何首乌饮介导DNMT1调控DNA甲基化促进大鼠Leydig细胞功能

为探讨何首乌饮介导基因表观遗传(DNA甲基化)的改变对大鼠睾丸间质细胞(Leydig)分泌睾酮的影响,选用12、18月龄Wistar雄性大鼠睾丸组织,甲基化芯片筛选出受何首乌饮调控并与精子发生功能密切的基因AXL、Ttc29、wnt2b、MAPK10、C-myb,甲基化特异性PCR(MSP)与实时荧光定量PCR(RTqPCR)技术检测基因甲基化水平及mRNA表达水平;BrdU荧光染色观察细胞增殖情况;慢病毒转染敲低Leydig细胞DNMT1,分析wnt2b、C-myb甲基化程度和睾酮分泌水平是否受DNMT1影响.结果显示:何首乌饮可调控衰老大鼠睾丸组织中关键基因DNA甲基化和mRNA水平,促进细胞增殖和睾酮分泌;敲低Leydig细胞DNMT1后,细胞分泌睾酮水平降低,同时wnt2b和C-myb DNA甲基化水平也明显下降.这表明何首乌饮可能介导基因DNA甲基化程度促进大鼠Leydig细胞分泌睾酮,进而提高生精功能.

何首乌饮通过DNA甲基转移酶1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老

目的探讨何首乌饮能否通过DNA甲基转移酶1(DNMT1)延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为4组,每组10只。免疫组织化学检测各组大鼠睾丸组织中DNMT1表达水平。ELISA实验检测各组大鼠血清中的睾酮含量。通过自由基氧化损伤建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型。在睾丸间质细胞中使用慢病毒敲低DNMT1,通过β-半乳糖苷酶(β-GAL)染色、免疫荧光染色和ELISA实验检测细胞衰老状态和细胞上清液中睾酮和睾酮合成关键酶3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P450家族成员11A1(CYP11A1)的含量。结果与青年对照组相比,自然衰老组大鼠睾丸组织中P16蛋白表达和β-GAL阳性率明显升高,DNMT1表达和血清睾酮含量降低(P<0.05);何首乌饮干预能够降低衰老大鼠睾丸组织P16蛋白表达和β-GAL阳性率,提高DNMT1表达和血清中的睾酮含量(P<0.05)。衰老的睾丸间质细胞中呈现相同的趋势。在睾丸间质细胞中敲低DNMT1后,β-GAL阳性率和P16蛋白表达明显增加,睾丸间质细胞的睾酮分泌量和睾酮合成关键酶3β-HSD、CYP11A1含量明显减少,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。加入何首乌饮后,上述现象得到改善。结论何首乌饮可以通过DNMT1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。

何首乌饮对衰老大鼠抗氧化能力及血脂的影响

目的探讨何首乌饮的抗衰老机制。方法采用D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老大鼠模型,测定何首乌饮灌胃后大鼠血清中血脂和丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果亚急性衰老模型组大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、MDA含量明显升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、SOD、GSH-Px、T-AOC明显下降,与正常对照组大鼠比较差异显著(P<0.05,P<0.01),经何首乌饮灌胃治疗后TG、TC、MDA含量下降,HDL-C、SOD、GSH-Px、T-AOC含量升高均接近正常水平,与模型组大鼠有显著差异(P<0.01)。结论何首乌饮明显提高衰老大鼠体内的HDL-C、SOD、GSH-Px、T-AOC水平,降低TG、TC、MDA含量,何首乌饮具有抗衰老作用,其抗衰老作用可能与此有关。

何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织细胞Rb/p53信号转导通路的影响

目的通过检测Rb、p16、p53、p19、p21在衰老大鼠睾丸组织中的表达,探讨何首乌饮抗大鼠睾丸组织衰老的机制。方法选用8周龄SD雄性大鼠84只,随机分为正常组、模型组、何首乌饮高、中、低剂量组、何首乌丸剂组、自然恢复组,每组12只,采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型。采用免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR法检测磷酸化Rb蛋白(pRb)、p16、p53、p19、p21在大鼠睾丸组织的表达差异。结果模型组大鼠睾丸组织Rb、p53、p16、p19、p21表达明显增加,pRb表达明显减少(P<0.05);何首乌饮、何首乌丸组能显著提高pRb的表达,降低Rb、p53、p16、p19、p21表达(P<0.05),何首乌饮高剂量组调节作用大于其他各组(P<0.05)。结论何首乌饮通过调节睾丸组织Rb/p53信号转导通路相关基因和蛋白表达起到延缓衰老的作用。

