组织工程椎间盘的构建及体外观察

目的探讨构建组织工程椎间盘的可行性,修复退变椎间盘。方法应用热致分相法制备聚乳酸-羟基乙酸三维多孔支架,酶消化法体外分离培养20周龄意外流产胎儿椎间盘细胞,PKH-26荧光标记后接种于支架,体外培养48h,通过MTT摄取、激光共聚焦荧光显微镜及扫描电镜方法进行体外观察。结果原代细胞形态多为卵圆形或三角形,中央有圆形核,胞质向外伸出多个长短不同的突起。多孔支架超微结构显示孔隙由中心向外呈放射状分布,形态、取向规则有序,孔隙直径50～300μm。细胞-支架复合体加入MTT溶液2h后呈深蓝着色,激光共聚焦荧光显微观察可见大量红色荧光着色的细胞贴附于支架结构内。结论应用组织工程技术构建的细胞-支架复合体具备理想的三维微观结构及具有生命力的功能细胞,有可能在椎间盘再生研究中发挥重要作用。

体外观察特比萘芬联合伊曲康唑对须癣毛癣菌甲侵袭的抑制作用

目的:体外观察特比萘芬联合伊曲康唑对须癣毛癣菌甲侵袭的抑制作用。为临床联合用药提供参考依据。方法:用浸泡过不同浓度的特比萘芬、伊曲康唑及两者混合药液的健康甲片,接种须癣毛癣菌作为甲模型,27℃孵育观察不同时间甲模型真菌生长抑制现象及超微结构变化,确定各药的MIC。结果:特比萘芬和伊曲康唑联合药液MIC较伊曲康唑为低;联合用药部分抑菌浓度指数(FICI)>1但<2。结论:特比萘芬联合伊曲康唑对须癣毛癣菌有一定抑制相加作用。

PLGA微囊促进树突细胞抗原提呈作用的体外观察

本研究在体外将含卵清蛋白 (OVA)的PLGA微囊与小鼠骨髓诱导的树突细胞 (BM DC)相互作用 ,然后用卵清蛋白特异性杂交瘤T细胞检测OVA抗原在BM DC表面的表达 ,结果显示 :PLGA微囊可以在体外显著促进BM DC对OVA抗原的呈递。

乙酰螺旋霉素、麦迪霉素与复方新诺明伍用时对部分革兰氏阳性球菌抑菌效果的体外观察

乙酰螺旋霉素（Ａｃｅｔｙｉｓｐｉｒａｍｙｃｉｎｅ，ＡＣＳＰ），麦迪霉素（Ｍｉｄｅｃａｍｙｃｉｎｅ，ＭＤ）的抗菌谱广，效力强，在临床上被广泛应用，且常与复方新诺明（Ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｕｍｃｏ．ＳＭＺｃｏ）伍用，治疗金葡萄球菌、链球菌、肺...

脂肪乳剂对肿瘤细胞抑制作用的体外观察

目的 体外测定化疗药物和脂肪乳剂对肿瘤细胞的抑制作用 ,为化疗期间同时使用脂肪乳剂作营养支持提供依据。方法 本研究应用胃癌细胞株与阿霉素和脂肪乳剂单独或共同培养不同天数 ,用噻唑兰 (MTT)法 ,体外测定化疗药物和脂肪乳剂对胃癌细胞株增殖的抑制作用。结果 本研究结果表明 :抗癌药与癌细胞培养时间愈长 ,抑制率显著增加 ;不同浓度脂肪乳剂对癌细胞均有极轻微的抑制作用 ,但数天后就无抑制作用 ;不同浓度脂肪乳剂与抗癌药联合使用 ,均不影响抗癌药抑制癌细胞的作用。结论 化疗期间脂肪乳剂和抗癌药联合使用 ,并不影响抗癌药抑制癌细胞的增殖作用 ,本文体外观察的初步结果可为化疗期间同时使用脂肪乳剂作营养支持提供了依据。

5-氟脲嘧啶及丝裂霉素C对人胃癌细胞株SGC-7901及BGC-823的相互作用的体外观察

目的 :体外观察 5 -氟脲嘧啶及丝裂霉素C对人胃癌细胞株 (SGC - 790 1及BGC - 82 3)的相互作用。方法 :采用MTT法利用中效原理判定两药合用的效果。结果 :两种药单独应用时随着药物剂量增加 ,其效应也增加 ;两药大剂量 (大于中效剂量 )合用时是协同作用 (CI<1 ) ,小剂量 (小于中效剂量 )合用时是拮抗作用 (CI >1 ) ;两药给药时间次序不同不会影响效应大小。结论 :上述两种药合用大剂量是协同 ,而小剂量则拮抗 。

