位子宫内膜腺上皮及其基质细胞的分离、培养可作为EMs的体外细胞模型之一。

基于体外细胞模型的太子参安全性与抗氧化活性系统评价

为科学认识和系统评价太子参提取物在细胞水平上的安全性与抗氧化活性,根据PICOS检索策略检索国内外数据库,采用Stata软件进行Meta循证统计分析,共纳入11篇文献18项研究,总样本量为482。Meta分析显示:太子参试验组体外细胞毒性试验结果较对照组差异不显著[SMD=0.22,95%CI(-0.22,0.66),P=0.219>0.05];太子参提取物可显著提高体外试验细胞存活率[SMD=0.96,95%CI(0.15,1.77),P<0.05]和极显著降低细胞凋亡率[SMD=-2.38,95%CI(-3.21,-1.54),P<0.01],并且极显著提升胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力[SMD=1.65,95%CI(0.97,2.32),P<0.01]和极显著降低胞内丙二醛(MDA)含量[SMD=-1.99,95%CI(-2.68,-1.29),P<0.01];对抑制体外红细胞溶血的系统描述结果为阳性,敏感分析结果稳健,发表偏倚弱。基于现有文献显示:太子参提取物在细胞水平上具有良好的安全性和抗氧化活性。

基于非酒精性脂肪肝体外细胞模型对藏药“松蒂”基原植物中6个多酚类化合物的活性评价

目的研究源自“松蒂”基原植物中6个多酚类化合物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)体外细胞模型各项指标及脂滴形成的影响。方法采用SRB法确定各化合物对LO2细胞存活率的影响。化合物预处理LO2细胞24 h后,加入油酸诱导LO2细胞诱导非酒精性脂肪肝细胞模型,检测各组细胞TG、MDA、SOD水平,并采用油红O染色法观察各组细胞内脂滴的形成。结果油酸(200μmol/L)诱导LO2细胞24 h后,模型组细胞内脂滴形成增多,TG水平增多(P<0.01)。药物干预后,山柰酚(25、50μmol/L)及100μmol/L异槲皮苷、没食子酸、白桦林烯酮、芦丁均能降低细胞内TG水平(P<0.05,P<0.01);50μmol/L山柰酚及100μmol/L没食子酸、金丝桃苷、芦丁、白桦林烯酮能提高SOD水平(P<0.05,P<0.01),异槲皮苷(50、100μmol/L)提高SOD水平(P<0.05);异槲皮苷、金丝桃苷、芦丁在50、100μmol/L下能降低MDA水平(P<0.05,P<0.01),50μmol/L山柰酚及100μmol/L没食子酸、白桦林烯酮降低MDA水平(P<0.01),且细胞内红色脂滴形成情况与TG水平变化趋势基本一致。结论“松蒂”类药材中山柰酚、异槲皮苷、没食子酸、金丝桃苷、芦丁和白桦林烯酮均可不同程度减少细胞内TG水平,抑制细胞内MDA水平同时提高SOD水平,并减少细胞内脂滴的形成。

利用体外细胞模型筛选三黄颗粒中有效活性成分研究

目的:基于体外细胞模型(红细胞、HT29和Caco-2细胞)模拟体内细胞对三黄颗粒有效活性成分的特异性吸收的原理,应用高效液相色谱法对三黄颗粒有效活性成分进行分析研究。方法:将一定量的中药复方三黄颗粒与体外细胞混合培养,破碎与复方三黄颗粒结合后的体外细胞,使之释放出与中药三黄颗粒结合的成分,并与三黄颗粒体外指纹图谱比较,筛选出三黄颗粒中可能的的有效成分。结果:三黄颗粒中有10种成分被小肠细胞吸收,13种成分与红细胞结合,经初步筛选6,7-二甲氧基香豆素、黄芩苷、大黄素、甘草酸铵均可能为有效活性成分之一。结论:利用体外细胞模型,可以用于中药复方的物质基础研究。

肺胀2号方对COPD体外细胞模型分泌IL-8、MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1的影响

