神经前体细胞移植治疗大鼠急性脊髓损伤的功能评价

目的 :神经前体细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的行为变化及功能评价。方法 :采用改良Allen法建立大鼠脊髓损伤模型 ,术后 9d ,实验组脊髓损伤局部注射移植永生化神经前体细胞系G3。采用只注射培养液和不作治疗处理作为对照组。细胞移植后 ,采用BBB评分进行功能评价 ,每周评分 1次 ,检测脊髓损伤大鼠后肢运动功能的改变。分别在细胞移植的第 8周和第 12周进行运动诱发电位的神经电生理检查 ,检测脊髓的传导功能。结果 :实验组移植永生化神经前体细胞后 ,其BBB评分和对照组相比差异无显著性 ;但运动诱发电位与对照组相比明显提高。结论

脊髓前体细胞移植在大鼠臂丛神经根性撕脱伤中的应用研究

目的观察脊髓前体细胞移植对臂丛神经根性撕脱伤的疗效。方法将54只大鼠制作左侧臂丛神经根性撕脱伤,行撕脱神经根移植术动物模型,分为新鲜组、陈旧组及对照组,每组18只。培养脊髓神经前体细胞,并进行传代和分化,鉴定、标记后分别于模型制作1周(新鲜组15只)和2个月(陈旧组14只)以1×105/μl脊髓前体细胞植入存活动物模型体内,对照组(12只)不植入细胞。细胞移植后2个月行大鼠运动功能恢复评定,观察电生理变化,并行免疫组织化学观察移植细胞。结果获取的异体脊髓前体细胞能增生为神经球,分化为神经元及神经胶质细胞。新鲜组大鼠14只运动功能恢复,其中2只5分,2只4分,6只3分,4只2分,1只无恢复;陈旧组7只功能恢复,1只3分,2只2分,4只1分,7只无恢复;对照组5只功能恢复,1只3分,1只2分,3只1分,7只无恢复。且功能恢复良好的大鼠神经电生理也恢复。免疫组织化学观察:新鲜组移植细胞分化成有较长突触的运动神经元;陈旧组移植细胞成团存在,分化不良。结论臂丛神经根性撕脱伤行撕脱神经根移植术后,早期移植1×105/μl脊髓前体细胞具有促进其恢复作用。

胚胎干细胞源性神经前体细胞移植脑缺血大鼠局部细胞的免疫反应

背景:神经前体细胞的免疫原性各家研究结果不一,尤其是体内移植后的机体免疫反应模式需要进一步研究。目的:体外观察神经前体细胞组成型及诱导型主要组织相容性抗原表达情况;体内观察神经前体细胞移植入大鼠脑缺血组织后局部免疫细胞活化情况,探讨神经前体细胞的移植排斥可能性及模式。方法:自pCX-hrGFP ES-D3胚胎干细胞诱导分化神经前体细胞,流式细胞术体外检测主要组织相容性抗原Ⅰ,Ⅱ类分子表达及γ-干扰素诱导前后表达变化。实验分3组,磷酸盐缓冲液组、神经前体细胞组分别于大脑中动脉缺血大鼠模型造模后经侧脑室给予磷酸盐缓冲液注射及神经前体细胞移植,假手术组不造模。免疫组化法观察纹状区ED1+、CD4+、CD8+细胞浸润情况;淋巴细胞再刺激增殖实验观测神经前体细胞诱导移植大鼠颈部淋巴细胞的增殖指数。结果与结论:神经前体细胞组成型高表达主要组织相容性抗原Ⅰ类分子,几乎不表达主要组织相容性抗原Ⅱ类分子;经γ-干扰素诱导后,主要组织相容性抗原Ⅰ类分子进一步上调,主要组织相容性抗原Ⅱ类分子亦有轻度上调,提示神经前体细胞有可能引起机体免疫反应。移植实验表明,与假手术组相比,磷酸盐缓冲液组及神经前体细胞组均表现强烈的ED1+、CD4+、CD8+细胞浸润(P<0.05),说明脑缺血损伤本身能导致局部免疫细胞活化;神经前体细胞组比磷酸盐缓冲液组有更强的ED1+、CD4+细胞浸润(P<0.05),提示神经前体细胞移植可能导致局部免疫更进一步活化,且以CD4+T细胞反应为主。磷酸盐缓冲液组及神经前体细胞组神经前体细胞诱导下的增殖指数值均较假手术组升高(P<0.01),但前两组增殖指数值比较差异无显著性意义(P>0.05),提示脑组织局部炎症导致颈部淋巴细胞增殖性增加,而离体神经前体细胞不足以单独刺激致敏淋巴细胞增殖。

