体轴抑制因子1敲除及过表达对ACT-1人未分化甲状腺癌细胞中B细胞淋巴瘤-2表达影响的初步研究

目的探讨体轴抑制因子1(AXIN1)的敲除及过表达对ACT-1人未分化甲状腺癌细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)影响及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测ACT-1人未分化甲状腺癌细胞与Nthy-ori-3-1人正常甲状腺细胞中AXIN1 mRNA水平表达差异。采用体外分子克隆技术及过表达技术构建AXIN1基因过表达ACT-1细胞系,RT-qPCR及蛋白质免疫印迹法(WB)分别检测其AXIN1 mRNA及蛋白表达水平。在前期构建成功的AXIN1敲除的ACT-1单克隆细胞基础上,结合本实验构建的过表达细胞系,采用RT-qPCR及WB分别检测两组细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,ACT-1中AXIN1表达降低,过表达组AXIN1 mRNA和蛋白表达水平增加,过表达组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低,而敲除组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均增高(P<0.05)。结论敲除及过表达AXIN1基因可能通过改变Bcl-2的表达来影响ATC肿瘤发生过程。

Axin抑制A549细胞迁移能力及其机制的研究

目的:Wnt信号传导通路的异常激活在肿瘤发生和发展中起着重要的作用,而Axin可以通过参与形成降解复合体下调β-catenin负向调控Wnt通路,抑制肿瘤细胞的恶性生物学行为。本次实验的目的是研究Axin对肺癌细胞迁移能力的影响及可能的途径。方法:在已有野生型Axin质粒的基础上构建了突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变,用AxinΔβ-ca表示),并向A549细胞中转染野生型Axin和突变型Axin。Western blot法检测转染后Axin和β-catenin的表达。用各转染组细胞进行划痕实验和Tr-answell细胞迁移实验。结果:转染野生型Axin可以明显的下调A549中β-catenin的表达(P<0.01),抑制A549细胞的迁移能力(P<0.01),而转染突变型Axin和空质粒后A549细胞中β-catenin没有明显的变化,细胞的迁移能力未受到明显的影响。结论:体轴抑制因子Axin可以明显的抑制肺癌细胞的迁移能力。而这种作用可能与其负向调控Wnt通路有关。Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点。

RP11-23J9.4-miRNA-15a-体轴发育抑制因子2-Wnt通路在甲状腺癌中可能作用的研究进展

甲状腺受碘缺乏、酶缺陷、药物、自身免疫等因素的影响易发生疾病,尤其甲状腺癌发病率逐年上升,已严重危害人类身体健康。因此,研究甲状腺癌的浸润和转移过程,探讨癌细胞转移的分子机制,寻找甲状腺癌中差异性表达基因、预测转移的生物标记和干预治疗的靶分子,对于进一步提高患者治愈率与生存率具有重要的意义。文章通过对长链非编码RP11-23J9.4-miRNA-15a-体轴发育抑制因子2-Wnt通路在甲状腺癌的发生、发展甚至失分化过程中的可能作用进行综述。

Axin1基因多态性与隐睾易感性的相关性研究

目的:探讨体轴抑制因子Axin1的3个Tag SNP的基因分布频率与隐睾的发病风险的相关性。方法:采用PCRRFLP方法对113例隐睾患儿和179名正常儿童进行分型检测,对比分析两组不同基因型的分布频率。结果:rs370681的T等位基因(P=2e-4,OR 1.96,95%CI 1.37~2.78),T/T基因型(P=6e-4,OR 4.00,95%CI 1.79~9.09),C/T-T/T基因型(P=4e-4,OR 2.44,95%CI 1.47~4.00)是隐睾的患病风险因素。rs1805105的基因型分布结果发现,与T/T相比较,C/C-C/T基因型隐睾风险增高1.64倍(P=0.041,95%CI 1.02~2.63),与T/T-C/C基因型相比,C/T基因型携带者隐睾症风险增加1.72倍(P=0.032,95%CI 1.05~2.86)。结论:rs370681的T等位基因和T/T基因型及rs1805105的C/T基因型在隐睾患儿分布频率更高。

AXIN1和Periostin蛋白与子宫内膜异位症预后或复发的相关研究

目的探讨体轴发育抑制因子(AXIN1)和骨膜蛋白(Periostin)与子宫内膜异位症预后或复发的关系以及其预测价值。方法纳入2019年2月至2021年2月该院收治的子宫内膜异位症患者78例为研究组,选择同期到该院进行健康体检的健康志愿者24例为对照组。研究组治疗后3个月随访,子宫内膜异位症复发者为复发组(29例),未复发者为未复发组(49例)。采集治疗前研究组和对照组受试人员的血清,并检测血清中AXIN1和Periostin蛋白的表达水平以及相关激素水平。结果研究组血清AXIN1和Periostin蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组血清AXIN1和Periostin蛋白表达水平、雌二醇水平、孕酮水平、促卵泡激素水平均高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清AXIN1和Periostin蛋白表达水平与雌二醇水平、孕酮水平、促卵泡激素水平均呈正相关(P<0.05)。AXIN1和Periostin蛋白单向预测子宫内膜异位症复发的灵敏度分别为97.48%和93.50%,特异度分别为95.29%和96.01%。AXIN1和Periostin蛋白联合检测对子宫内膜异位症复发预测的灵敏度96.55%,特异度为95.92%,准确度为96.15%。结论血清AXIN1和Periostin蛋白的检测可作为预测子宫内膜异位症复发的潜在生物标志物。

