应用负压气相培养系统生产体细胞克隆牛的研究

以 - 35℃低温冷冻保存 3个月的Vari Fe 8mos和Fahru Fe 9mos死亡牛胎儿皮肤上皮细胞 ,为核供体细胞 ,应用点击去核方法 ,和 - 30 0mmHg、2 %CO2 、8%～ 10 %O2 、38.5℃和 10 0 %湿度负压气相培养系统 (负压组 ) ,进行了克隆牛试验研究 ,并与吸引和挤压及常压培养法进行了比较。结果表明 ,采用点击去核法对体外成熟培养18h、2 2h、2 4h的卵母细胞进行去核 ,去核成功率分别为 90 .0 %、75 .8%和 5 5 .6 %,18h组显著高于 2 2h组 (P <0 .0 5 ) ,极显著高于 2 4h组 (P <0 .0 1) ;而且 ,点击去核法去核率为 90 .0 %,极显著地高于吸引法的 6 8.3%(P <0 .0 1) ,与挤压法去核率 88.3%差异不显著 ;采用点击去核法囊胚发育率达 34 .1%,显著高于吸引法的 18.0 %(P <0 .0 5 ) ,与挤压法的 2 0 .9%差异不显著。负压组重构胚的卵裂率达 70 .0 %,显著高于常压组的 6 3.8%(P <0 .0 5 ) ,负压组囊胚发育率达 35 .8%,极显著高于常压组的 2 3.2 %(P <0 .0 1) ,负压组克隆囊胚细胞数为 10 8± 3.3个 ,极显著多于常压组的 98± 3.3(P <0 .0 1)。将第 6天的克隆桑椹胚和囊胚每 2～ 3枚装入 1支 0 .2 5ml塑料细管中 ,移植给同期发情处理的 5头受体奶牛的黄体侧子宫角中 ,最终获得 2头牛妊娠 ,并于 2 0 0 1年 11月 3日和 11月

内蒙古首例体细胞克隆牛2日龄死亡后的病理学观察

为了查明内蒙古首例克隆牛死亡的原因,对其进行了尸体剖检和病理组织学观察。结果表明:该犊牛心脏肥大,质度变软,色彩不均,卵圆孔未闭合;局部肺小叶不张或呈气肿状态;皱胃粘膜出血、水肿,瘤胃、网胃、瓣胃粘膜为角化的复层扁平上皮,发育与成年牛相似。其他实质器官肝、脾、淋巴结等实质细胞明显变性、坏死、细胞溶解。

体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验

对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3%(35/112)极显著高于EPS10组的12.2%(13/107)(P<0.01),选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛“康康”和“双双”进行了超排试验,分别获得6枚(4枚可用胚)和10枚(9枚可用胚)胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛“双双”的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素(FSH)具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。

ASCL2基因在体细胞克隆牛和自然繁殖牛肺脏中的甲基化分析

为探讨ASCL2基因在体细胞克隆牛中的重编程状态,本研究通过亚硫酸氢盐测序法(BSP)对体细胞克隆牛和自然繁殖牛肺脏中ASCL2基因启动子区CpG岛上的CpG位点进行了甲基化状态分析。结果显示,体细胞克隆牛的甲基化水平(28.41%)显著高于正常对照组(7.62%)(P<0.05)。推测ASCL2基因的异常甲基化可能是造成体细胞克隆牛新生死亡及肺脏发育异常的原因之一。

体细胞克隆牛0～12月龄生长的测定研究

通过对5头体细胞克隆母犊牛及其同期自然繁殖出生的荷斯坦母犊牛初生期、6月龄、12月龄的体重、体尺指标测定,初步分析了其生长发育速度的变化规律。结果表明:(1)克隆牛初生重53.67±7.00kg,明显高于自繁奶牛(P<0.01),6月龄体重141.00±16.49kg,明显低于自繁奶牛(P<0.01),12月龄体重302.80±32.17kg,与自繁奶牛基本相当;(2)克隆牛0～6月龄期间平均日增重0.70±0.11kg明显低于自繁奶牛(P<0.01),6～12月龄期间平均日增重0.90±0.12kg,与自繁奶牛基本相当(P>0.05),0～12月龄期间平均日增重0.70±0.11kg,与自繁奶牛基本相当(P>0.05);(3)克隆牛初生体尺指标明显大于自繁奶牛(P<0.01),6月龄体尺指标明显小于自繁奶牛(P<0.01),12月龄体尺指标与自繁奶牛相当(P>0.05);(4)克隆牛0～6月龄期间体尺平均增长明显低于自繁奶牛(P<0.01),6～12月龄期间体尺平均增长明显高于自繁奶牛(P<0.01),0～12月龄期间体尺平均增长明显低于自繁奶牛(P<0.01)。