尿激酶对结核性胸膜炎病人胸膜渗出液作用的体外观察

尿激酶是纤溶酶原激活剂,目前已应用于冠心病、脑血管病的治疗,并取得满意的疗效,但至今尚未见有用尿激酶预防、治疗胸膜增厚与粘连的报道,为了给临床应用提供实验依据,我们选择10例结核性胸膜炎并有胸腔积液的病人做了胸膜渗出液尿激酶纤溶试验。

水溶性维生素影响兔胚胞扩张的体外观察

实验证实,兔胚胎从桑椹期扩张到胚泡的培养过程需要维生素。桑椹胚在含有11种水溶性维生素(生物素、泛酸、胆碱、肌醇、烟酰胺、维生素B_6、维生素B_2,维生素B_1、叶酸、维生素B_(12)和硫辛酸)的F_(10)培养液或在除去其中任一种维生素的培养液中培养5天后,测定胚泡直径。统计结果发现,除去肌醇,维生素B_6、维生素B_2和烟酰胺的胚泡扩张的直径显著减少。除去维生素B_(12)的胚泡扩张的直径明显增加,表明F_(10)培养液中维生素B_(12)的现有浓度对兔胚泡是有毒害的。

胶原酶溶解椎间盘的体外观察

观察不同浓度的胶原酶在体外对椎间盘的溶解作用,现报告如下:

牛蒡苷元体外抗流感病毒活性

目的 体外观察牛蒡苷元 (arctigenin,ACT)抗甲 1流感病毒作用 ,为进一步确认 ACT是牛蒡子 Fructusarctii解表功能有效成分提供实验依据。方法 采用 MDCK细胞培养法 ,通过红细胞凝集实验 ,以流感病毒血凝滴度为指标 ,观察 ACT对流感病毒复制的抑制作用。结果 ACT浓度 (m mol/ L )为 6 .7,13.4 ,2 6 .8和 5 3.6的血凝滴度抑制率 (% )分别为 0 .75 ,87.5和 10 0。结论 ACT在体外有直接抑制流感病毒复制的作用 ,是牛蒡子解表功能的有效成分 ,对其进行含量测定作为牛蒡子质量标准的定量指标是适宜和可行的。

原卟啉钠抑制丙型肝炎病毒的体外实验研究

目的:体外观察NAPP的细胞毒性作用及其对HCV亚基因复制子细胞模型RNA的抑制效果。方法:用MTT法筛选NAPP无细胞毒性浓度区间,分别取终浓度为5μg/ml、25μg/ml、125μg/ml、625μg/ml、3 125μg/ml的NAPP与含HCV复制子培养液中共同孵育,同时设空白对照组和IFN-α2b阳性对照组,8 d后用荧光定量PCR检测HCV复制子中RNA的含量。结果:无细胞毒药物浓度区间为(0~3 125)μg/ml,在125μg/ml^3 125μg/ml区间内对HCV复制子RNA有明显抑制作用(P<0.05~P<0.01)。结论:NAPP对靶细胞无细胞毒作用,且可有效抑制HCV复制子RNA。

短发卡状PTI-1(PC-3)基因特异性RNA干扰表达载体对PC-3细胞的体外效应

目的:通过基因克隆技术构建人前列腺癌PC3细胞系PTI1(PC3)基因[prostatecarcinomatumor inducinggene1(PC3)]的特异性短发卡shRNA(short hairpinRNA)真核表达载体,采用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术,体外观察对PC3细胞系PTI1(PC3)基因的沉默作用以及干扰后对PC3细胞的体外效应.方法:采用基因克隆技术,将合成的短发卡样特异性PTI1(PC3)RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体pEGFP/U6,构建PTI1(PC3)shRNA的真核表达载体,体外转染人前列腺癌PC3细胞,48h后观察细胞生物学变化;提取转染细胞总RNA及总蛋白,行RT PCR以及West ernblot观测胞内PTI1(PC3)mRNA及蛋白水平.结果:①成功构建短发卡样PTI1(PC3)shRNA真核表达载体pEGFP/U6mPs;②转染(脂质体法)PC3细胞,48h后细胞大部分死亡;③转染48h后细胞内PTI1(PC3)mRNA水平下降;④转染48h后下调胞内PTI1(PC3)蛋白水平.结论:本实验成功构建的shRNA真核表达载体通过RNA干扰,能够干扰人前列腺癌PC3细胞内PTI1(PC3)基因的表达,抑制PTI1(PC3)蛋白的表达,降低了由PTI1蛋白可能发挥的“翻译失真性”作用,促进癌细胞的死亡,进一步揭示了PTI1在前列腺癌发生、发展过程中的显性癌基因作用.由于RNA干扰的特异性从而为临床上前列腺癌的基因治疗提供了新的可能的方法.

