抗菌药物体外联合药物敏感性试验方法

近年来,多重耐药菌(MDR)日益流行,但相关治疗方法有限,抗菌药物相互作用相关研究成为热点。体外联合药物敏感性试验可以判断2种及以上抗菌药物是否有协同作用,为临床联合使用抗菌药物提供参考。目前,临床常用体外联合药物敏感性试验方法有时间-杀菌曲线(TKA)、棋盘稀释法(CB)、E试验和纸片法。文章就上述方法进行综述,为临床应用提供参考。

ATP生物发光测定白血病细胞体外药物敏感试验

ＡＴＰ生物发光测定白血病细胞体外药物敏感试验赖启明，金宝翠，刘立华（南京铁道医学院附属医院血液科南京２１０００９）如何能在体外短期内通过药物敏感试验选择对白血病细胞有最大杀伤力的药物，是多年来临床上不断探索的问题。常用的体外药敏试验有：集落法、活细胞...

卵巢恶性肿瘤体外药物敏感试验及其临床意义

目的：探讨卵巢恶性肿瘤体外药物敏感试验的临床意义。方法：采用四氮唑蓝显色反应药敏分析法（ MTT）检测 60例卵巢恶性肿瘤组织（Ⅰ 期 8例、Ⅱ 期 2例、Ⅲ期 22例、Ⅳ期 1例、复发 27例）对化疗药物的敏感性。结果：体外试验单药对肿瘤的中位抑制率为：泰素 61.5％、表阿霉素 52.4％、卡铂 42.1％、平阳霉素 33.5％、长春新碱 10.7％。联合用药的中位抑制率为： VBP(长春新碱＋平阳霉素＋卡铂 )79.9％、 VAP(长春新碱＋表阿霉素＋卡铂 )75.3％。 VBP、 VAP方案对上皮性卵巢癌的中位抑制率分别为 77.3％和 71.0％。初治术后残留灶≤ 2 cm者中 26例可评价，体外试验与临床疗效的符合率为 84.6％。复发术后残留灶≤ 2 cm者中 15例可评价， 10例使用体外敏感药物进行化疗，术后 1年生存率 80.0％， 5例患者体外试验不敏感，术后随意用药， 1年生存率 37.5％（ P >0.05）。术后残留灶 >2 cm者， 7例使用体外敏感药物，仅 1例部分缓解。根据药敏结果， 9例上皮性卵巢癌使用 VBP方案化疗， 3年生存率 66.7％， 5例使用 VAP方案者 3年生存率 53.3％。结论：体外药物敏感试验对指导临床化疗有一定作用， VBP和 VAP方案对上皮性卵巢癌有潜在疗效，值得进一步探讨。

阿霉素—磷酸钙骨水泥缓释体系的制备及体外药物释放试验

目的 以磷酸钙骨水泥(CPC)为载体,制备阿霉素—磷酸钙骨水泥药物缓释体系,观察其体外药物释放情况。方法 将阿霉素(ADM)包埋在磷酸钙骨水泥中,固化后的骨水泥进行体外药物溶出试验,用荧光光谱法研究药物在37℃模拟体液中的释放情况。结果 ADM可从载药磷酸钙骨水泥中缓慢释放,周期在1个月以上,药物的释放速度和浓度与CPC的药物包埋量有关,药物释放基本符合Higuchi等所建立的模型。结论 以CPC为载体,对ADM进行适当的包埋,可制备稳定的药物缓释体系,阿霉素—磷酸钙骨水泥缓释体系具备有修复骨缺损和药物治疗的双重功能。