目的观察肺胀2号方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)体外细胞模型分泌白细胞介素-8(IL-8)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及MMP-9/TIMP-1比值的影响。方法将16HBE细胞悬液分为6组,以1×10^(5)/孔接入6孔细胞培养板于37℃、5%CO_(2)培养箱中孵育,当细胞贴壁生长至60%左右的汇合度时,吸掉旧的培养基后空白组加入完全培养基2.5 mL,CSE组加入2.5%香烟烟雾提取物(CSE)2.5mL,地塞米松组加入CSE与地塞米松混合液2.5 mL,中药1组、中药2组和中药3组分别加入CSE与肺胀2号方混合液(2.5%CSE分别和0.0625、0.125、0.25 mg/mL肺胀2号方混合液)2.5 mL。24 h后光镜观察各组细胞形态、检测细胞存活率及上清液中IL-8、MMP-9、TIMP-1水平及MMP-9/TIMP-1。结果CSE组部分细胞形态变圆,间隙变大,细胞较稀疏,考虑细胞生长受抑制;与CSE组比较,地塞米松组与各中药组细胞生长受抑制情况均改善,有较多细胞恢复到多边形形态,细胞存活率明显升高(P<0.01或0.05),中药2组细胞存活率最高,与地塞米松组比较差异有统计学意义(P<0.05);CSE组IL-8、MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均较空白组明显升高(P均<0.01),TIMP-1较空白组下降不明显(P>0.05);与CSE组比较,地塞米松组及各中药组IL-8水平均降低(P均<0.01或0.05),各中药组MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值也降低(P均<0.01或0.05),但地塞米松组降低不明显(P>0.05)。结论肺胀2号方可以下调IL-8分泌,抑制MMP-9过度表达,改善MMP-9/TIMP-1平衡,推测这可能是本方治疗COPD的一个作用机制。

鸡肠上皮细胞体外模型的构建及应用

鸡肠上皮细胞作为体内更新最快的细胞,具有消化、吸收、分泌等重要的生理功能。细胞体外模型的建立为肠道疾病、营养物质的吸收消化机制及上皮细胞的凋亡、增殖、分化等研究提供了一套快速可靠的方法,为研究生理、营养、疾病控制及其他未知因素提供理想模型。本文对营养性添加、非营养性添加和病原微生物在肠上皮细胞中的研究作用机制进行综述,以期为禽业、兽药改良和研发提供参考。

矽肺纤维化体外细胞模型的建立

目的 根据SiO2 对不同类型细胞的增殖效应 ,建立矽肺纤维化的体外细胞模型。方法 以不同剂量的SiO2 刺激SD大鼠肺泡巨噬细胞 (PAM)及佛波酯 (PMA)诱导分化THP 1(具有PAM特性的人血单核细胞株 )细胞的培养上清液 ,分别作用于中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)和貂肺上皮细胞 (CCL 64) ,采用四唑盐 (MTT)比色法测定其增殖效应 (以A570nm值表示 )。结果 在 0、5 0、10 0、2 0 0、5 0 0 μg/mlSiO2 浓度范围内 ,用体积分数为 5 %的SiO2 刺激的PAM和体积分数为 10 %的SiO2 刺激的PMA primedTHP 1细胞上清液分别作用于CHL和CCL 64细胞 ,均可引起细胞增殖 ,2 0 0、5 0 0 μg/mlSiO2 剂量组与对照组的差异有显著性 ,并存在剂量 -效应关系 (CHL :r1=0 .914 ,P <0 .0 5 ;r2 =0 .980 ,P <0 .0 1。CCL 64:r1=0 .975 ,P <0 .0 1;r2 =0 .95 6,P <0 .0 1)。以体积分数为 10 %的SiO2 刺激PAM的上清液分别作用于CHL和CCL 64,5 0 μg/mlSiO2 组的A570nm值为 :CHL :0 .66± 0 .0 5 ,CCL 64:0 .2 1± 0 .0 4 ,与对照组 (CHL :0 .74±0 .0 4 ;CCL 64:0 .2 6± 0 .0 4 )的差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,均表现为抑制增殖作用。结论 利用体积分数为5 %的SiO2 刺激的PAM上清液和体积分数为 10 %的SiO2 刺激的PMA primedTHP

