薰衣草SRAP-PCR反应体系的建立及优化

为建立可靠并且稳定的SRAP-PCR反应体系,进一步开展新疆薰衣草种质资源的遗传多样性研究提供帮助。本研究采用L16(45)正交试验设计方法,对薰衣草SRAP-PCR反应体系主要影响因素DNA模板、Mg^2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶的用量进行了筛选,比较了5个因素对扩增效果的影响。试验结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响从大到小依次为:Mg^2+>引物>Tap聚合酶>dNTPs>DNA;建立的最佳反应体系为:总体积25.0μL,2.5μL 10×Buffer、Mg^2+浓度3.0 mmol/L、d NTPs浓度0.32 mmol/L、引物浓度0.24μmol/L、DNA模板量60 ng、Taq DNA聚合酶用量0.4 U,该体系经验证可以扩增出清晰、稳定且多态性较好的条带,可为开展后续的研究提供技术基础。

向日葵Pst Ⅰ和Mse Ⅰ内切酶组合AFLP标记体系的建立及引物筛选

为建立并优化适合向日葵的Pst Ⅰ和Mse Ⅰ组合的AFLP技术体系,为下一步构建遗传连锁图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础,对向日葵基因组DNA提取方法、酶切连接体系和选择性扩增程序的影响因素进行优化,并对适合向日葵AFLP分析的引物组合进行筛选。结果表明,模板DNA的提取采用改进CTAB法,酶切连接采用一步法反应14 h,在选择性扩增体系20μL中,Mg2+和d NTP浓度分别为2 mmol/L和0.3 mmol/L,选扩引物的浓度为0.6 mmol/L,预扩增产物最适稀释倍数为30倍。同时筛选出了稳定且多态性丰富的48对适合向日葵AFLP分析的引物组合。