4种肺炎链球菌体外药物敏感性试验板条性能比较

目的比较4种肺炎链球菌体外药物敏感性试验板条检测结果的一致性。方法以浓度梯度法为对比方法。采用美国BD公司Phoenix100 SMIC板条(简称BD-SMIC)、法国生物梅里埃公司Vitek 2 Compact GP68板条(简称Vitek2-GP68)、珠海迪尔生物工程有限公司链球菌板条(简称DL-STREP)和温州康泰生物科技有限公司链球菌板条(简称KT-STREP)进行体外药物敏感试验检测。采用分类一致性(CA)、基本一致性(EA)、极重要差异(VMD)和重要差异(MD)4个参数对体外药物敏感性试验结果进行评价。结果青霉素MD值受解释标准的影响较大。4种板条中参与比对的其他药物(红霉素、复方磺胺甲噁唑、头孢噻肟、头孢曲松、美罗培南、克林霉素、左氧氟沙星、万古霉素、利奈唑胺)结果一致性较好,均达到了可接受标准(EA≥90%、CA≥90%、VMD<3%、MD<3%)。结论除青霉素外,4种板条的体外药物敏感性试验结果一致性较好。

阿萨希毛孢子菌与西弗射盾子囊霉的实验室鉴定与体外抗真菌药敏特点分析

目的探讨阿萨希毛孢子菌与西弗射盾子囊霉的实验室鉴定与体外抗真菌药敏特点,为临床用药、准确鉴定和流行病学研究提供依据。方法收集2017年1月—2022年9月广东省人民医院临床分离的2种少见酵母样真菌,其中阿萨希毛孢子菌54株,西弗射盾子囊霉23株,复苏后进行形态学鉴定、生化鉴定和质谱鉴定,同时采用FUNGUS-3 MIC法测定5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑的最小抑菌浓度(MIC)。结果阿萨希毛孢子菌主要感染65岁以上人群(46.30%),感染部位以创面感染(27.78%)与尿路感染为主(22.22%),主要分布于外科(35.19%)和内科(35.19%);而西弗射盾子囊霉感染患者主要以18~40岁(39.13%)和41~65岁(47.83%)两个年龄段为主,感染部位以耳道为主(78.26%),分布于耳鼻喉外科病区(60.87%)和耳聋专科门诊(26.09%);在形态学鉴定方面,2种真菌菌落均为白色凸起,呈镶嵌生长,其中阿萨希毛孢子菌生长速度快于西弗射盾子囊霉,菌落革兰染色可见关节孢子、关节菌丝、真假菌丝及芽生孢子,而西弗射盾子囊霉可见分枝分隔菌丝和单细胞、卵圆形的芽生孢子。在生化鉴定方面,阿萨希毛孢子菌尿素酶阳性,可水解七叶苷,同化多种糖类化合物,而西弗射盾子囊霉尿素酶阴性、不水解七叶苷,但可同化多种碳水化合物。微生物质谱对阿萨希毛孢子菌和西弗射盾子囊霉的鉴定率分别为96.30%和91.30%,具有良好鉴定效果;在体外药敏结果方面,两种真菌对5-氟胞嘧啶均表现出高MIC值,其中54株(100%)阿萨希毛孢子菌MIC值均≥4μg/mL,23株(100%)西弗射盾子囊霉MIC值均≥4μg/mL;同时也需警惕2种真菌对氟康唑出现高MIC值的情况,其中7株(12.97%)阿萨希毛孢子菌MIC值均≥4μg/mL,16株(69.56%)西弗念珠菌MIC值≥16μg/mL;两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑则整体上表现出较低的MIC值(≤2μg/mL),表现出较好的体外活性。结论阿萨希毛孢子菌和西弗射盾子囊霉的实验室鉴定与体外药敏结果具有不同特点,对其实现准确鉴定和进行抗真菌药敏试验,对临床用药、实验室鉴定和流行病学的研究具有重要意义。