中药何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理

目的探讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理。方法36只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组。采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃。应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠卵巢组织p53、p19ARF、Rb及p16基因的表达,用Western blotting方法检测各组大鼠卵巢组织Rb及p16蛋白的表达情况。结果何首乌饮明显抑制了衰老大鼠卵巢组织中p53、p19ARF、Rb以及p16基因表达的上调趋势(P<0.05),且明显降低了衰老大鼠卵巢组织中Rb及p16蛋白的表达(P<0.05)。结论何首乌饮抑制衰老途径中关键的调节因子p53、p19ARF、Rb及p16的表达,从而起到抗大鼠性腺衰老的作用。

补肾中药何首乌饮对雄性衰老大鼠下丘脑的保护作用

目的观察何首乌饮对雄性衰老大鼠下丘脑的保护作用。方法选用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型,并用补肾中药何首乌饮进行干预,采用液相色谱法检测各实验组大鼠下丘脑NA、DA、5-HT含量;电镜观察下丘脑超微结构的变化。结果模型组大鼠下丘脑NA、DA、5-HT含量明显下降;大鼠弓状核暗细胞和明细胞的核膜、线粒体、粗面内质网和高尔基复合体明显异常,神经毡的纤维排疏松、不规则,部分突起萎缩变性,部分突起出现异常改变。用药组同模型组相比,下丘脑NA、DA、5-HT含量明显提高,与正常组比较有显著性差异(P<0.01),下丘脑超微结构有明显改善,而且何首乌饮预防中剂量组和延缓高剂量组效果明显好于其余各组(P<0.05)。结论何首乌饮可延缓下丘脑衰老。

何首乌饮对亚急性衰老大鼠的抗氧化和调血脂作用

目的:探讨何首乌饮对亚急性衰老大鼠的抗氧化和调血脂作用。方法:D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老大鼠模型,造模同时灌胃何首乌饮10,20,40 g.kg-1.d-1,qd,连续给药60 d后测大鼠血清中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)的含量。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清MDA,TG和TC含量明显升高,SOD,GSH-PX,TAOC和HDL-C明显下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,何首乌饮组血清MDA含量显著下降,血清SOD,GSH-PX活性,TAOC和HDL-C含量显著上升(P<0.05),呈现一定的剂量依赖性。结论:何首乌饮延缓D-半乳糖诱发的大鼠亚急性衰老的作用机制可能与其抗氧化和调血脂作用有关。

何首乌饮对衰老大鼠生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响

目的探讨何首乌饮对衰老大鼠睾丸生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响。方法选用12月龄Wistar雄鼠45只,随机分为3组:青年对照组、自然衰老组、何首乌饮组,每组15只,何首乌饮组和自然衰老组于16个月开始分别灌胃何首乌饮和等量蒸馏水,连续60d。青年对照组于12月龄,其余两组于18月龄分别进行实验,通过Real-time PCR、免疫荧光染色和免疫印迹法,观察各组大鼠睾丸组织线粒体凋亡通路关键基因DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C、14-3-3σ的表达变化。结果自然衰老大鼠线粒体凋亡通路关键基因14-3-3σ表达明显低于青年对照组,DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C表达明显高于青年对照组;而何首乌饮用药后能明显逆转上述现象。结论何首乌饮提高衰老大鼠精子质量与线粒体凋亡通路有关。

