人鼠嵌合抗肿瘤细胞核单抗-空间稳定脂质体的制备及其体外靶向(英文)

目的研究人鼠嵌合抗肿瘤细胞核单抗(chTNT-3)-空间稳定脂质体的制备方法、免疫活性及体外靶向性。方法合成聚乙二醇末端带吡啶二硫丙酰基的磷脂衍生物(PDP-PEG-HSPE),制备含PDP-PEG-HSPE的空间稳定脂质体,经二巯基苏糖醇还原后共价连接马来酰亚胺衍生化抗体。荧光胺法和钼蓝法测定脂质体与抗体的连接效率及抗体密度,激光散射粒度仪测定其粒径分布,ELISA法检测脂质体表面的抗体免疫活性。体外实验考察该免疫脂质体与固定Raji细胞的结合活性。结果chTNT-3-空间稳定脂质体的粒径分布为(115±33)nm。当初始Ab/PDP-PEG-HSPE=1∶10时,脂质体与抗体的连接效率为71%,抗体密度为106μgAb/μmolPL。chTNT-3经化学修饰后连接到脂质体表面,其免疫活性基本保留。chTNT-3-空间稳定脂质体能特异性地结合固定Raji细胞。结论通过PDP-PEG-HSPE法共价连接抗体制备的chTNT-3-空间稳定脂质体能基本保留chTNT-3的免疫活性,具有体外靶向细胞核抗原的能力。

携RGDS超声造影剂的制备及体外靶向血栓研究

目的探讨制备携精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(Arg-G ly-Asp-Ser,RGDS)靶向脂膜超声造影剂的制备,并对靶向微泡的特性及靶向作用进行初步鉴定。方法分别采用酰胺键共价键合的方式和表面吸附法将脂膜超声造影剂与RGDS血栓靶向短肽片段进行结合;制备产物通过流式细胞仪进行携带率和稳定性的检测;对内源性凝血途径产生的血栓进行寻靶作用研究。结果流式细胞仪显示共价键合RGDS脂膜超声造影剂其微泡外壳波长发生了明显变化,显示改变率达到82%,而表面吸附法制备的靶向超声造影剂改变率达到23%;激光共聚焦显微镜显示携带RGDS的脂膜超声造影剂在大量的PBS液清洗后,对离体血栓仍具有很强的靶向性和稳定性,而表面吸附法制备的靶向超声造影剂在大量PBS液清洗后,失去了其靶向性。结论采用共价键合的化学修饰方法可以成功制备稳定性好的亲血栓靶向脂膜超声造影剂。

双模态对比剂Fe_3O_4-Cy5.5-NGR在卵巢癌的体外靶向效能研究

目的合成并验证磁共振-荧光双模态对比剂Fe_3O_4-Cy5.5-NGR对卵巢癌ES-2细胞的体外靶向效能情况。方法化学方法合成Fe_3O_4-Cy5.5-NGR颗粒作为实验组对比剂,Fe_3O_4-Cy5.5颗粒作为对照组对比剂,在透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)、红外光谱仪(far infrared spectrometer,FITR)和紫外分光光度仪(ultraviolet spectrophotometer-2600,UV-2600)等设备下检测对比剂的普通物理化学性质是否满足成像需要;选取ES-2人卵巢癌透明细胞株传代培养,细胞生长稳定后进行CD13免疫组织化学染色,观察细胞膜表面CD13表达量;两种对比剂与ES-2细胞共同孵育后检测粒子的细胞毒性,并用流式细胞仪验证细胞与粒子的体外特异性结合情况。在7.0TMR下验证磁性纳米颗粒Fe_3O_4-Cy5.5-NGR和Fe_3O_4-Cy5.5作为MR对比剂的磁敏感性。结果 TEM观察两种对比剂形态规则,水溶液中分散性良好,通过连接NGR短肽,实验组对比剂的平均直径达(8.930±0.773)nm,对照组对比剂直径约(7.480±0.695)nm;Fe_3O_4-Cy5.5-NGR和Fe_3O_4-Cy5.5激发波为628.0 nm,发射波为675.2 nm;FITR中Fe_3O_4-Cy5.5-NGR和Fe_3O_4-Cy5.5在2 882 cm^(-1)、1 632 cm^(-1)处出现特征性波峰,实验组对比剂在841 cm^(-1)处另外出现了波峰。细胞毒性实验(CCK-8)中对比剂与细胞共孵育后,细胞活性保持在90%左右。细胞免疫组织化学染色,荧光显微镜观察细胞呈侵袭性生长,细胞膜位置CD13高表达,细胞核及周围间质表达量很低。Fe_3O_4-Cy5.5-NGR和Fe_3O_4-Cy5.5对比剂r2值分别为155.49 mmol·L^(-1)·s^(-1),180.74 mmol·L^(-1)·s^(-1)。流式细胞仪下观察到Fe_3O_4-Cy5.5-NGR较Fe_3O_4-Cy5.5对比剂的荧光强度高,在不同浓度(40、80和160μmol)分别为后者的3.1、1.65和1.26倍。结论 Fe_3O_4-Cy5.5-NGR作为磁共振-荧光双模态对比剂在ES-2细胞的体外靶向性能良好,可以满足体外成像需求,为进一步的裸鼠卵巢癌在体实验提供了实验基础。