体外心肌细胞缺氧/复氧模型损伤及参元丹干预的影响

目的:建立体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,观察益气逐瘀组方参元丹(SYD)对模型心肌细胞存活率和细胞损伤程度的影响,以进一步探讨其改善冠心病围手术期心肌损伤的作用机制。方法:体外培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,建立缺氧复氧细胞模型并予分组处理,CCK法检测心肌细胞存活率,酶法检测各组细胞培养上清液中磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:模型组存活率低于正常组(P<0.05),而CPK、LDH释放量高于正常组(P<0.05);SYD含药血清组、PDTC+SYD组以及PDTC+空白血清组细胞存活率均高于模型组和空白血清组(P<0.05),细胞酶释放量均低于模型组和空白血清组(P<0.05),此3组间的数据比较,差异不具有统计学意义。结论:参元丹能够提高心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的细胞存活率,降低细胞损伤程度;其机制可能通过抑制核因子NF-κB及其介导的氧化应激和炎性反应降低细胞损伤;提示参元丹可能具有围手术期心肌损伤的保护作用。

食道鳞状上皮细胞癌转移体外细胞模型的建立

目的建立一个适宜的食道鳞状上皮细胞癌(ESCC)体外转移研究模型。方法将ESCC细胞系HK2置于未处理细胞培养皿中培养、传代,筛选出具有非锚定依赖生长能力的细胞株。以体外侵袭实验,软琼脂克隆形成实验比较、验证筛选细胞系与母代细胞的侵袭能力和非锚定依赖生长能力。利用比较蛋白质学的方法分析筛选细胞与母代细胞间的蛋白表达图谱差异。结果成功筛选出具有较高转移能力并可传代培养的HK2-AD细胞株。HK2和HK2-AD细胞侵袭至小室膜反侧的细胞数分别为(16.7±2.5)和(28.7±7.4),软琼脂集落生成实验表明,HK2和HK2-AD细胞形成的集落数分别为(16.8±3.2)和(25±5.1),差异均有统计学意义(P<0.05)。HK2-AD细胞中一些与细胞运动、细胞无氧代谢及抑制凋亡相关的蛋白质分子表达明显上调。结论利用肿瘤细胞的非锚定依赖生长特性建立了一个高转移能力、呈三维生长的HK2-AD细胞株,为ESCC肿瘤转移机制研究和药物筛选提供了一个有价值且易于操作的食道癌转移体外细胞模型。

子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞体外蜕膜化模型的改良

目的:通过对目前常用的子宫内膜基质细胞体外蜕膜化模型进行改良,建立更准确和高效的子宫内膜异位症体外细胞模型,了解子宫内膜异位症患者在位内膜的蜕膜化能力,进而研究子宫内膜异位症与不孕的关系。方法:将子宫内膜异位症患者在位内膜细胞随机分为三组,第一组常规用E2(10nM)和P4(1μM)作用96 h(EP1组),第二组常规用E2(10nM)、P4(1μM)作用14 d(EP14组),第三组改良组用E2(10nM)、P4(1μM)和8-溴-cAMP(0.5mM)作用96 h(EPC组),收集细胞后测定PRL(催乳素)和IGFBP1(胰岛素样生长因子结合蛋白1)的mRNA水平。结果:EPC组作用96 h后细胞形态发生明显变化,PRL和IGFBP1明显高于EP组。结论:与常规模型相比,8-溴-cAMP联合P4、E2能明显促进子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞体外蜕膜化进程,使在位内膜体外蜕膜化能力明显优于常规体外模型组。

