反复熔铸Ni-Cr烤瓷合金体外细胞毒性实验(MTT法)

目的:初步评价反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同熔铸次数Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液培养小鼠结缔组织成纤维细胞(L-929)的结果,从而对反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性进行初筛。结果:各浓度实验组细胞生长形态良好、细胞毒性级为0～1级;经过2～5次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液、不同培养时间的A492均值与经过1次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金相应A492均值无显著性差异(P>0.05)。结论:初步认为Ni-Cr烤瓷合金经过1～5次熔铸后具有较好的生物相容性。

不同浸提条件对医疗器械体外细胞毒性试验结果的影响

目的探讨不同浸提条件(浸提24、72 h)对医疗器械体外细胞毒性试验中细胞生长与细胞毒性结果的影响。方法采用含血清MEM细胞培养液作为浸提介质,按照GB/T 16886.12-2017推荐的浸提比例,将空白对照品、阴性对照品及5种不同医疗器械常用材料样品在(37±1)℃条件下分别浸提24、72 h,依据GB/T 16886.5-2017中的MTT法进行试验。比较浸提24、72 h对细胞生长与细胞毒性结果的影响。结果与浸提24 h比较,浸提72 h后空白对照组吸光度偏低,相对偏差为-3.0%,差异无统计学意义(P>0.05);被检样品试验结果显示,样品1、样品2有细胞毒性,样品3和样品5无细胞毒性,浸提24、72 h结果一致,相对增殖率(RGR)变化小;样品4有细胞毒性,但浸提72 h后RGR明显降低,降低幅度为93.7%,提示有毒物质溶出量增多。结论结合显微镜观察细胞形态,确认延长浸提时间至72 h对细胞生长的影响可以忽略。对于被检样品组,延长浸提时间至72 h各样品RGR呈降低趋势。对于RGR>80%、<60%的医疗器械样品,浸提24、72 h的评价结果一致,评价风险较小。而对于RGR处于临界值(60%~80%)的医疗器械样品,浸提24、72 h的结果可能不一致,评价风险较大,尤其是长期接触人体的医疗器械,建议采取浸提72 h的条件进行体外细胞毒性试验,以降低评价风险。

MTT法体外药敏实验预测宫颈癌细胞药物敏感性的初步探讨

背景与目的:近年来,宫颈癌新辅助化疗逐渐受到重视,应用广泛,但不同个体对不同化疗药物敏感性不同。本研究通过宫颈癌体外药敏实验来预测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,为临床筛选对宫颈癌相对敏感的化疗药物提供参考依据。方法:采用MTT法测定9种药物对32例宫颈癌患者的原代培养癌细胞的抑制水平。结果:①宫颈癌细胞对9种药物的敏感性依次为:力扑素>泰素>卡铂>异环磷酰胺>鬼臼乙叉甙>氟尿嘧啶>顺铂>博来霉素>环磷酰胺,力扑素、泰素和卡铂对肿瘤细胞的平均抑制率(IR)较高,分别为56.56%、55.66%和46.81%,与其它药物相比,差异有显著性(P<0.05)。②对Ⅰb1期宫颈癌细胞,泰素、力扑素和卡铂IR值较其它药物高,分别为58.71%、53.00%和49.25%;对Ⅰb2期宫颈癌细胞,力扑素和泰素的IR值较其它药物高,分别为65.26%和50.06%。③对于宫颈中分化鳞癌细胞,泰素、力扑素和卡铂IR值较其它药物高,分别为52.01%、49.21%和40.24%;对低分化鳞癌细胞,力扑素、泰素和卡铂的IR值较其它药物高,分别为61.16%、60.62%和48.75%。结论:①MTT法作为一种应用广泛的药敏实验方法,对宫颈癌新辅助化疗筛选敏感药物、选择临床化疗方案有一定的参考价值。②力扑素、泰素和卡铂对宫颈癌细胞较其它药物敏感。

MTT法在榄香烯乳对人膀胱癌T_(24)细胞体外实验中的应用

用改进的MTT法测定榄香烯乳对体外培养的人膀胱癌T24细胞的抑制作用。结果：榄香烯乳能抑制T24细胞增殖，且存在剂量一时间依赖性；IC50值24h为3560mg／L，48h为29．38mg／L，分别为相同条件下MMC的34．7倍和58．3倍。结论：榄香烯乳能明显抑制膀胱癌T24细胞的增殖，提高剂量、缩短用药间隔时间、适当延长作用时间可达到与MMC相同的效果。经改进的MTT法简便、迅速一干扰因素少。值得推广应用。

