基于核酸适体的高通量模型筛选抗大口黑鲈虹彩病毒药物

【目的】利用可特异性识别大口黑鲈(Micropterus salmoides)虹彩病毒(Largemouth bass virus,LMBV)的核酸适体LBVA1建立药物高通量筛选技术(Aptamer LBVA1-based high-throughput screening,LBVA1-AHTS),以快速筛选有效抗LMBV药物。【方法】用探针FAM-LBVA1检测感染不同浓度[感染复数(MOI)分别为0、0.05、0.10、0.20]LMBV 48 h,以及感染LMBV 0、6、12、24和48 h的胖头鱥(Pimephales promelas)肌肉细胞(Fathead minnow cells,FHM)荧光值,并用激光共聚焦及荧光定量PCR(RT-qPCR)验证LMBV感染情况;将利巴韦林、阿昔洛韦、加巴喷丁、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯等9种药物分别以安全工作浓度与LMBV混匀,加入FHM细胞共孵育,运用探针FAM-LBVA1及RT-qPCR技术检测各组LMBV感染情况,比较两种方法检测的药物抗LMBV感染效果,筛选出有效抗LMBV药物。【结果】探针FAM-LBVA1检测及RT-qPCR技术验证结果均表明,在感染复数(MOI)为0.20、感染时间为48 h时,对LMBV感染的检测效果最佳。9种药物抗LMBV效果筛选结果表明,LBVA1-AHTS技术与RT-qPCR技术两种筛药方法筛选出利巴韦林、加巴喷丁、金刚烷胺、卡马西平、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯7种药物的抗病毒效果一致,其中茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯3种药物具有抗LMBV的效果,其余4种药物无明显抗病毒效果,两种方法一致率近80%。【结论】建立的LBVA1-AHTS模型可快速、准确、高效筛选出抗LMBV病毒药物,为快速筛选抗病毒药物提供理论和技术基础。

高通量筛选技术在体外线粒体毒性评价中的应用

线粒体功能障碍可导致细胞凋亡、坏死、代谢改变、肌无力、神经退行性病变、器官功能下降,并最终导致整个生物体疾病或死亡。线粒体毒性物质是导致细胞内线粒体数量减少或降低线粒体正常功能的化合物。高通量筛选(high throughput screening,HTS)技术在对线粒体毒性物质的检测应用方面具有巨大潜力。本文综述采用HTS方法体外测定线粒体毒性物质的研究进展,以期为线粒体毒性物质的筛选提供参考。

MTT法体外药敏实验预测宫颈癌细胞药物敏感性的初步探讨

背景与目的:近年来,宫颈癌新辅助化疗逐渐受到重视,应用广泛,但不同个体对不同化疗药物敏感性不同。本研究通过宫颈癌体外药敏实验来预测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,为临床筛选对宫颈癌相对敏感的化疗药物提供参考依据。方法:采用MTT法测定9种药物对32例宫颈癌患者的原代培养癌细胞的抑制水平。结果:①宫颈癌细胞对9种药物的敏感性依次为:力扑素>泰素>卡铂>异环磷酰胺>鬼臼乙叉甙>氟尿嘧啶>顺铂>博来霉素>环磷酰胺,力扑素、泰素和卡铂对肿瘤细胞的平均抑制率(IR)较高,分别为56.56%、55.66%和46.81%,与其它药物相比,差异有显著性(P<0.05)。②对Ⅰb1期宫颈癌细胞,泰素、力扑素和卡铂IR值较其它药物高,分别为58.71%、53.00%和49.25%;对Ⅰb2期宫颈癌细胞,力扑素和泰素的IR值较其它药物高,分别为65.26%和50.06%。③对于宫颈中分化鳞癌细胞,泰素、力扑素和卡铂IR值较其它药物高,分别为52.01%、49.21%和40.24%;对低分化鳞癌细胞,力扑素、泰素和卡铂的IR值较其它药物高,分别为61.16%、60.62%和48.75%。结论:①MTT法作为一种应用广泛的药敏实验方法,对宫颈癌新辅助化疗筛选敏感药物、选择临床化疗方案有一定的参考价值。②力扑素、泰素和卡铂对宫颈癌细胞较其它药物敏感。

