人DNA聚合酶Polι体细胞基因敲除载体的构建

应用体细胞基因敲除技术的方法和原理,通过PCR扩增获得同源短臂和长臂,将其插入骨架载体pPL622,酶切鉴定插入方向并测序确证,成功构建了人Polι基因的击靶载体PSP-PLA,其中同源短臂长980 bp,长臂长3 217 bp。

人大肠癌细胞系HCT116中Sirt 1基因敲除细胞株的构建

目的利用AAV介导的体细胞基因敲除技术,在人大肠癌细胞系HCT116中对靶基因Sirt 1进行敲除,达到基因沉默的目的。方法构建Sirt1打靶载体,通过病毒包装、感染、药物筛选、PCR鉴定、Western blotting鉴定等步骤获得Sirt 1基因敲除的细胞株。结果经过筛选和鉴定后获得两个Sirt1-/-阳性克隆,成功构建HCT116 Sirt1-/-细胞系。结论通过体细胞敲除技术,我们成功地获得Sirt1敲除肠癌细胞株。