掌握国际最先进技术内蒙古首例体细胞克隆牛降生

内蒙古自治区首例体细胞克隆牛6月25日11时29分在呼和浩特市和林格尔大正美联胚胎移植基地降生。

世界首例体细胞克隆牛在广西大学诞生

2004年11月19日上午10点50分，世界首例体细胞克隆水牛在广西大学诞生。这项技术的成功，将使我国具有培养更多优质水牛的能力。

河北邯郸首例体细胞克隆牛在磁县诞生

近日．河北邯郸首倒双胞胎细胞克隆牛在磁县伊康牧业有限公司奶牛小区顺利降生．这标志着国家奶牛新品种培育项目在磁县获得了初步成果．这是磁县农牧局与中国农大和北京美利农科技有限公司畜牧科技项目成功合作的结晶。

我国首例体细胞克隆牛“生子”通过鉴定

莱阳农学院的“体细胞克隆牛繁殖机能检测及胚胎移植试验研究”课题在济南顺利通过鉴定委员会鉴定，这标志着我国首次利用自己培育的体细胞克隆牛繁殖后代获得了圆满成功。

转基因体细胞克隆牛再克隆成功

我国第二批转基因体细胞克隆牛再克隆体在河北唐山芦台经济开发区新华奶牛场陆续开始生产，于2006年9月23日晚成功降生第一头，出生体重达到42．5公斤。经过为期一周的密切观察，该牛犊各项生理指标正常，非常健康。

我国首批体细胞克隆牛喜当“奶奶”

笔者从山东莱阳农学院了解到，我国首批体细胞克隆牛“双双”的第三代日前降生，也就是说“双双”当上了“奶奶”。这两头刚刚降生的小牛犊是采用胚胎移植的手段成功繁殖的。

体细胞克隆牛研究及产业化开发

青岛农业大学“体细胞克隆牛技术研究”创新团队于2001年11月3日和6日分别做出我国首例和第二例健康成活的体细胞克隆牛“康康”和“双双”。经鉴定，该项目技术水平达到了国际先进水平．在某些技术方面（如点击去核法等）达到国际领先水平。该项成果于2001年获山东省教育厅高等院校优秀科技成果特别奖．

转基因体细胞克隆牛“二次克隆”10头小牛

由中国农业大学教授李宁主持的中国首批转基因体细胞克隆牛再克隆项目近日告一段落，在1个多月时间里，共有10头“二次克隆”牛在山东科龙畜牧产业有限公司梁山县基地成功降生。

带有抗疯牛病转基因体细胞克隆牛降生

本刊讯：4月25日1头特殊的体细胞克隆牛犊在山东省莱阳农学院高青科技成果转化基地——淄博小黑牛牧业科技有限公司降生。这头通体黑亮的小牛犊是采用了转基因克隆技术．使其体内带有抗疯牛病基因的牛。据莱阳农学院教授董雅娟博士介绍．这一研究不仅获得了抗疯牛病的转基因体细胞克隆牛．而且建立起了一套行之有效的转基因技术体系。

带有抗疯牛病转基因体细胞克隆牛在山东降生

一头特殊的体细胞克隆牛犊，4月25日17时17分在山东省莱阳农学院高青科技成果转化基地——淄博小黑牛牧业科技有限公司降生。这头通体黑亮的小牛犊是采用了转基因克隆技术，使其体内带有抗疯牛病基因。

国内首批转基因体细胞克隆牛再克隆成功

由中国农业大学研究的再克隆转基因体细胞克隆牛在山东科龙畜牧产业有限公司“金牛园”降生，这是中国首批转基因体细胞再克隆牛。从2005年12月20日至今，克隆牛已出生5头，健康存活3头。