乙型肝炎病毒假病毒体外感染树鼩原代肝细胞模型的建立

目的:建立乙型肝炎病毒假病毒(HBVpp)体外感染树鼩原代肝细胞(PTH)模型。方法:通过肝脏原位两步灌注法分离PTH并对其冻存方法进行优化,通过共转染293T细胞生产基于慢病毒包装系统的HBVpp并考察其感染的种属和组织特异性。结果:通过肝脏原位两步灌注法分离了PTH,并优化了PTH冻存液的配方;包装的HBVpp具有与HBV真病毒类似的感染种属和组织特异性。结论:该模型的建立对深化HBV进入肝细胞机制的研究具有重要意义。

体外消化/Caco-2细胞模型评价面粉锌生物利用率

采用体外消化/Caco-2细胞模型对10种小麦粉进行锌生物利用率比较。以锌吸收率(Caco-2细胞中的锌含量占加入到细胞的面粉消化液总锌量比例)反映锌生物利用率(Zn bioavailability,Zn BV)。发现不同面粉间锌生物利用率差异具有统计学意义,出粉率78%的安阳中优9507是面粉锌吸收率和可吸收锌量都高的品种,它将进入下一步人体实验进行营养功效的验证。

小鼠体外T淋巴细胞模型的优化及在中药筛选中的应用

目的 :优化MTT法测定小鼠体外T淋巴细胞的实验条件 ,并对 6种种子类中药的活性进行筛选。方法 :无菌分离小鼠脾脏 ,制备脾淋巴细胞 ,与待测药物预孵 1h后 ,加入刀豆蛋白A刺激剂继续培养 ,总计培养 72h后收获细胞 ,进行MTT染色 ,以酶标仪进行测定。结果 :应用MTT法 ,在 (2～ 3 0 )× 10 9/L范围内细胞密度与A值呈线性正相关 ,优化后的测定条件为细胞悬液中加入 10 μl的ConA ,孵育 72h后再加入 2 0 μl的MTT ,继续孵育 4h ,测定波长为 5 12nm。结果表明 ,这 6种种子类中药对小鼠T淋巴细胞均有一定的抑制作用。结论 :用于进行中药的抑制T淋巴细胞活性的体外筛选。

欧芹根总黄酮对体外脂肪肝细胞模型脂联素及其受体表达的影响

目的建立L-02脂肪肝细胞模型,观察欧芹根总黄酮对脂联素及其受体表达的影响。方法用游离脂肪酸(FFA)溶液建立L-02脂肪肝细胞模型,筛选最佳药物干预浓度。分化成熟的细胞分空白对照组、模型对照组、药物治疗组分别干预,测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及丙二醛(MDA)水平;qRT-PCR、WB检测细胞中脂联素(ADPN)、脂联素受体(ADIPOR-2)蛋白表达。结果筛选出的药物最佳干预浓度为50μg/mL。药物治疗组的TC、MDA水平显著低于模型组,且差异有统计学意义(P<0.05)。与非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型组相比,ADPN、ADIPOR-2在药物治疗组中表达显著升高,且差异有统计学意义(P<0.05),药物治疗组能显著提升模型组的ADPN、ADIPOR-2水平。结论欧芹根总黄酮能对NAFLD起到良好的治疗作用,且呈剂量依赖性。欧芹根总黄酮的起效机制与激活脂联素及其受体相关。

加味茵陈汤含药血清制备及其对体外肝细胞损伤模型的作用

目的:探索加味茵陈汤含药血清的制备方法及其对体外培养大鼠肝细胞损伤模型的作用。方法:制备加味茵陈汤(茵陈、栀子、大黄、三七、丹参、赤芍、生地、丹皮、白芍、柴胡)汤剂(2 g生药/ml);大鼠中药灌胃(30 g/kg,2次/d,连续3 d)制备药物血清;改进Seglen胶原酶原位灌注分离大鼠肝细胞,培养体系中加入D-氨基半乳糖(25μg/ml)诱导肝细胞损伤模型,以不同浓度(5%、10%1、5%)加入药物血清培养24 h,于培养1、36、1、2和24 h取上清液测定ALT、AST和LDH,同步测定肝细胞的MTT反应,并于倒置相差显微镜下观察肝细胞形态变化。结果:从各时间点观察,随含中药血清浓度的增加,肝细胞培养上清液ALT、AST、LDH水平逐渐下降,10%药物血清与15%药物血清剂量组之间在各时间点比较无统计学差异(P>0.05),其余各组比较统计学差异均有显著性(P<0.05),培养肝细胞增殖活性则呈升高趋势。结论:大鼠的含中药血清可以降低肝细胞损伤模型AST、ALT及LDH等指标,增加细胞活性指标,随浓度增加而作用增强。