临床实用的新思路和新方法:体外血液生命系统药物治疗个体化试验

目的建立体外静脉注射药品测试系统,以确定药物注射后是否引发血液中快速先天免疫炎症反应,保证避免可以致死的天然免疫炎症反应的发生。方法采用体外血液生命系统药物治疗个体化试验,设计为三组:新药实验组:0.2毫升新药加到0.6枸橼酸抗凝的新鲜正常人全血中;阳性对照组:0.2毫升(热灭活)大肠杆菌悬液(浓度为6×109),加到0.6毫升枸橼酸抗凝的新鲜新鲜正常人全血中;阴性对照组:0.2毫升生理盐水加入新鲜的0.6毫升枸橼酸抗凝全血中。充分混匀,37℃孵育1小时,2000转/分离心5分钟;测定与统计各组IL-8/IL-10和IL-8/DARC指标,按上述公式,求出新药实验组和阳性对照组的激活率(药物的影响率)。结果根据新药实验组和阳性对照组的激活率的比较,可判定新药是否具有免疫原活性。结论此测试系统操作简单,只需清洁操作,不需无菌操作,也不需加人工培养液,但注意点是要新鲜血,采血后应尽快做实验,而且必须是枸橼酸抗凝,不能灭活补体系统,也就是说不能用EDTA抗凝,否则血液失去生命信息完整的网络关系。只要认真按以上要求,细心认真操作,一定能成功。此创新方法对疾病治疗研究有帮助。

4种抗真菌药物对近平滑念珠菌复合群的体外药敏试验结果分析

目的:评价4种抗真菌药物对近平滑念珠菌复合群的抗真菌体外药物敏感性试验结果,为临床治疗、真菌耐药监测和流行病学研究提供参考。方法:收集2020年1月~2022年7月期间本院278例侵袭性真菌感染患者临床分离的非重复近平滑念珠菌复合群278株,并采用分子测序技术进行复核。根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)更新的M59和M60指南,通过ATB FUNGUS3法测定两性霉素B、伏立康唑、氟康唑和伊曲康唑的最低抑菌浓度(MIC),并计算抑制50%菌株的MIC值(MIC_(50))、抑制90%菌株的MIC值(MIC_(90))、MIC值几何均数(GM)、野生型(WT)菌株或敏感菌株占比。结果:278株受试菌株中,近平滑念珠菌213株(76.62%),似平滑念珠菌43株(15.47%),拟平滑念珠菌22株(7.91%);病原菌主要分离自创面分泌物(85株,30.58%),且在66岁以上人群中更为常见(128例,46.04%);患者主要分布于外科病区(89例,32.01%)、内科病区(79例,28.42%)和ICU病区(77例,27.70%)。在复合群水平上,对氟康唑耐药的有16株(5.76%),剂量依赖性敏感的有6株(2.16%);伊曲康唑的非野生型(NWT)菌株4株(1.44%);对伏立康唑耐药的有9株(3.24%),中介的有7株(2.52%);所有菌株均为两性霉素B的WT菌株(100.00%)。在种水平上,所有菌株均为两性霉素B的WT菌株(100.00%);伊曲康唑对3种菌均表现出较好的抑菌活性,95%以上菌株均为伊曲康唑WT菌株(P>0.05)。近平滑念珠菌中,MIC_(90)为2μg/ml,199株(93.43%)为氟康唑敏感株;似平滑念珠菌中,MIC_(90)为2μg/ml,42株(97.67%)为氟康唑WT菌株;拟平滑念珠菌中,MIC_(90)为16μg/ml,15株(68.18%)为氟康唑WT菌株,与其他两种菌比较有统计学差异(P<0.05);拟平滑念珠菌与其他两种菌相比,其氟康唑NWT菌株分离率最高(7株,31.82%)。伏立康唑对近平滑念珠菌和似平滑念珠菌MIC_(90)均为0.06μg/ml,GM分别为0.0688、0.0672μg/ml,204株(95.77%)近平滑念珠菌为敏感株,42株(97.67%)似平滑念珠菌为WT菌株;拟平滑念珠菌的MIC_(90)为0.5μg/ml,GM为0.1213μg/ml,GM与其他两种菌比较有统计学差异(P<0.05),仅16株(72.73%)为WT菌株,与其他两种菌比较有统计学差异(P<0.05)。结论:两性霉素B和伊曲康唑对近平滑复合群内3种念珠菌均表现出较强的抗菌活性,氟康唑和伏立康唑的抗菌活性则存在种间差异,表现为二者对拟平滑念珠菌的抗菌活性较差。因此,临床需重视真菌监测和菌株的准确鉴定,合理应用抗菌药物,同时需警惕耐药情况的发生。

