薄荷醇修饰紫杉醇阳离子脂质体处方优选及体外靶向性评价

目的 制备薄荷醇修饰紫杉醇阳离子脂质体(Men-PCLPs)并优化处方,评价Men-PCLPs体外靶向性。方法 采用薄膜分散法制备Men-PCLPs。使用Box-Benhken响应面法选出Men-PCLPs最优处方工艺。评价各组脂质体对C6细胞存活率的影响。用流式细胞仪检测C6和bEnd.3细胞对不同脂质体的摄取情况。结果 脂质体最优处方为磷脂106 mg、人参皂苷Rh_(2) 20 mg、PTX 2.200 mg、DC-Chol5 mg,总处方量5 mL,紫杉醇的平均包封率为(93.800±0.006)%。紫杉醇阳离子脂质体和Men-PCLPs能明显抑制C6细胞的生长,且Men-PCLPs对C6细胞和bEnd.3细胞的靶向性显著增强。结论 优化后的Men-PCLPs具有较好的主动靶向性,对C6细胞有一定的抑制作用。

双模态对比剂Fe_3O_4-Cy5.5-NGR在卵巢癌的体外靶向效能研究

目的合成并验证磁共振-荧光双模态对比剂Fe_3O_4-Cy5.5-NGR对卵巢癌ES-2细胞的体外靶向效能情况。方法化学方法合成Fe_3O_4-Cy5.5-NGR颗粒作为实验组对比剂,Fe_3O_4-Cy5.5颗粒作为对照组对比剂,在透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)、红外光谱仪(far infrared spectrometer,FITR)和紫外分光光度仪(ultraviolet spectrophotometer-2600,UV-2600)等设备下检测对比剂的普通物理化学性质是否满足成像需要;选取ES-2人卵巢癌透明细胞株传代培养,细胞生长稳定后进行CD13免疫组织化学染色,观察细胞膜表面CD13表达量;两种对比剂与ES-2细胞共同孵育后检测粒子的细胞毒性,并用流式细胞仪验证细胞与粒子的体外特异性结合情况。在7.0TMR下验证磁性纳米颗粒Fe_3O_4-Cy5.5-NGR和Fe_3O_4-Cy5.5作为MR对比剂的磁敏感性。结果 TEM观察两种对比剂形态规则,水溶液中分散性良好,通过连接NGR短肽,实验组对比剂的平均直径达(8.930±0.773)nm,对照组对比剂直径约(7.480±0.695)nm;Fe_3O_4-Cy5.5-NGR和Fe_3O_4-Cy5.5激发波为628.0 nm,发射波为675.2 nm;FITR中Fe_3O_4-Cy5.5-NGR和Fe_3O_4-Cy5.5在2 882 cm^(-1)、1 632 cm^(-1)处出现特征性波峰,实验组对比剂在841 cm^(-1)处另外出现了波峰。细胞毒性实验(CCK-8)中对比剂与细胞共孵育后,细胞活性保持在90%左右。细胞免疫组织化学染色,荧光显微镜观察细胞呈侵袭性生长,细胞膜位置CD13高表达,细胞核及周围间质表达量很低。Fe_3O_4-Cy5.5-NGR和Fe_3O_4-Cy5.5对比剂r2值分别为155.49 mmol·L^(-1)·s^(-1),180.74 mmol·L^(-1)·s^(-1)。流式细胞仪下观察到Fe_3O_4-Cy5.5-NGR较Fe_3O_4-Cy5.5对比剂的荧光强度高,在不同浓度(40、80和160μmol)分别为后者的3.1、1.65和1.26倍。结论 Fe_3O_4-Cy5.5-NGR作为磁共振-荧光双模态对比剂在ES-2细胞的体外靶向性能良好,可以满足体外成像需求,为进一步的裸鼠卵巢癌在体实验提供了实验基础。