Axin抑制肺腺癌SPC-A-1细胞系侵袭的作用和可能机制

目的 Wnt通路的异常激活与恶性肿瘤的发生和进展关系密切,我们在前期研究中发现肺癌中也有Wnt通路异常激活的现象,而体轴抑制因子Axin是Wnt通路的抑制因子,本研究的目的是探讨Axin对肺癌细胞侵袭力的影响及其机制。方法构建野生型和突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变),转染人肺腺癌SPC-A-1(SPC)细胞,应用GSK-3βsiRNA阻断β-catenin的降解,Western bolt检测各处理组细胞中β-catenin和MMP-7的变化,Transwell检测各处理组细胞侵袭能力的变化。结果转染野生型Axin明显的下调β-catenin和MMP-7的蛋白表达以及SPC细胞的侵袭力(P<0.01),而GSK-3βsiRNA可以阻断Axin的这种功能,转染突变型Axin不能有效的下调β-catenin和SPC细胞的侵袭能力。结论 Axin抑制SPC细胞的侵袭力,可能与其下调β-catenin,负向调控Wnt通路有关,Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点。

Axin基因异常高甲基化对肺癌细胞生物学行为的调节

目的体轴抑制因子Axin是Wnt信号传导通路的关键抑制因子,本研究探讨部分肺癌细胞系中Axin表达下调的原因,及其表达下调对肺癌生物学行为的影响。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)对BE1和SPC-A-1细胞系中Axin基因启动子区和第一内含子区的甲基化状态进行了检测,应用RT-PCR方法检测了两细胞系中AxinmRNA表达。利用野生型Axin质粒转染两种细胞,并且应用MTT和Transwell细胞侵袭实验观察两种细胞系在转染后细胞生物学行为的变化。结果 BE1细胞中Axin基因的启动子区和第一内含子区为高甲基化状态,而SPC细胞为非甲基化状态,BE1细胞中AxinmRNA的表达明显低于SPC细胞系(P<0.05),5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine)作用于BE1细胞可以使高甲基化的Axin基因去甲基化并上调Axin的转录。转染野生型Axin可以明显抑制BE1细胞和SPC-A-1细胞的增殖和侵袭(P<0.05),其中BE1细胞受到的抑制程度更为明显。结论 Axin基因高甲基化可能是其在肺癌中表达下调的重要原因,过表达Axin可以明显抑制Axin高甲基化肺癌细胞的增殖和侵袭能力。

非小细胞肺癌中Axin基因启动子区异常高甲基化与临床病理因素的关系

目的体轴抑制因子(Axin)是Wnt信号传导通路的关键抑制因子,其基因启动子区存在CpG岛,本研究的目的是探讨非小细胞肺癌组织中Axin基因启动子区是否存在异常高甲基化,以及高甲基化对Axin转录水平的影响,及其与肺癌患者临床病理因素的关系。方法应用巢式甲基化特异性PCR(Nested MSP)对98例肺癌组织及其配对癌旁正常肺组织中Axin基因启动子区的甲基化状态进行了检测,同时应用RT-PCR方法检测了肺癌组织及其配对癌旁正常肺组织中Axin mRNA的水平,并且通过卡方检验统计Axin基因启动子区高甲基化状态与肺癌患者临床病理因素的关系。结果部分非小细胞肺癌组织中Axin基因启动子区处于高甲基化状态(42/98),而其配对的癌旁正常肺组织中Axin基因处于半甲基化或非甲基化状态(56/98),高甲基化的肺癌组织中Axin mRNA的水平明显低于其配对癌旁正常肺组织及非高甲基化的肺癌组织中Axin mRNA的水平;Axin基因启动子区异常高甲基化与非小细胞肺癌患者的分化程度负向关,与TNM分期及淋巴结转移正相关。结论非小细胞肺癌中Axin基因启动子区高甲基化与Axin的转录水平和非小细胞肺癌的分化程度负相关,与TNM分期及淋巴结转移正相关。

AXIN在介导神经胶质瘤细胞凋亡中的作用

【目的】探讨体轴发育抑制因子(axis formation inhibitor,AXIN)在介导神经胶质瘤细胞凋亡中的作用。【方法】取人脑胶质瘤细胞系U373MG培养至对数生长,设为两组,每组设置3个复孔,AXIN过表达组构建AXIN过表达质粒并转染,对照组不给予任何特殊干预。采用Western blotting检测AXIN过表达质粒的表达效果。通过PI染色探究AXIN过表达对神经胶质瘤细胞凋亡水平的影响,通过检测细胞的氧化应激活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平进一步探究细胞凋亡的原因,通过Western blotting进一步探究AXIN对凋亡相关分子的表达调控。【结果】AXIN过表达组AXIN的相对表达量明显高于对照组(P<0.05);AXIN过表达组细胞凋亡水平明显高于对照组(P<0.05);AXIN过表达组细胞内ROS含量明显高于对照组(P<0.05);AXIN过表达组caspase-9、caspase-3蛋白的相对表达量均明显高于对照组(P<0.05)。【结论】AXIN过表达能够促进细胞凋亡,推测与上调caspase-9、caspase-3蛋白,增加ROS含量有关。