冬凌草醇提物体外肝肾细胞毒性的MTT法测定

目的用MTT法评价冬凌草醇提物及水提物对HL-7702细胞和HEK-293细胞的毒性。方法采用MTT法进行研究。结果 HL-7702细胞分别经柴胡皂苷d、冬凌草醇提物和水提物处理24,48 h后,柴胡皂苷d的IC50分别为3.42,1.98μg/ml,冬凌草醇提物的IC50分别为295.167,78.349μg/ml,冬凌草水提物的IC50分别为4 357.310,2 134.194μg/ml。HEK-293细胞分别经马兜铃酸I、冬凌草醇提物和水提物处理24,48 h后,测得马兜铃酸I的IC50为34.708,15.274μg/ml,冬凌草醇提物的IC50为224.544,106.292μg/ml,冬凌草水提物的IC50为2 252.899,1 153.267μg/ml。结论冬凌草醇提物和水提物的体外肝肾细胞毒性均不明显。

改良MTT法在鱼类细胞毒性实验中的使用条件

文章利用斑点叉尾鮰鱼卵巢细胞(CCO)、鲤鱼上皮癌细胞(EPC)、草鱼肾细胞(CIK)探讨改良四噻唑蓝(MTT)比色法在测定污染物对鱼类细胞急性毒性实验中的最佳条件。通过实验发现其最佳实验条件为570nm波长下,MTT作用4h,MTT终浓度1mg/mL,最佳接种量的确定因每种细胞的特性而不同,生长速度快的细胞接种量较少。

四甲基偶氮唑盐法评价牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的体外细胞毒性

背景:越来越多的新型材料被纳入口腔领域应用的视野,对生物材料进行生物相容性评价是进入临床试验前的重点研究内容。目的:通过体外细胞毒性实验评价自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的生物相容性。方法:根据ISO标准,采用四甲基偶氮唑盐比色法行体外细胞毒性实验,阴性对照组为DMEM培养液,阳性对照组为含有0.1%苯酚的DMEM培养液,实验组为受试材料的浸提液。测试人牙龈成纤维细胞在牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料浸提液中培养1,3,5d的吸光度值,观察细胞形态变化,计算细胞相对增殖率,判断细胞毒性的级别。结果与结论:实验组体外细胞毒性实验吸光度值均与阴性对照组差异无显著性意义(P>0.05),与阳性对照组差异有显著性意义(P<0.01),自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料体外细胞毒性级别为0～1级,初步认为其具有良好的生物相容性。

纤维矿物粉尘体外细胞毒性及防治的实验研究

目的 :评价工业上常用纤维矿物粉尘表面游离OH-的毒性并用有机弱酸对其进行减毒处理 ,探讨其损伤机制。方法 :以细胞死亡率、乳酸脱氢酶 (lactatedehydrogenaseLDH)、超氧化物歧化酶 (superoxidedismutaseSOD)、丙二醛 (malondialdehydeMDA)为毒性指标 ,观察纤维矿物粉尘对肺泡巨噬细胞的毒性 ,并用低浓度的有机弱酸处理各粉尘 ,观察对人红细胞 (RBC)的溶血率及MDA的变化。结果 :不含OH-的斜发沸石、纤维硅灰石未表现出细胞毒性 ,纤维坡缕石及纤维水镁石因含不同的OH-而表现出不同的细胞毒性。用低浓度的有机弱酸处理纤维坡缕石及纤维水镁石后能显著降低其对RBC的毒性。结论 :纤维矿物粉尘的细胞毒性与其表面OH-呈正相关 ;

MTT法检测CIK细胞的体外杀瘤活性

目的 观察CIK (cytokineinducedkiller)细胞的体外杀瘤活性。 方法 以LAK (lym phokineactivatedkiller)细胞作对比 ,用MTT法测定并比较CIK细胞与LAK细胞的体外杀瘤活性。 结果 CIK细胞的体外杀瘤活性明显优于LAK细胞 ,杀伤率分别为 2 9%和 15 %。结论 CIK细胞是一种具有较强杀伤活性的免疫效应细胞 。