薄荷醇修饰紫杉醇阳离子脂质体处方优选及体外靶向性评价

目的 制备薄荷醇修饰紫杉醇阳离子脂质体(Men-PCLPs)并优化处方,评价Men-PCLPs体外靶向性。方法 采用薄膜分散法制备Men-PCLPs。使用Box-Benhken响应面法选出Men-PCLPs最优处方工艺。评价各组脂质体对C6细胞存活率的影响。用流式细胞仪检测C6和bEnd.3细胞对不同脂质体的摄取情况。结果 脂质体最优处方为磷脂106 mg、人参皂苷Rh_(2) 20 mg、PTX 2.200 mg、DC-Chol5 mg,总处方量5 mL,紫杉醇的平均包封率为(93.800±0.006)%。紫杉醇阳离子脂质体和Men-PCLPs能明显抑制C6细胞的生长,且Men-PCLPs对C6细胞和bEnd.3细胞的靶向性显著增强。结论 优化后的Men-PCLPs具有较好的主动靶向性,对C6细胞有一定的抑制作用。

三七总皂苷心肌靶向脂质体的体外靶向性研究

目的研究三七总皂苷心肌靶向脂质体(PAC-L-PNS)的对心肌细胞的体外靶向性。方法将加载了罗丹明B(Rhodamine B,RHB)荧光染料的PAC-L-PNS(即PAC-L-PNS-RHB)和加载了RHB的三七总皂苷普通脂质体(即L-PNS-RHB)分别与H9C2心肌细胞在相同实验条件下共同培养一定时间,以每毫克细胞蛋白摄取的荧光值为指标,考察H9C2心肌细胞对不同脂质体的摄取量;将PAC-L-PNS-RHB和L-PNS-RHB分别与H9C2心肌细胞和HL-7702非心肌细胞在相同实验条件下共同培养一定时间,以每毫克细胞蛋白摄取的荧光值为指标,考察不同细胞对脂质体的摄取量;将PAC-L-PNS-RHB和L-PNS-RHB分别与H9C2心肌细胞在不同实验条件下共同培养一定时间,以每毫克细胞蛋白摄取的荧光值为指标,考察不同环境下心肌细胞对脂质体的摄取量。结果心肌细胞摄取PAC-L-PNS-RHB和L-PNS-RHB的量均随着培养时间的延长而增加,从1h开始,心肌细胞对PAC-L-PNS-RHB的摄取量显著高于L-PNS-RHB(P<0.01);心肌细胞对PAC-L-PNS-RHB的摄取量较非心肌细胞高4.97倍;在缺氧条件下,心肌细胞对PAC-L-PNS-RHB的摄取量较L-PNS-RHB高2.06倍;美托洛尔的加入导致心肌细胞对PAC-L-PNS-RHB的摄取量显著下降。结论PAC-L-PNS具有较强的体外心肌细胞靶向性,其原因可能是PAC-L-PNS与心肌细胞表面的β1-AR发生了特异性结合。