体外消化/Caco-2细胞模型分析发酵对面粉铁生物利用率的影响

中国居民膳食以谷物为主食,谷物中铁吸收率低是造成营养性贫血的主要原因,适当的加工方式可缓解谷物中植酸、多酚等物质对铁生物利用率(Fe bioavailability,FeBV)的影响。为考察酵母发酵对面粉FeBV的影响,采用体外消化/Caco-2细胞模型。结果表明,面团在发酵后pH值呈下降趋势,酸度呈上升趋势;多酚、植酸含量降低,植酸酶活性升高,以上各指标在发酵前后差异均具有统计学意义(P<0.05)。发酵后面粉样品的FeBV增加约5%~38%,大多数面粉FeBV发酵前后比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:发酵可降低面粉的pH值,增加酸度,有利于面粉多酚和植酸的降解以及植酸酶活力的升高,可有效提高面粉FeBV。

耳蜗微血管内皮细胞通透性体外模型的研究

目的 建立豚鼠耳蜗微血管内皮细胞通透性体外模型。方法 采用活体组织细胞分离及培养技术 ,获取培养的豚鼠耳蜗微血管单层融合内皮细胞 ,免疫组化法检测内皮细胞标志物Ⅷ因子鉴定培养细胞的性质及其纯度 ,小池技术构建通透模型 ,以脑微血管内皮细胞通透模型为阳性对照、肺微血管内皮细胞通透模型为阴性对照和无内皮细胞的小池为空白对照 ,12 5I标记牛血清白蛋白检测本模型的通透性特点。结果 ①耳蜗血管纹组织块培养后 2d ,边缘即有细胞生长 ,之后细胞数量逐渐增多 ,10d左右细胞增殖成数个细胞集落 ;纯化后 ,单个培养细胞一般呈梭形 ,传代细胞培养 8d后 ,细胞增殖形成片状单层 ,紧密排列 ,显微镜下呈现培养内皮细胞典型的“铺路石”样外观。免疫组化检查 ,95 %以上的培养细胞胞浆有桔黄色着色 ,呈阳性反应 ,而对照组无此着色。②实验组对牛血清白蛋白的通透性大于阳性对照组 (P <0 0 5 ) ,小于阴性对照组和空白对照组 (P <0 0 1)。结论 建立的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞通透性体外模型适合于耳蜗微血管内皮细胞通透性的研究 ,为今后研究血迷路屏障通透性及其调控机理奠定了良好的基础。

奶牛子宫内膜细胞体外培养及应用研究概况

子宫内膜细胞体外培养技术在研究动物子宫内膜生理功能、繁殖障碍疾病机制及治疗药物筛选等过程中具有重要的作用和意义。论文就国内外有关奶牛子宫内膜细胞体外培养技术中常用的分离、纯化和鉴定等方法以及该细胞体外模型相关应用进行综述,为探索简便、高效的奶牛子宫内膜细胞体外培养方法及国内有关奶牛子宫内膜生理病理的分子细胞学研究提供参考。

子宫内膜异位症体内、外模型的建立及应用

子宫内膜异位症病因及发病机制已成为妇产科领域研究热点。其体内、外模型的建立及应用是探索子宫内膜异位症的发病机制、疾病发展以及治疗措施的重要途径。本文就常用的子宫内膜异位症体内、外模型的建立及应用作一综述。