Angiopep-2修饰白藜芦醇脂质体的处方优化与体外评价

目的 制备Angiopep-2(Ang)修饰的白藜芦醇(resveratrol,Res)脂质体(Ang-Lip/Res),并对其进行处方优化和体外脑靶向性研究。方法 采用薄膜分散法制备Ang-Lip/Res,利用Box-Benhken响应面法对影响其包封率的3因素(磷脂的质量浓度、磷脂与药物的质量比、磷脂与胆固醇的质量比)进行优化处方最佳制备工艺并验证脂质体的包封率;采用磺酰罗丹明B蛋白法考察脂质体对小鼠神经细胞的毒性;采用流式细胞仪和荧光显微镜探究细胞摄取情况;构建体外血脑屏障模型,比较白藜芦醇脂质体(Res-Lip)跨越血脑屏障的能力。结果 Ang-Lip/Res的最优处方:磷脂的质量浓度为4.4 mg/mL,磷脂与白藜芦醇的质量比为11∶1,磷脂与胆固醇的质量比为5.5∶1。按照最佳处方,以磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000及DSPE-PEG2000-Ang为膜材制备的Ang-Lip/Res包封率为(93.28±1.35)%。细胞毒实验结果表明,50μmol/L浓度以内,AngLip/Res对小鼠神经细胞N2a和bEnd.3无明显毒性;体外细胞摄取实验结果表明,与非靶向Res-Lip相比,Ang的修饰明显增加了bEnd.3细胞对脂质体的摄取,提高了脂质体体外BBB渗透率。结论 成功制备Ang-Lip/Res,可进一步应用于防治脑部疾病的研究。

Box-Behnken响应面优化蛇葡萄素纳米结构脂质载体处方工艺及体外评价

目的优化蛇葡萄素纳米结构脂质载体(ampelopsin loaded nanostructured lipid carriers,AMP-NLC)处方并对其进行质量表征,研究其对SMMC-7721细胞抑制作用和摄取情况。方法采用有机溶剂蒸发法制备AMP-NLC,在单因素实验基础上结合Box-Behnken响应面优化AMP-NLC处方并对其进行质量表征。用MTT法测定SMMC-7721细胞的半数抑制浓度(inhibitory concentration of 50%,IC50),并用罗丹明B染料观察其摄取情况。结果最优处方为山嵛酸甘油酯与中链三酰甘油的比例为1∶11.5、药脂比为1∶10.5、蛋黄卵磷脂用量为21 mg和P188的用量为2%,所制AMP-NLC的平均包封率为(81.71±1.76)%、平均载药量为(3.86±0.22)%、平均粒径为(156.50±7.11)nm和平均ζ电位为(−11.00±0.95)mV,体外释药过程符合一级释放模型Q=47.93(1-e^(−0.6252 t)),蛇葡萄素和AMP-NLC对SMMC-7721细胞的IC_(50)分别为44.51、41.51μg/mL,且相对蛇葡萄素原料药,SMMC-7721细胞对AMP-NLC有较好摄取。结论Box-Behnken响应面法所建立的模型可用于AMP-NLC处方优化,AMP-NLC能有效提高蛇葡萄素在SMMC-7721细胞的相对摄取。

转铁蛋白修饰雷公藤甲素脂质体的制备与体外评价

目的制备转铁蛋白(transferrin,Tf)修饰的雷公藤甲素(triptolide,TP)脂质体(Tf-TP@Lip),并对其进行质量评价和体外靶向性研究。方法采用薄膜分散法制备Tf-TP@Lip,以包封率和载药量为考察指标,通过单因素考察和星点设计-效应面优化法筛选处方和最佳制备工艺;采用超滤离心法测定药物包封率;透射电子显微镜(TEM)观察脂质体微观形态;激光粒度仪测定脂质体的粒径、多分散指数(polydispersity index,PDI)和Zeta电位;并对其体外释放情况进行考察;采用流式细胞仪和荧光显微镜探究细胞摄取情况。结果优化后Tf-TP@Lip的处方和工艺:脂药比为5.72∶1,脂胆比为8.11∶1,磷脂与DSPE-PEG2000的质量比为6∶1,成膜溶剂为无水乙醇,成膜温度60℃。制得的Tf-TP@Lip平均粒径为(130.33±1.89)nm,PDI为0.19±0.03,Zeta电位为(-23.20±0.64)m V,包封率和载药量分别为(85.33±0.41)%和(9.96±0.21)%,TEM下呈球形,大小均匀、圆整。体外释放研究表明,Tf-TP@Lip相比游离TP具有一定缓释效果。与非靶向雷公藤甲素脂质体(TP@Lip)相比,转铁蛋白的修饰明显增加了SMMC-7721对脂质体的摄取效率。结论制备Tf-TP@Lip稳定、可行,粒径小、外观圆整且具备较高的包封率和载药量,可用于进一步的实验研究。