体外微囊化肿瘤细胞模型的构建及其用于药物筛选的体外研究

目的:利用静电液滴法制备三维生长的微囊化人乳腺癌细胞球并初步用于抗肿瘤药物筛选。方法:实验于2004-02/07在中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料实验室完成。使用大功率高压脉冲微胶囊制备仪,制备微囊化人乳腺癌细胞(MCF-7),经体外培养5d可形成直径为125μm的微囊化多细胞肿瘤球并用于实验;在不同氧浓度下,抗癌药物丝裂霉素、阿霉素和5-氟尿嘧啶分别在0.1,1,10倍血浆峰值浓度下作用24,48,72h后测量微囊内细胞球的粒径、相差显微镜和苏木精-伊红染色观察细胞球形态并通过活/死染料定性细胞的活性、四甲基偶氮唑盐法定量测定微囊内细胞的活性以及溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖状态。结果:①人乳腺癌细胞微囊化后可继续生长、增殖并聚集成团,同时消耗葡萄糖并产生乳酸。微囊化肿瘤细胞表现出较强的增殖活性,当微囊内的细胞团增大到一定程度时中心可出现坏死区,但分布于团块外层的细胞仍具有增殖活性。②抗癌药物作用后,随药物浓度的增加和作用时间延长,微囊内细胞球的粒径减小、细胞增殖活性代偿性增加。活细胞减少,死细胞增多,四甲基偶氮唑盐显示细胞活性降低,与平面培养细胞相比,抗癌药物对微囊化乳腺癌细胞球的抑制率降低。从药物效果看,丝裂霉素的抗肿瘤效果好于5-氟尿嘧啶和阿霉素。③随氧浓度增高,微囊化人乳腺癌细胞对抗癌药物的敏感性增强。结论:微囊化多细胞肿瘤球模拟了体内组织的三维生长方式,并有望成为一种快速、有效的体外药物筛选模型。

抗HIV药物的体外筛选和研究方法

合适的体内外药物研究方法是研究和开发新药中最关键的环节之一。由于至今尚无理想的艾滋病(AIDS)动物模型 ,目前抗人免疫缺陷病毒 (HIV)药物的筛选和研究仍然主要依赖于各种体外的筛选和研究方法。本文简要综述了抗HIV药物的体外筛选和研究方法。

抗骨质疏松药物体外筛选试验方法的探讨

目的探讨抗骨质疏松药物体外筛选试验方法。方法采用成骨细胞、破骨细胞和骨髓基质细胞作为抗骨质疏松药物体外药效评价的细胞模型,对抗骨质疏松药物体外筛选试验方法进行了较为系统的综述和探讨。结果与结论应用多种细胞模型、采用多种检测指标可以从不同角度更充分、深入的说明药物的作用靶点和作用机制,在此基础上有望发现更好的治疗和预防骨质疏松的药物。

鸡毒支原体敏感药物的筛选

用泰乐菌素、强力霉素、罗红霉素、红霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、双氟沙星、呋喃唑酮、呋喃他酮、泰妙菌素等药物对 3株鸡毒支原体进行体外抑菌试验。结果证明 ,它们对鸡毒支原体均有抑菌作用 ,但以泰乐菌素、泰妙菌素、环丙沙星和双氟沙星抑菌效果最好 ,达到 1 0 8g/L。

单胺氧化酶抑制药物体外筛选模型的建立

目的:构建一种能用于治疗神经退行性变疾病单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)抑制药物的体外筛选模型。方法:采用紫外分光光度方法,以苄胺或5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)分别作为MAO-B或MAO-A的反应底物,测定其活性,并对MAO浓度、底物浓度、缓冲液浓度、pH值、反应时间和温度等进行优化。结果:研究确定的模型反应体系条件为:在温度37℃、酶预孵育时间20 min和反应时间60 min下,测定MAO-B活性最佳条件为100 mmol/L磷酸钾缓冲液(pH 7.6),MAO和底物苄胺的终浓度分别为0.15 mg/ml和2.00 mmol/L;测定MAO-A活性最佳条件为100 mmol/L磷酸钾缓冲液(pH 7.4),MAO和底物5-HT的终浓度分别为0.40 mg/ml和5.00 mmol/L。结论:建立了一种MAO抑制药物体外筛选的模型,该模型具有成本低、操作简便等特点,适合于大规模筛选MAO-B和MAO-A的抑制药物。

抗肿瘤药物体外筛选方法

肿瘤的化疗目前还是一项有效的治疗措施.但用于临床的抗肿瘤药物普遍存在选择性差、毒副作用大、易产生耐药性等问题,因此继续寻找选择性高、毒副作用小的抗癌药是抗肿瘤新药研究的重点.每年都有大量的植物提取物以及化合物出现,如何进行药物初筛仍是工作的一个重要环节.本文就常用抗肿瘤药物的体外筛选方法进行简要介绍.