体外药物敏感试验对ⅢA期非小细胞肺癌新辅助化疗的临床预测价值探讨

目的探讨体外药物敏感试验对ⅢA期非小细胞肺癌新辅助化疗的临床价值。方法64例ⅢA期非小细胞肺癌患者,其中32例应用MTT法检测癌细胞对抗癌药的敏感性,根据药敏结果对患者进行新辅助化疗,无敏感药物者按经验方案化疗;另外32例同期患者按经验方案化疗,观察实验与临床结果的相关性。结果应用体外药敏试验评估体内用药效果的敏感性为81.8%(18/22),特异性为70.0%(7/10),总预测准确率为78.1%(25/32)。阳性预测值为85.7%(18/21),阴性预测值为63.6%(7/11)。药敏阳性组与经验组临床疗效比较差异有显著性(χ2=8.14,P<0.05),药敏组与经验组两组手术切除率比较差异显著(χ2=4.27,P<0.05)。结论应用体外药物敏感试验指导ⅢA期非小细胞肺癌新辅助化疗具有重要的临床意义。

真菌体外药物敏感试验的方法学进展

近年来，真菌感染，尤其是酵母样真菌感染的发病率和严重程度呈逐年上升趋势，且随着耐药菌株的不断出现，可选择的抗菌药物受到限制。因此，常规进行真菌的体外药敏试验是非常必要的。本文综述了临床常用几种体外药敏试验方法进展。

卵巢癌体外药物敏感试验的初步研究

卵巢癌体外药物敏感试验的初步研究李晓文，孟波，杜金荣，孔宪超，孙俊芬，张颖，马连珍（１５００８６哈尔滨医科大学附属第二医院大兴安岭阿木尔林业局医院）卵巢肿瘤组织类型复杂，对不同的组织类型、甚至同类肿瘤的不同个体对抗癌药物的敏感性差异显著，致使惯用的化...

上海地区真菌培养鉴定及体外药物敏感性试验室间质量评价结果分析

目的通过室间质量评价(EQA)了解上海地区临床实验室真菌培养鉴定及体外药物敏感性试验的开展情况及检测质量。方法2019年EQA共发放10份样本(冻干菌株)进行真菌培养鉴定,其中4份要求同步进行体外药物敏感性试验。通过反馈结果对真菌鉴定符合率和体外药物敏感性试验的开展情况进行统计分析。结果共收到75份有效回报结果,其中有45份进行了真菌体外药物敏感性试验。10株菌株(涵盖2个属9个种)中有4株鉴定结果符合率为100%,鉴定结果有误的菌株分别为葡萄牙念珠菌、季也蒙念珠菌、近平滑念珠菌、白念珠菌、罗伦隐球菌和新生隐球菌。2019年第1次EQA有93.3%(70/75)的实验室结果完全正确,6.7%(5/75)的实验室出现错误结果但总成绩合格;第2次EQA有94.7%(71/75)的实验室结果完全正确,4.0%(3/75)的实验室出现错误结果但总成绩合格,1.3%(1/75)的实验室成绩不合格。结论上海地区临床实验室真菌培养鉴定总体检测能力和准确率较高,开展真菌体外药物敏感性试验项目的临床实验室数量有限。质量控制对于保证检测结果的准确性具有十分重要的作用。

希腊某三级医院肠杆菌科细菌对异帕米星的体外药物敏感试验

近年来,细菌耐药率不断升高,多重耐药肠杆菌科细菌,尤其产碳青霉烯酶、超广谱β内酰胺酶及AmpCβ内酰胺酶肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及其他肠杆菌科细菌成为全世界关注热点。其中耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌几乎对除多黏菌素、替加环素、庆大霉素和磷霉素之外的所有抗菌药物耐药。对已有抗菌药物的重新评价可以发掘出针对多重耐药革兰阴性病原菌的治疗措施。

