用引物原位合成和体细胞杂种克隆板将猪微卫星SW943定位于12p11～(2/3p13)

以Dig 11 dUTP为报告分子 ,运用猪微卫星SW 94 3引物在猪减数分裂粗线期二价体 (下称二价体 )上进行引物原位DNA合成 (primedinsitulabeling ,PRINS) ,用鼠抗地高辛、兔抗鼠、羊抗兔抗体检测引物原位合成结果对SW 94 3进行定位研究 ,同时运用包含猪 啮齿类 2 7个细胞系的杂种细胞克隆板 ,通过PCR扩增进行SW 94 3的定位 ,结果将猪微卫星SW 94 3定位于 12 p11～ (2 /3p13)。

利用体细胞杂种克隆板进行染色体区域定位的数据分析

利用猪×啮齿类体细胞杂种克隆板对本室新克隆和分离的猪胶质细胞原纤维酸性蛋白 (glialfibril laryacidicprotein ,GFAP)基因进行染色体区域定位 ,对应用体细胞杂种克隆板进行染色体区域定位的试验数据统计的基本过程和方法进行了分析 ,研究结果表明 :猪GFAP基因定位于染色体 12p11- (2 /3p13)区域 (P <0 .1% ) 。

运用PRINS和体细胞杂种克隆板对猪新微卫星的定位

本研究采用引物原位DNA合成(PRINS)技术,结合体细胞杂种克隆板,将新克隆的猪微卫星HAU02和HAU06定位于1q23-27、6q11-21。并对这两种基因定位方法的优缺点和应用进行了比较和讨论。这对于我国进行猪基因定位工作开展提供了思路;同时,新微卫星的定位为建立猪染色体物理图谱积累了有益的资料。

一个新的猪肌肉组织EST的分离、定位与表达

利用mRNA差异显示技术 ,从猪骨骼肌组织中分离到一个新的表达序列标签 (expressedsequencetag,EST)ESThp9 1(其GenBank登录号 :BI5 96 2 6 2 ) ,其序列长 196bp ,经BLAST程序与GenBank中存在的序列比对后 ,发现与猪的所有序列无同源性 ,但与大鼠的U3A核内小RNA基因及小鼠的U3B .4核内小RNA基因同源性分别为 87% (93个碱基 )和 85 % (96个碱基 )。半定量RT PCR表明 ,此EST在猪的多数组织中均有表达。通过体细胞杂种板(somaticcellhybridpanel,SCHP)及辐射杂种板 (radiationhybridpanel,RH)分析 ,ESThp9 1被定位于猪的 12号染色体长臂 ,与微卫星标记S0 0 90连锁。根据同源性比对和物理定位结果 ,推测ESThp9 1为猪的U3基因家族中一员。