表达人胶质细胞生长因子的人神经前体细胞移植可促进帕金森病大鼠多帕胺能神经元修复

背景及目的：将胶质细胞生长因子（glial cell line-drived neurotrophic factor，GDNF）导入脑内来减少多巴胺能神经元的退变，可能成为治疗帕金森病的重要手段。我们将表达GDNF的人神经球细胞移植到6-OHDA单侧损伤动物模型，研究GDNF对大鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法：GDNF或GFP被克隆人SIN-W-PGK慢病毒载体，转染人神经球细胞。

大鼠神经前体细胞移植治疗暂时性脑缺血实验研究

将大鼠胚胎神经前体细胞移植到暂时性大脑中动脉梗塞(tMCAO)模型大鼠的缺血半暗区,观察神经前体细胞在缺血区的迁徙、分化情况.评价神经前体细胞移植对缓解缺血后神经功能损害的作用.

自体细胞移植治疗坏死心肌的研究与进展

心肌梗死后造成的大面积心肌坏死或顿抑常使患者发生严重心功能不全，而自体细胞移植治疗坏死心肌技术的出现使其成为一项有前景的治疗策略。此项治疗方法目前分两种方式：①骨髓干细胞活化或种植使心肌再生，②取包括自体心肌，骨骼肌，血管平滑肌等细胞在内的成熟活细胞扩增并种植到心肌坏死区域。在过去的十余年中，各国的医疗和研究人员对心肌移植的可行性做了大量的动物实验并成功的将骨骼肌种植存人体心脏，

内蒙古首例克隆奶牛体细胞移植成功

近日，一头经过奶牛体细胞克隆胚胎的高产奶牛，经过妊娠检查后确认已经怀孕，预期2005年6月产犊。这在内蒙古自治区尚属首次。标志着高产奶牛体细胞克隆技术向前迈进了一大步。

体细胞核移植技术及应用

体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一种能使已分化的体细胞获得全能性(totipotency)的技术,在发育生物学、生物医学研究和农业应用方面具有重要价值。该技术主要包括卵细胞去核和核供体细胞植入两个环节。文章综述了SCNT技术的原理、流程、应用等,以期为SCNT技术的研究与应用提供参考依据。

体细胞核移植技术在肉牛育种上的研究进展

目前,国内肉牛产业发展迅猛,亟需提升养殖效能与肉牛品质。体细胞核移植技术(Somatic cell nuclear transfer, SCNT)作为先进繁殖生物技术,在推动肉牛遗传育种发展上起到了关键作用。该文详细分析了SCNT原理及在国内外肉牛育种上的应用研究现状,探讨其研究进展与提升遗传品质的显著优势。同时,分析了SCNT面临的操作低效、胚胎存活率低及重构胚胎发育异常等挑战,这些限制了SCNT技术在肉牛育种的广泛应用。展望未来,需不断改进SCNT技术,提升克隆效率与存活率,并探索与基因编辑等新兴技术融合,加快肉牛遗传育种工作进展。