MTT法肿瘤细胞体外药敏试验影响因素探讨

肿瘤细胞体外药敏试验是目前肿瘤研究中的一个重要课题,对指导临床化疗方案,实现个体化,提高疗效具有现实意义。自60年代开始,人们建立了很多方法。噻唑蓝(MTT)法是近年新发展起来的一种用于体外恶性肿瘤细胞药物敏感试验。具有简单快速,特异性强等优点。本文旨在对MTT法的影响因素作一些探讨,以摸索最佳实验条件,更好为临床服务。

抗卵巢癌细胞膜抗体对卵巢癌细胞体外细胞毒性试验及荷瘤小鼠的体内聚集性的实验研究

目的 :探讨抗卵巢癌细胞膜抗体作为放射免疫治疗载体的可能性 ,及对靶细胞体外裸鼠体内杀伤的相对特异性。方法 :采用补体介导细胞毒性试验 (MTT法 )测定抗卵巢癌细胞膜抗体对靶、非靶细胞比毒性 ;建立 BAL B/ C- m u裸鼠荷人卵巢癌模型 ,用 SPECT显像及病理检查分析 1 31 I标记抗卵巢癌细胞膜抗体在荷人卵巢癌裸鼠的聚集性。结果 :抗卵巢癌细胞膜纯化抗体比抗血清对卵巢癌靶细胞显示了更强的细胞毒作用 ,并且都显示了浓度梯度依赖性。抗卵巢癌细胞膜抗体对靶、非靶细胞比毒性显示了相对特异性 ,对卵巢癌细胞杀伤率高于非靶细胞 (宫颈癌、肝癌、胃癌、O型白细胞 )。并且呈时间依赖关系。1 31 I标记抗卵巢癌细胞膜抗体对荷人卵巢癌裸鼠腹腔注射 3d后 ,肿瘤区即有明显聚集 ,一直持续至第 8天。注射后第 8天 ,行病理检查 ,肉眼见有局部坏死淤血区 ;镜下见癌区组织大片状坏死 ,坏死区可见淋巴细胞浸润。结论 :抗卵巢癌细胞膜抗体对体内、体外卵巢癌细胞有相对特异性靶向性 。

两种体外细胞毒性检测方法的比较研究

目的比较两种常用的细胞毒性检测方法在医疗器械生物学评价中的相关性.方法分别采用MTT比色法和细胞增殖度法,在37℃条件下,将五种医疗器械/生物材料的浸提液分别与小鼠成纤维细胞(L-929)接触2天和2,4,7天,比较材料对细胞的毒性影响.结果 5种不同的材料浸提液分别表现出不同程度的细胞毒性反应(0～2级).将MTT比色法与细胞增殖度法(2天)的实验数据进行相关性分析,显示两者之间具有良好的相关性(R=0.977).结论 MTT比色法由于其检测所需的细胞量相对较少,试验步骤相对简便、检测周期短,因此具有一定的优越性,是个值得推荐的细胞毒性检测方法.

应用MTT法分析青蒿素对人癌细胞系Hella细胞的体外细胞毒作用

MTT法是一种快速、简便的能够半自动化定量分析细胞增殖及药物细胞毒作用的方法.青蒿素是从天然植物青蒿中提取的有效成分,有关文献曾报道了青蒿素的一些生物活性[1].为了探讨青蒿素的抗癌活性,我们通过体外MTT法分析检测了青蒿素对体外培养的人癌细胞系Hella细胞的细胞毒效应,现报告如下.

MTT法检测CEM细胞体外药敏性及抗药性的试验研究

目的采用MTT法研究肿瘤细胞CEM的体外药敏性，为多药耐药及耐药逆转提供实验依据．方法以不同浓度的As_2O_3作用于CEM细胞常规培养，用MTT法测定其IC50，结果不同浓度的As_2O_3对CEM的抑制及诱导凋亡的作用不同．结论As_2O_3能明最诱导CEM细胞凋亡．且MTT法检测细胞毒性周期短，灵敏性强，准确率高．

体外细胞培养技术评价实验动物塑料笼具的毒性

用塑料薄片直接浸渍和直接接触两种体外细胞培养相结合方式,进行实验动物塑料笼具的细胞毒性试验,并作扫描电镜观察。钙塑盆和再生塑料盆均有明显毒性,塑料笼具有1/4样品表现轻微毒性。扫描电镜观察表明,塑料的毒性强弱直接影响细胞表面的超微结构损伤程度。