抗肿瘤药物体外筛选技术研究进展

化学药物治疗在肿瘤治疗中占有重要地位。抗肿瘤药物体外筛选技术是从数量庞大的候选化合物中筛选理想的抗肿瘤药物的重要手段。本文综述了各种抗肿瘤药物体外筛选技术的原理、操作要点和各自的优缺点,并简要介绍了各技术的实际应用,旨在为开发抗肿瘤药物提供理论依据和方法学指导。

自制药敏片体外筛选鸡大肠杆菌敏感药物的试验

本试验选取鸡典型大肠杆菌病的临床病料进行细菌培养鉴定，再用自制药敏片体外筛选对鸡大肠杆菌敏感的药物用于临床治疗，并观察这些药物的治疗效果。

用体外培养的细粒棘球蚴生发细胞筛选抗包虫药物的研究

体外培养的细粒棘球蚴生发细胞经甲苯达唑(Meb)1.0阿苯达娃(Alb)2.5和吡喹酮(Pra)10.0μg/ml分别作用48、24和72h后,细胞的增殖均明显被抑制,且作用强度与体内疗效试验的结果相一致,即Meb>Alb>Pra。另11个化合物用体外培养的生发细胞测试时,生发细胞的增殖被抑制与否,亦与感染小鼠体内疗效试验的结果相吻合。初步认为体外培养的生发细胞可用以初筛抗包虫药物。

体外神经干细胞三维药物筛选模型的构建

研究目的：建立中药对神经干细胞诱导转变为神经细胞的体外模型，不仅对研究脑的发育和分化以及神经系统疾病的治疗具有重要价值，而且也有助于了解中药的作用机制，为中药的临床应用提供坚实的科学依据。本研究评价体外海马神经干细胞在胶原凝胶内的生长情况，探讨胶原凝胶作为神经系统组织支架材料的可行性，以建立适合于干细胞药物筛选及作用机理研究的三维培养模型。研究方法：①细胞培养：体外培养来源于孕13天胎鼠的海马部位神经干细胞，传至第三代；根据胶原的特性，把神经干细胞均匀混合于胶原的预凝胶溶液中，便可形成“细胞．胶原”的凝胶三维结构。②检测指标：倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察胶原凝胶中神经干细胞的生长、伸展情况；通用免疫细胞化学方法及荧光显微技术鉴定神经干细胞，BrdU染色标记增殖的细胞；采用CCK-8法及Live／DeadViability／CytotoxicityKit试剂盒检测神经干细胞不同培养条件下的生存和增殖能力，筛选出最佳的胶原工作浓度。结果：①倒置相差显微镜下观察发现胶原凝胶中的神经干细胞生长状态良好；

增殖性玻璃体视网膜病变的药物体外筛选试验

目的：研究４种药物对体外成纤维细胞培养的增殖抑制作用及有效浓度。方法：对传代培养的成纤维细胞经一定浓度的柔红霉素、阿霉素、地塞米松、５－ＦＵ培养４８ｈ后，观察细胞生长情况，并分别求得对兔皮肤成纤维细胞的半数抑制浓度（ＩＤ５０）。结果：柔红霉素、阿霉素对体外成纤维细胞的增殖均有显著抑制作用，呈浓度依赖性改变；地塞米松和５－ＦＵ的抑制作用相对较弱，但地塞米松分别与其他３种药物的半数抑制浓度合用后的效果，比单用上述４种药物的抑制作用明显增强。结论：柔红霉素、阿霉素能有效抑制体外兔成纤维细胞。

药物代谢的体外筛选系统

随着合成化学的发展，成千上万的新化学实体（NCEs）需要筛选。利用体外筛选技术在早期验证NCE在药物代谢方面的特性，对预测潜在的不良反应和药物相互作用是非常重要的。采用何种体外药物筛选系统应首先确定测定终点。转录激活检测往往较敏感，适用于高通量筛选，但其变化并不总是和酶活性变化直接相关。酶活性水平是通过测定经药物代谢酶催化产生的代谢物生成量，但探针底物的专一性已遭到质疑。在早期NCEs筛选和机制研究中，应选择基于转录水平的高通量筛选，在后期研发过程中，基于蛋白质组学的检测将更多地被应用。