犬急性脊髓损伤后神经前体细胞移植

一、材料与方法 经端粒酶转染人胚胎脑室下区（SVZ）细胞建立永生化的神经前体细胞系，并转基因表达绿色荧光蛋白（GFP）用于标记和示踪。制作犬T13脊髓左半横断损伤模型。实验组动物8只，于损伤后1周行细胞移植。移植部位位于脊髓半切损伤头侧和尾侧临近区域的灰白质交界处，每点50山，细胞总数2×10^6；移植对照组动物2只，方法同上，注射等量生理盐水；损伤对照组2只，单纯行半横切损伤不作移植。分别于损伤前、移植前、移植后1周、4周观察动物行为学改变、MEPs检查。使用GE1．5T SignaTwinSpeed磁共振扫描仪行MRI和DTI检查，测量脊髓损伤侧和健侧的水分子表观扩散系数ADCs和部分各向异性FA值。

光感受器前体细胞移植可修复视网膜损伤

年龄相关性黄斑变性（AMD）和视网膜色素变性（RP）这一类难治性视网膜疾病，其致盲的主要原因是视网膜光感受器（即光感细胞）的损伤和缺失。在过去的几十年中，研究人员做了大量的工作去探索修复这种视网膜光感细胞的有效方法，其中细胞替换疗法，即视网膜光感细胞（包括脑源性和视网膜源性的干细胞）移植一直是研究热点，但尚无实验能证明视网膜细胞移植对修复受损的视网膜光感受器并恢复视力有确切的帮助。但最近英国伦敦大学眼科中心和Moorfields眼科医院的一项联合研究给人们带来了希望，他们的研究结果表明，采用特定时期的视网膜光感细胞前体作为移植细胞能够成长为具有功能活力的视网膜光感受器。

不同供体细胞及其处理对猪核移植重构胚体外发育的影响

系统探讨了体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响。体外成熟培养40～44h的猪卵母细胞去核后，将经血清饥饿（0．5％FBS）培养2～9天、0．1mg／L Aphidicolin（APD）培养＋0．5％FBS培养2～9天或一般培养法（10％FBS）培养的卵丘细胞、颗粒细胞、输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞，直接注射到去核的卵母细胞质中，或注射到卵周隙中，再经电融合（100V／mm，30μs，电脉冲1次）构建重构胚．重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6．DMAP激活处理，体外培养6天。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0．1mg／LAPD＋0．5％FBS培养处理后的重组胚卵裂率，均高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞（P〈0．01）。卵丘细胞、颗粒细胞经0．1mg／LAPD＋0．5％FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均高于输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞（P〈0．05）。以猪颗粒细胞为核供体时，电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法（P〈0．05），但囊胚发育率无显著差异（P〉0．05）。培养3代和6代的猪颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞，其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异（P〉0．05）；以这2种细胞不同培养代数做供体进行核移植时，各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异（P〉0．05）。这些结果表明：（1）猪耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定；（2）0．1mg／LAPD预培养处理供体细胞能提高猪体细胞核移植的效果，血清饥饿培养则无明显效果；（3）猪颗粒细胞和耳皮成纤维细胞等均可做供核细胞，核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚，但前者的效果略优于后者，且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响；（4）电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法，但两者的总体效率相近。

猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养

目的本研究系统比较了体外受精胚(IVFEs)、孤雌激活胚(PAEs)以及体细胞核移植胚(NTEs)的发育率和囊胚质量,同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。方法利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术分别生产猪的NTEs、IVFEs和PAEs,开展体外培养。结果(1)IVFEs、PAEs和NTEs的卵裂率分别为72.0%,66.0%和63.5%,各组间没有显著差异(P>0.05);囊胚形成率分别为11.0%,22.6%和16.9%,也不存在明显不同(P>0.05);然而,在囊胚质量,即ICM细胞数/总细胞数的比例上,IVFEs和NTEs均优于PAEs(0.448%,0.356%vs 0.122%,P<0.05)。(2)对PAEs来讲,以PZM-3为基础培养基时囊胚率明显高于以NCSU-23为基础培养基时的处理组(35.4%vs.22.6%,P<0.05);而对NTEs而言,两种培养基在支持胚胎形成囊胚方面的效果相当(26.6%vs.21.1%,P>0.05),虽然PZM-3培养时胚胎卵裂率显著低于NCSU-23培养组(47.5%vs.63.5%,P<0.05)。结论(1)PAEs的囊胚质量在3种来源的胚胎中最差;(2)对PAEs理想的培养基,当用于NTEs培养时却不一定是最佳的选择。

TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达

不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时TSA能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了TSA处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,TSA同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论TSA处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。

牛供体细胞的来源、血清饥饿和预激活对核移植卵体外胚胎发育的影响

牛皮肤成纤维细胞经血清饥饿或预激活处理后获得核胞体 ,并注入去核卵母细胞内构建重组胚。检查重组胚 2 4h和 36h卵裂率以及 8d囊胚率 ,以评估供体细胞及其处理方法对体细胞核移植效果的影响。实验结果表明 :来自 3个年龄 (6、 18和 36月龄 )、 2个品系 (红安格斯肉牛和荷斯坦奶牛 )的 4头供体牛皮肤细胞重组胚的卵裂率和囊胚率均无差异。生长到完全汇合的 36月龄荷斯坦牛供体细胞血清饥饿 10～ 13d组重组胚的 36h卵裂率显著低于 0d (对照 )、 3～ 5d和 6～ 9d组 ,囊胚率显著低于 3～ 5d组 ;经 5 μmol/L离子霉素或7%乙醇预激活 5min重组胚的卵裂率和囊胚率均与对照组无差异。

盘羊供体细胞对异种核移植效率的影响

【目的】利用核移植技术生产异种重构胚,研究供体细胞对异种核移植效率的影响。【方法】以新疆盘羊和绵羊耳皮肤组织建立成纤维细胞系,进行细胞遗传学分析;以来自不同个体、不同代次、不同汇合度和不同保存方式的盘羊成纤维细胞为核供体,当地绵羊卵母细胞为受体,进行异种重构胚的构建。【结果】来自3只盘羊耳皮肤成纤维细胞的异种重构胚的卵裂率与囊胚率均无显著差异;采用10代以内的细胞作为核供体,细胞代次不会影响重构胚的发育率;生长到70%～80%汇合的供体细胞重构胚的囊胚率显著高于刚完全汇合组和汇合2～4d组;将供体细胞4℃保存2d,虽降低了卵裂率,但囊胚率没有受到显著影响;盘羊的染色体数目为2n=56,核型式为4(M)+50(T),XY(T,M);绵羊的染色体数目为2n=54,核型式为6(M)+46(T),XY(T,M)。【结论】利用本试验中的3只盘羊耳成纤维细胞,培养到10代以内、70%～80%汇合后用于构建异种重构胚,能得到较高的早期胚胎发育率。

体细胞核移植技术在猪基因修饰中的应用

基因修饰猪作为一种理想的动物模型已应用于生物医学研究。构建基因修饰猪的方法很多,包括原核注射、慢病毒转染、精子介导和体细胞核移植等,其中体细胞核移植具有显著优势,一直是构建基因修饰猪的重要方法。近几年,随着转座子、设计核酸酶等基因修饰新技术以及诱导性多能干细胞研究的不断进展,将进一步凸显体细胞核移植技术在基因修饰猪构建中的价值。本文比较了猪基因修饰的主要方法,并论述体细胞核移植技术在猪基因修饰中的优势、发展历程和最新应用等。

影响猪体细胞核移植重构胚体外发育的若干因素

以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚,卵裂率达到56.7%,发育至桑椹胚达11.7%、孵化囊胚率为6.7%,显著高于成纤维细胞组成的重构胚(p<0.05)。我们研究了卵母细胞的采集方法,激活方法和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导至GO或G1期,抽吸法/解剖法采集卵母细胞,体外培养33或44 h,将卵丘细胞置于去核卵母细胞的卵周隙中,重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6-DMAP激活处理,体外培养6天,结果表明,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松弛素(CB)并不影响重构胚的发育(以卵龄44h的卵母细胞为受体);而以电脉冲结合6-DMAP激活处理能提高重构胚发育能力(以卵龄33 h的卵母细胞为受体)(p<0.05)。本研究显示,以电脉冲结合6-DMAP激活卵丘细胞重构胚。