小剂量高三尖杉酯碱、阿糖胞苷对急非淋白血病细胞生长和分化的体外研究

我们体外观察了小剂量三尖杉酯碱(HHA)1ng/ml、小剂量阿糖胞苷(Ara—C)0.1mg/ml 和两药联用(HA)对急非淋白血病细胞分化成熟和杀伤作用.方法和结果:用 Moriymia 改良半固体培养法培养白血病祖细胞,10天后观察药物对集落的抑制率.对照组(9例)的 CFU—L 集落数为59.7±43.HHA 组(9例)的抑制率为67.7±17.0,Ara—C 组(9例)

单核细胞趋化蛋白-1和雌二醇对体外子宫内膜基质细胞血管内皮生长因子分泌的影响

To explore the initial activity of endometrial stromal cells(ESCs) and the participation of monocyte chemoattractant protein- 1 (MCP- 1) in the histogenesis of endometriosis, vascular endothelial growth factor (VEGF) secretion of ESCs and the effect of MCP- 1 on VEGF secretion of ESCs were observed in vitro. The VEGF level was detected in ESC culture media and was increased significantly when E2 or MCP- 1 was added to the media, especially in the presence of E2 plus MCP- 1. The VEGF secretion was higher in the ESCs of women with endometriosis than in those women without endometriosis.

猪小肠黏膜下层海绵的构建与细胞黏附性观察

背景:虽然小肠黏膜下层的结构与皮肤非常类似,但它的孔径大小与孔径率不如皮肤那样有利于种子细胞的长入。目的:利用EDC对于猪小肠黏膜下层进行化学改性,观察其改性后形态学结构及细胞相容性。方法:将小肠黏膜下层支架材料放入含0.2%胃蛋白酶的3%乙酸水溶液中,使小肠黏膜下层的质量浓度分别为1%、2%、3%、4%,磁力搅拌与冷冻干燥后获得小肠黏膜下层海绵,分别应用50,100,150 mmol/L的EDC进行交联改性,通过孔径及吸水率结果选取最佳质量浓度的小肠黏膜下层与EDC交联浓度,进行细胞培养。将第2代骨髓基质干细胞与小肠黏膜下层海绵共培养,1,2,3周后进行扫描电镜观察。结果与结论:①当小肠黏膜下层海绵质量浓度为1%时,在100 mmol/L EDC交联下的空间结构弹性好,结构规整,无空洞现象,孔径为100-150μm;②在100 mmol/L EDC交联下,质量浓度1%小肠黏膜下层海绵的吸水能力比2%高出0.35倍,质量浓度3%与4%小肠黏膜下层海绵的吸水能力相差不明显,质量浓度1%小肠黏膜下层海绵的结构更利于水分的流动与变化;③质量浓度1%的小肠黏膜下层海绵经100 mmol/L EDC交联后的结构、孔径及吸水率最好,可进行细胞实验。培养3周时,细胞变形相对完整且快,细胞形态在孔隙位置相对较大,外形接近长梭形,数目较多,在孔隙周围细胞形态较小,似圆盘形,数目相对较少,产生铺路石样改变,覆盖于大部分支架表面,并有大量颗粒样物质在周围出现,尤其在细胞集中位置更多见;④结果表明,EDC交联改性的小肠黏膜下层海绵具有良好细胞相容性。

苦参碱对人喉癌Hep-2细胞生长和凋亡的影响

显著性地区差异是喉癌的流行病学特征,我国东北地区为喉癌高发区,并且呈逐年升高趋势[1]。目前喉癌治疗主要以手术治疗为主,同时辅以化疗放疗,内分泌治疗等。研究发现,天然植物中的生物碱具有明显的抗肿瘤功效[2]。目前已经发现的抗肿瘤生物碱包括小檗碱、长春新碱、喜树碱、苦参碱、紫杉醇等生物碱,本研究以人喉癌细胞株(Hep-2细胞)为靶系统体外观察苦参碱对Hep-2细胞增殖周期及诱导凋亡的影响。