EUCAST和CLSI微量肉汤稀释法白念珠菌体外药物敏感性试验结果比较

目的比较欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST)和美国临床实验室标准化协会(CLSI)微量肉汤稀释法白念珠菌体外药物敏感性试验结果的差异。方法分别用EUCAST方法和CLSI方法检测42株白念珠菌对两性霉素B、阿尼芬净、卡泊芬净、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑和米卡芬净的敏感性,比较2种方法的基本一致性(EA)、分类一致性(CA)、极重大误差率(VME)和重大误差率(ME)。结果EUCAST方法和CLSI方法总体EA为95.2%~100.0%,CA为95.2%~100.0%,ME为0%~4.8%,VME为0%~2.4%;氟康唑的ME为4.8%,泊沙康唑的VME为2.4%。结论EUCAST方法和CLSI方法白念珠菌体外药物敏感性试验结果具有可比性,但部分药物之间需要额外的协调步骤。

肿瘤组织块体外药敏试验在肺癌化疗中的应用

目的探讨肿瘤组织块体外药敏试验方法在肺癌化疗中的应用。方法取20例手术切除的肺癌标本行肿瘤组织块体外药敏试验。结果肺癌组织块体外药敏试验的可评估率为90．0％；9种化疗药物的抑制率分别为：顺铂55．6％、卡铂50．0％、紫杉醇38．9％、多西紫杉醇33．3％、长春瑞滨27．8％、吉西他滨27．8％、足叶乙苷22．2％、丝裂霉素16．7％、草酸铂44．4％。结论肺癌组织块体外药敏试验可用于肺癌化疗药物的筛选。

刃天青还原法在鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌多黏菌素B体外药物敏感性快速检测中的应用

目的评价刃天青还原法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌对多黏菌素B的药物敏感性试验的可行性。方法收集112株鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌临床分离株,分别采用刃天青还原法和微量肉汤稀释法进行多黏菌素B体外药物敏感性试验,以微量肉汤稀释法检测结果为标准,评价刃天青还原法在多黏菌素B体外药物敏感性试验中的性能。结果以微量肉汤稀释法的检测结果为标准,刃天青还原法的准确性为98.2%(110/112),阳性检出率为100%(33/33)。所有耐药结果均在加入刃天青显色剂后60 min内被检出。结论刃天青还原法用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌对多黏菌素B的体外药物敏感性快速检测,具有检测速度快、准确性好、操作简便、成本低等优点,可在临床推广使用。

中国大陆地区Fonsecaea临床分离株的体外抗真菌药物敏感性特征

目的通过体外药敏试验研究分离自我国的着色霉属(Fonsecaea spp.)临床菌株对抗真菌药物敏感性特征,为制定精准抗真菌治疗方案提供依据。方法采用美国临床实验室标准化委员会推荐的丝状菌标准的肉汤微量稀释法(CLSI M38-A2法),利用11种临床抗真菌药物,对32株Fonsecaea spp.临床分离株进行的体外抗真菌敏感性测试,总结相关菌株的体外抗真菌药敏特征。同时,对迄今为止国内外83个已报道的Fonsecaea spp.病例的菌株药敏与临床特征进行系统性回顾分析。结果泊沙康唑(MIC_(50)=0.25μg/mL,MIC_(90)=0.5μg/mL)、艾沙康唑(MIC_(50)=0.25μg/mL,MIC_(90)=0.5μg/mL)、伏立康唑(MIC_(50)=0.125μg/mL,MIC_(90)=0.25μg/mL)等二代唑类抗真菌药对Fonsecaea spp.临床株的抗菌活性最高,而两性霉素B(MIC_(50)=4μg/mL;MIC_(90)=8μg/mL)、氟康唑(MIC_(50)=8μg/mL,MIC_(90)>8μg/mL)、棘白菌素类(MEC_(50)=8μg/mL,MEC_(90)>8μg/mL)的抗菌活性较低。结论Fonsecaea spp.3个常见的致病菌种对抗真菌药的敏感性和临床预后一致,优先推荐二代唑类药物(泊沙康唑、艾沙康唑、伏立康唑等)作为抗真菌治疗方案。有关Fonsecaea spp.临床分离菌株的体外联合药敏特征值得进一步研究。