转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞特异性杀伤淋巴瘤的体外实验

目的 探讨转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞产生抗淋巴瘤的特异性细胞免疫反应。方法 采用人骨髓来源的髓系前体细胞,在人细胞因子IL-4、GM-CSF和INF-α诱导下,在体外生成大量树突状细胞。将制备好的含有IgVH1核酸质粒,用脂质体法转染树突状细胞。转染成功的树突状细胞与外周血T淋巴细胞共培养,激活特异性CTL细胞,与阳性表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞反应,用3H-TdR掺入法观察CLLs对瘤细胞的特异性杀伤效应。结果 树突状细胞能够用脂质体方法转染IgVH1核酸质粒,并且有效递呈给外周血T细胞,对表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞产生特异性免疫杀伤活性,与对照组相比差异有显著意义（P<0.01）。结论 体外诱导扩增的 DC能够转染 IgVH1核酸质粒,体外激活T淋巴细胞,产生特异性细胞毒效应。

乙型肝炎病毒特异性细胞毒性T细胞体外诱导的实验研究

为了了解乙型肝炎病毒特异性抗原多肽体外诱导的特异性细胞毒性T细胞(CTL)的体外增殖功能,细胞表型及杀伤机制,我们对三组人群的外周血单个核细胞在体外进行诱导和实验研究,报告如下。

血清药理学方法体外实验系统的血清添加量问题

为了解不同血清添加对体外培养细胞系的影响 ,采用MTT法分别检测含红参、黄芪血清不同添加量对胚鼠皮肤成纤维细胞 (3T3)增殖的影响。结果 :含红参血清在与血浓度相等的条件下有明显的抑制细胞增殖的作用 ,延长培养时间在较低添加量时也呈现抑制作用 ;含黄芪血清在低血清添加量时对细胞的增殖呈促进作用 ,在高添加量下呈抑制作用。提示 :在体外反应系统中 。

纳米羟基磷灰石-氧化锆复合陶瓷体外细胞毒性研究

目的 :为今后将纳米羟基磷灰石 氧化锆复合陶瓷应用于口腔种植修复 ,先对该材料进行体外细胞毒性试验 ,评价其初步生物安全性。方法 :体外培养L92 9小鼠成纤维细胞用不同材料的浸提液培养 1、4、7天 ,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化 ;用四氮唑盐比色法 (MTT)检测 ,计算细胞相对增殖度 ,用六级毒性分类法评级。结果 :培养期细胞贴壁生长 ,形态良好 ,随着培养天数增加细胞大量增殖 ,毒级为 0～ 1级。结论 :初步证实了该材料具有人体应用的生物安全基础 ,无细胞毒性。

纳米Ag-SiO_2聚氨酯的体外细胞毒性评价

背景:为改善聚氨酯材料的抗菌性能,前期研究中合成了纳米Ag-SiO2聚氨酯材料。目的:比较7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料的体外细胞毒性。方法:将纳米Ag-SiO2与聚氨酯以熔融共混方式制备成含纳米Ag-SiO2,质量分数分别为0,0.5%,1.0%,1.5%,2.0%,2.5%,5.0%的聚氨酯材料。以上述7种聚氨酯材料浸提液、高密度聚乙烯浸提液(阴性对照)、0.1%苯酚液浸提液(阳性对照)分别培养L929细胞24,48,72h后,并设置试剂对照(含体积分数10%胎牛血清的RPMI1640液体培养基)和空白对照(不加细胞,只加含体积分数10%胎牛血清的RPMI1640液体培养基)。采用MTT比色法定量检测各组细胞相对增殖率,并进行毒性反应分级;同时在显微镜下观察细胞形态。结果与结论:7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料组、试剂对照组、阴性对照组细胞贴壁良好,形态正常,胞体丰满,胞质、核质分布均匀,细胞相对增殖率均大于80%,毒性反应分级均为1级,且随着纳米Ag-SiO2质量分数的降低,体外细胞毒性渐小、生物相容性更好。随培养时间延长,阳性对照组细胞相对增殖率逐渐降低,72h后细胞相对增殖率降至8.7%,与其他组比较差异有显著性意义(P<0.05),细胞萎缩、变圆、漂浮、片状脱落。表明7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料均具有良好的体外细胞相容性,毒性反应分级均为1级,符合医用材料体外实验要求。