何首乌饮对雄性衰老大鼠生殖功能的保护作用

目的探讨何首乌饮(HSWY)预防用药对雄性衰老大鼠生殖功能的保护作用。方法选用8周龄雄性SD大鼠60只,体质量180～220 g,随机分为正常对照组、模型组、何首乌饮预防中剂量(Pz)、低剂量(Pd)组,每组15只。除正常组外其余各组大鼠均采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型,预防组在腹腔注射D-半乳糖的同时灌胃何首乌饮,用药60 d。检测各组血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、睾酮(T)及下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)的含量;采用原位杂交法观察睾丸组织IGF-1 mRNA的表达;免疫组织化学法观察睾丸组织促卵泡激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)、表皮细胞生长因子(EGF)及受体(EGFR)的表达;观察各组大鼠精子的数量、活动度和存活率的变化。结果模型组大鼠血清中LH、FSH及下丘脑中GnRH含量明显升高,IGF-1、睾酮含量明显下降,与正常组比较差异有显著性(P<0.05);何首乌饮中、低剂量组均能不同程度降低大鼠血清LH、FSH及下丘脑中GnRH含量,提高IGF-1、睾酮浓度,与模型组比较,差异显著(P<0.05)。模型组大鼠睾丸组织IGF-1mRNA、FSHR、LHR、EGF、EGFR的表达以及精子数量、活动度和存活率明显低于正常组(P<0.01);何首乌饮预防用药组能逆转上述现象,显著高于模型组(P<0.05)。结论何首乌饮通过改善激素的分泌,提高睾丸组织促性腺激素受体、生长因子及受体的表达,从而预防睾丸组织衰老,对雄性衰老大鼠生殖功能有较为明显的保护作用。

何首乌饮对衰老大鼠肾脏增殖与凋亡的影响

目的研究中药何首乌饮对衰老大鼠肾脏增殖及凋亡的影响。方法50只SD大鼠随机分为5组:阴性对照组,模型组,何首乌饮高、中、低剂量组,每组10只。D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老大鼠模型。采用SP免疫组化法和原位末端标记法(TUNEL法)分别检测肾脏组织PCNA和凋亡的表达情况。结果①模型组大鼠肾脏PCNA阳性细胞数低于阴性对照组大鼠(P<0.05)。何首乌饮各剂量组PCNA阳性细胞数高于模型组(P<0.05)。②模型组大鼠肾脏TUNEL阳性细胞数高于阴性对照组大鼠(P<0.05)。何首乌饮各剂量组TUNEL阳性细胞数均低于模型组(P<0.05)。结论何首乌饮可明显提高衰老大鼠肾脏的增殖能力并抑制其凋亡,具有一定的延缓衰老作用。

何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达的影响

目的探究何首乌饮影响大鼠睾丸间质(Leydig)细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(St AR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)蛋白表达的变化。方法选用10~20 d的幼年雄性Wistar大鼠,分离、培养Leydig细胞,然后收集。采用氧化损伤的方法建立Leydig细胞衰老模型。实验分组:间质细胞衰老模型组,何首乌饮处理组,首乌丸处理组,正常组和何首乌饮对照组。结果衰老模型组Leydig细胞St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显低于正常组和何首乌饮对照组(P<0.01)。另一方面,何首乌饮和何首乌丸干预组St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显高于衰老模型组(P<0.05),何首乌饮组好于何首乌丸组。结论何首乌饮可提高睾丸Leydig细胞St AR和P450scc蛋白的表达,提高睾酮的合成能力,从而延缓Leydig细胞衰老。

何首乌饮联合谷维素治疗女性更年期综合征

更年期综合征目前临床越来越常见，这一时期由于女性卵巢功能逐渐衰退，出现性激素分泌量减少，会出现以植物神经功能失调为主的症候群。在更年期综合征的治疗中一些中成药已取得较好的效果。何首乌具有较好的滋阴补肾作用，还有明显的抗衰老作用；谷维素则是调节植物神经功能紊乱的常用药物。这两种药物联合应用对更年期综合征的治疗是否有效报道并不多见。本研究以何首乌为主要药物，配合女贞子、黑豆配置成何首乌饮，研究观察了何首乌饮联合谷维素对女性更年期综合征的治疗效果，报告如下。

中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响

目的通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响。方法制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性。结果何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01)。何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01)。结论何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用。

何首乌饮含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响

目的观察不同剂量的中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响,探讨其在调节卵泡微环境过程中所起的作用。方法制备大鼠排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞(GC)分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养。用TRAP-ELISA方法分析GC的端粒酶活性;运用流式细胞术分析GC凋亡、坏死情况。结果各剂量组何首乌饮含药血清可明显上调GC端粒酶活性,与对照组比较,中、高剂量何首乌饮含药血清能够显著提高GC端粒酶活性(P均<0.05)。随着中药血清药物剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐下降,与对照组比较,中、高剂量组何首乌饮含药血清均能够显著降低离体GC的凋亡率(P均<0.01),各含药血清组细胞坏死率虽较对照组高,但与各组比较差别无统计学意义。结论何首乌饮通过上调离体培养的大鼠卵巢GC端粒酶活性、抑制凋亡从而对卵泡局部微环境的调节,可能是其调节下丘脑-垂体-卵巢轴的重要靶点之一。