载肝癌细胞GPC3抗体的纳米级脂质超声微泡制备及体外寻靶研究

目的：探索制备载肝癌细胞磷酯酰肌醇蛋白多糖-3（glypican-3,GPC3）抗体的新型纳米级脂质超声微泡造影剂的方法,并评价其体外对肝癌细胞的靶向结合效果。方法：以机械振荡法制备纳米级脂质微泡,并通过光学显微镜及电子显微镜检测纳米微泡大小形态、粒径分布;生物素-亲和素桥接肝癌细胞GPC3抗体与纳米级脂质超声微泡,流式细胞仪检测微泡与抗体结合效率;免疫组化检测常见3种肝癌细胞的GPC3阳性表达;微泡体外与肝癌细胞靶向结合,激光共聚焦显微镜检测寻靶效果。结果：纳米脂质微泡呈圆形,分布均匀,无明显聚集,粒径范围约350~450 nm。微泡与抗体结合效率达85.05%,人SMMC-7721、HepG2及Huh7肝癌细胞GPC3表达阳性,激光共聚焦显微镜显示载GPC3抗体纳米级脂质微泡可与肝癌细胞特异性结合。结论：本研究成功制备了具备靶向性的新型纳米级脂质超声微泡,生物素-亲和素桥接GPC3抗体可特异性结合肝癌细胞,达到靶向性识别效果,为微泡的靶向诊断及治疗研究奠定了基础。

载CXCL12抗体靶向超声微泡制备及其体外卵巢癌细胞粘附性实验

目的制备携带基质细胞衍生因子1(CXCL12)抗体的靶向超声微泡,检测其一般物理特性及体外寻靶能力。方法通过生物素-亲和素桥接法将CXCL12抗体连接到声诺维微泡上,制备成靶向超声微泡,作为实验组,用流式细胞仪和荧光显微镜检测微泡的结合率及稳定性,体外粘附性实验观察靶向超声微泡与卵巢癌细胞的结合能力。以未连接CXCL12抗体的声诺维微泡作为对照组。结果实验组微泡的粒径均一,稳定性好,荧光显微镜下靶向微泡表面呈环状红色荧光,流式细胞仪靶向微泡结合率明显高于对照组(P<0.05),振荡后结合率略降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。体外寻靶实验显示癌细胞周边呈花环状粘附,但对照组未见粘附,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过使用生物素-亲和素桥接法,可以让携带CXCL12抗体靶向超声微泡具有较高的结合率,并且具有较好的稳定性,在体外可与人卵巢癌SKOV3细胞牢固结合。

靶向ανβ3整合素超声造影剂的制备及其相对定量化的体外寻靶实验研究

目的制备靶向ανβ3整合素的微泡超声造影剂,检测其物化特性并进行体外寻靶实验研究。方法采用生物素-链霉亲和素法制备靶向ανβ3整合素的微泡超声造影剂,检测其结合力与稳定性;制备细胞爬片,观察ανβ3整合素在受选细胞株的表达;相对定量地检测靶向微泡的体外寻靶潜能和结合特异性。结果靶向ανβ3整合素的微泡超声造影剂在液相的粒径均一,稳定性好,浓度高,抗体分子在微泡表面分布均匀。靶向ανβ3整合素的微泡较非靶向微泡有更高的结合微泡数,在每个HT29、诱导HUVECs、未诱导HUVECs和4T1细胞表面结合微泡数分别为(5.4±1.5)、(3.2±0.9)、(1.5±0.6)和(0.2±0.1),显示了良好的结合特异性和靶向性特征。结论成功制备了靶向ανβ3整合素超声造影剂,建立了相对定量化的体外寻靶实验方法,为进一步优化靶向微泡超声造影剂的体外寻靶策略提供了实验基础。

PSMA单抗靶向人前列腺癌纳米级脂质微泡制备和体外寻靶能力实验研究

目的探究前列腺特异性膜抗原(PSMA)单抗靶向人前列腺癌纳米级脂质微泡的制备方法,对其体外寻靶能力予以观察。方法采用静电吸附法对PSMA单抗靶向人前列腺癌纳米级脂质微泡进行制备,观察其特性,对抗体与纳米级微泡结合情况予以免疫荧光法检测,采用细胞免疫荧光法对PSMA表达以及在细胞膜上的定位予以鉴定,观察靶向微泡对前列腺癌细胞的寻靶能力,并将胃癌细胞作为对照。结果 PSMA单抗靶向纳米级微泡呈现出均匀分布状态,平均粒径为(626.25±66.02)nm;经过免疫荧光法试验,显示微泡表面存在绿色荧光;对前列腺癌细胞膜给予细胞免疫荧光检测其PSMA呈现出高表达;体外寻靶实验显示靶向微泡能够实现与人前列腺癌LNCAP、C4-2细胞的结合,但其与胃癌MKN45细胞无法结合。结论 PSMA单抗靶向人前列腺癌纳米级脂质微泡体外寻靶能力强,能够实现与前列腺癌细胞的有机结合。

