再生障碍性贫血患者造血细胞生长因子测定及其意义

目的：研究再生障碍性贫血（再障）骨髓和外周血早期造血细胞生长因子变化与骨髓造血细胞体外集落形成及临床治疗的相关性。方法：甲基纤维素半固体体外集落试验及酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定骨髓和外周血 Flt3配体（FL）、干细胞因子（SCF）、白细胞介素6（IL-6）及其可溶性受体sgp130和sgp80水平。结果：①再障患者骨髓粒细胞、单核细胞、巨核细胞、红细胞混和集落形成单位(CFU-GMME)明显减少，急性再障尤其显著（P ＜0．01），治疗有效者，CFU-GMME形成增加，但仍少于正常对照；②FL水平高达正常20倍以上，其含量与临床疗效密切相关，经治疗有效者骨髓和外周血FL水平明显下降，但不能降至正常水平；③SCF、IL-6及其受体在整个病程中无明显改变。结论：虽然再障骨髓造血细胞减少，但仍有相当数量的造血细胞残留，体外集落形成和FL含量测定可作为再障临床监测和疗效评价的客观指标。

反义Bmi-1对Jurkat细胞的抑制作用

目的观察反义Bmi-1表达质粒在体外对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的生长抑制作用。方法选择Bmi-1基因起始密码子及与锌指结构对应的171bp核苷酸片段,反向连接于pLNCX2质粒上,得到反义Bmi-1表达质粒;通过脂质体转染将质粒导入Jurkat细胞中,以G418进行筛选得到阳性克隆;以MTT法和体外集落形成实验检测反义Bmi-1表达质粒对Jurkat细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析细胞周期;采用免疫荧光组化法检测反义Bmi-1对Jurkat细胞P16蛋白的上调作用。结果转染反义Bmi-1表达质粒组与对照组(空白对照及空质粒组)相比较,生长速度明显变慢,克隆形成能力明显下降,空白对照组Jurkat细胞集落数为(90.70±9.07)/103细胞,空质粒组Jurkat细胞集落数为(83.30±6.11)/103细胞,转染反义质粒组Jurkat细胞集落数为(56.00±5.56)/103细胞(P<0.01);P16蛋白表达也明显增强。结论反义Bmi-1对Jurkat细胞的体外生长具有明显的抑制作用,并上调了P16蛋白的表达。

端粒酶反义hTERT的构建及其对K562细胞的作用

目的 观察反义人类端粒酶逆转录酶 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTERT)是否能够抑制端粒酶活性及K5 6 2细胞的增殖。方法 选择hTERT基因上游部分的起始密码子上下 2 90bp长度的核苷酸片段 ,设计引物并进行PCR扩增后 ,反向连接于pLNCX neo质粒上得到反义hTERT基因表达质粒。在体外转染中通过脂质体法将质粒导入K5 6 2细胞。以MTT法和体外集落形成实验检测反义hTERT表达质粒对K5 6 2细胞增殖的抑制作用 ;以TRAP PCRELISA法来研究反义hTERT基因对K5 6 2细胞的端粒酶活性的抑制作用。结果 ①转染反义hTERT表达质粒组与对照组 (空白对照及空质粒组 )相比较 ,生长速度明显变慢 ,集落形成能力明显下降 ,空白对照组K5 6 2细胞集落数为 ( 10 0 .33± 7.5 7) / 10 3 细胞 ,空质粒组K5 6 2neo细胞集落数为 ( 92 .6 7± 5 .86 ) / 10 3 细胞 ,转染反义质粒组HL 6 0as集落数为 ( 5 0 .33± 6 .11) / 10 3 细胞 (P <0 .0 1) ;②反义hTERT对K5 6 2细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用 ,K5 6 2neo细胞活性为 1.2 79± 0 .0 73 ,K5 6 2as为 0 .82 6± 0 .0 36 ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 该研究构建的端粒酶反义hTERT基因表达质粒转染到K5 6 2细胞中后 ,能够封闭K5 6 2细胞hTERTmRNA的表?