Co^(2+)/Dy^(3+)掺杂纳米立方Fe_3O_4的热还原制备及磁靶向滞留性能

采用热还原沉淀法制备了一系列Co^(2+)/Dy^(3+)掺杂的纳米立方MxFe3-xO4磁性颗粒.利用X射线衍射仪、透射电子显微镜和振动样品磁强计研究了不同含量掺杂离子对MxFe3-xO4晶体结构、形貌及磁性的影响.研究发现,掺杂未改变母体的对称性,但母体形貌逐渐从立方体向球体过渡;Co^(2+)和Dy^(3+)的掺杂对于铁氧体磁学性质的影响明显不同,当Co^(2+)实际掺杂量为0.44和Dy^(3+)实际掺杂量为0.05时,MxFe3-xO4立方磁性粒子的饱和磁化强度(Ms)达到最大值,分别为76.65和70.21 A·m2·kg-1.与超顺磁性Fe_3O_4球体相比,高磁性掺杂Fe_3O_4立方体在体外模拟磁流体磁靶向定位实验中显示出较高的滞留率.

Angiopep-2修饰白藜芦醇脂质体的处方优化与体外评价

目的 制备Angiopep-2(Ang)修饰的白藜芦醇(resveratrol,Res)脂质体(Ang-Lip/Res),并对其进行处方优化和体外脑靶向性研究。方法 采用薄膜分散法制备Ang-Lip/Res,利用Box-Benhken响应面法对影响其包封率的3因素(磷脂的质量浓度、磷脂与药物的质量比、磷脂与胆固醇的质量比)进行优化处方最佳制备工艺并验证脂质体的包封率;采用磺酰罗丹明B蛋白法考察脂质体对小鼠神经细胞的毒性;采用流式细胞仪和荧光显微镜探究细胞摄取情况;构建体外血脑屏障模型,比较白藜芦醇脂质体(Res-Lip)跨越血脑屏障的能力。结果 Ang-Lip/Res的最优处方:磷脂的质量浓度为4.4 mg/mL,磷脂与白藜芦醇的质量比为11∶1,磷脂与胆固醇的质量比为5.5∶1。按照最佳处方,以磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000及DSPE-PEG2000-Ang为膜材制备的Ang-Lip/Res包封率为(93.28±1.35)%。细胞毒实验结果表明,50μmol/L浓度以内,AngLip/Res对小鼠神经细胞N2a和bEnd.3无明显毒性;体外细胞摄取实验结果表明,与非靶向Res-Lip相比,Ang的修饰明显增加了bEnd.3细胞对脂质体的摄取,提高了脂质体体外BBB渗透率。结论 成功制备Ang-Lip/Res,可进一步应用于防治脑部疾病的研究。

Box-Behnken响应面优化蛇葡萄素纳米结构脂质载体处方工艺及体外评价

目的优化蛇葡萄素纳米结构脂质载体(ampelopsin loaded nanostructured lipid carriers,AMP-NLC)处方并对其进行质量表征,研究其对SMMC-7721细胞抑制作用和摄取情况。方法采用有机溶剂蒸发法制备AMP-NLC,在单因素实验基础上结合Box-Behnken响应面优化AMP-NLC处方并对其进行质量表征。用MTT法测定SMMC-7721细胞的半数抑制浓度(inhibitory concentration of 50%,IC50),并用罗丹明B染料观察其摄取情况。结果最优处方为山嵛酸甘油酯与中链三酰甘油的比例为1∶11.5、药脂比为1∶10.5、蛋黄卵磷脂用量为21 mg和P188的用量为2%,所制AMP-NLC的平均包封率为(81.71±1.76)%、平均载药量为(3.86±0.22)%、平均粒径为(156.50±7.11)nm和平均ζ电位为(−11.00±0.95)mV,体外释药过程符合一级释放模型Q=47.93(1-e^(−0.6252 t)),蛇葡萄素和AMP-NLC对SMMC-7721细胞的IC_(50)分别为44.51、41.51μg/mL,且相对蛇葡萄素原料药,SMMC-7721细胞对AMP-NLC有较好摄取。结论Box-Behnken响应面法所建立的模型可用于AMP-NLC处方优化,AMP-NLC能有效提高蛇葡萄素在SMMC-7721细胞的相对摄取。

转铁蛋白修饰雷公藤甲素脂质体的制备与体外评价

目的制备转铁蛋白(transferrin,Tf)修饰的雷公藤甲素(triptolide,TP)脂质体(Tf-TP@Lip),并对其进行质量评价和体外靶向性研究。方法采用薄膜分散法制备Tf-TP@Lip,以包封率和载药量为考察指标,通过单因素考察和星点设计-效应面优化法筛选处方和最佳制备工艺;采用超滤离心法测定药物包封率;透射电子显微镜(TEM)观察脂质体微观形态;激光粒度仪测定脂质体的粒径、多分散指数(polydispersity index,PDI)和Zeta电位;并对其体外释放情况进行考察;采用流式细胞仪和荧光显微镜探究细胞摄取情况。结果优化后Tf-TP@Lip的处方和工艺:脂药比为5.72∶1,脂胆比为8.11∶1,磷脂与DSPE-PEG2000的质量比为6∶1,成膜溶剂为无水乙醇,成膜温度60℃。制得的Tf-TP@Lip平均粒径为(130.33±1.89)nm,PDI为0.19±0.03,Zeta电位为(-23.20±0.64)m V,包封率和载药量分别为(85.33±0.41)%和(9.96±0.21)%,TEM下呈球形,大小均匀、圆整。体外释放研究表明,Tf-TP@Lip相比游离TP具有一定缓释效果。与非靶向雷公藤甲素脂质体(TP@Lip)相比,转铁蛋白的修饰明显增加了SMMC-7721对脂质体的摄取效率。结论制备Tf-TP@Lip稳定、可行,粒径小、外观圆整且具备较高的包封率和载药量,可用于进一步的实验研究。

新型携PSMA抗体纳泡用于前列腺癌的靶向分子超声成像

目的构建携前列腺特异性膜抗原(PSMA)抗体靶向纳米气泡(纳泡),初步验证其体外寻靶能力以及超声造影显像的效果。方法采用薄膜水化法直接制备出纳米级微泡,并应用生物素-亲和素桥联法获得PSMA抗体靶向的纳泡;粒径检测仪/纳米颗粒跟踪分析仪检测所构建靶向纳泡的平均粒径、电位和浓度;采用细胞免疫荧光法对人前列腺癌LNcap和PC3细胞的PSMA表达以及在细胞膜上的定位进行鉴定;观察靶向纳泡的体外寻靶能力并检测其在体外和在裸鼠前列腺癌移植瘤中的超声造影显像。结果制备完成的携PSMA抗体纳泡的平均粒径为(4937±194)nm,显著高于空白纳泡的(3980±86)nm(P<0.05),分布均匀,两种纳泡体外超声造影显像良好。细胞免疫荧光检测示,LNcap细胞高表达PSMA,PC3细胞低表达PSMA。流式细胞术观察体外寻靶实验示,917%的LNcap细胞观察到与靶向纳泡上PSMA抗体结合的荧光,PC3细胞中并未观测到荧光。在体超声成像示,在LNcap移植瘤中靶向纳泡的达峰强度明显高于空白纳泡,增强显影效果更好。结论携PSMA抗体纳泡体外寻靶能力强,在PSMA阳性前列腺癌移植瘤中的超声造影显像效果优异。

Therapy for non-small-cell lung cancer patients with brain metastasis

Brain metastasis is a major cause of poor prognosis and high mortality for non-small cell lung cancer patients. The prognosis of non-small-cell lung cancer(NSCLC) patients with brain metastasis is generally poor and more effective treatment is required to improve their prognosis. Whole-brain radiotherapy, surgery, stereotactic radiosurgery, chemotherapy and targeted therapy are the main treatment for brain metastasis. This review focuses on the five therapeutic strategy and in particular, on targeted therapy.