何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺EGF、EGF mRNA表达的影响

目的观察何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺表皮生长因子(EGF)及EGFmRNA表达的影响。方法采用D-半乳糖衰老大鼠模型,何首乌饮干预分为治疗和预防两部分,用免疫组化及原位杂交法检测下颌下腺EGF、EGF mRNA阳性表达的改变。结果预防性实验部分EGF、EGF mRNA表达以正常组最高,模型组最低,各预防组中预防中剂量组最高,组间比较有高度统计学意义(P<0.01)。治疗性实验部分以正常组最高,自然恢复组最低,各治疗组中以治疗中剂量组最高,组间比较差异显著(P<0.01)。结论何首乌饮可提高下颌下腺EGF、EGF mRNA的表达而达到抗衰老的作用。

何首乌饮对衰老大鼠脑组织细胞Rb/p53信号转导通路影响

目的:检测Rb、p16、p53、p19、p21在衰老大鼠脑组织中的表达,探讨何首乌饮抗大鼠脑组织衰老的机制。方法:选用8周龄SD大鼠84只,体重180-220g,随机分为正常组、模型组、何首乌饮高、中、低剂量组、何首乌丸组、自然恢复组,每组12只,采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型。免疫组织化学、W estern blotting和RT-PCR法检测pRb、p16、p53、p19、p21在大鼠脑组织的表达差异。结果:模型组大鼠脑组织Rb、p53、p16、p19、p2 l表达明显增加,pRb表达明显减少(P<0.05);何首乌饮、何首乌丸组能显著提高pRb的表达,降低Rb、p53、p16、p19、p2 l表达(P<0.05),何首乌饮高剂量组调节作用大于其他各组(P<0.05)。结论:何首乌饮调节脑组织Rb/p53信号转导通路相关基因和蛋白表达起到延缓衰老的作用。

何首乌饮对亚急性衰老大鼠卵巢细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨何首乌饮对亚急性衰老大鼠卵巢细胞凋亡和相关基因Fas和FasL及其蛋白表达的影响。方法采用D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老大鼠模型,同时以何首乌饮灌胃作为延缓衰老组;造模后应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测各组大鼠卵巢细胞凋亡情况;测定各组Fas和FasL的信使核糖核酸(mRNA)水平;SP免疫组化法检测卵巢细胞Fas和FasL蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠卵巢细胞中有凋亡细胞数增多现象、Fas和FasL的mRNA和蛋白表达均显著增强(P<0.01);延缓衰老组较模型组凋亡率明显下降(P<0.01),并抑制Fas和FasL的表达,呈现量效关系,以何首乌饮高剂量组效果作用最佳。结论何首乌饮方剂能延缓衰老大鼠卵巢细胞凋亡的发生,其作用机制可能是通过干预Fas/FasL的表达,阻止死亡信号的转导,抑制卵巢细胞凋亡。

何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺超微结构的影响

目的观察实验性衰老大鼠下颌下腺超微结构的改变,探讨何首乌饮的干预作用。方法用D-半乳糖制造衰老大鼠模型,用何首乌饮干预(预防和治疗),观察下颌下腺主要细胞器超微结构改变。结果模型组大鼠下颌下腺细胞器的超微结构呈现明显的退行性变;何首乌饮预防组下颌下腺细胞器的超微结构退行性变的情况明显好于治疗组,治疗组改变程度较自然恢复组明显减轻。结论D-半乳糖模型大鼠下颌下腺超微结构发生明显衰老改变,何首乌饮可改善衰老大鼠下颌下腺超微结构的衰老变化,预防用药效果更好。

何首乌饮对过度训练大鼠睾丸间质细胞Bcl-2、Bax的影响

目的探讨何首乌饮对过度训练大鼠睾丸间质细胞Bcl-2、Bax的影响的影响。方法 50只雄性SD大鼠随机分为5组。A组为安静对照组;B组为安静何首乌饮组;C组为自然恢复组;D组为何首乌饮治疗组;E组为何首乌饮预防组,每组10只。放免法检测各组血清睾酮浓度,用免疫组织化学方法观察何首乌饮过度训练大鼠睾丸间质细胞Bcl-2、Bax表达的影响。结果Bcl-2蛋白阳性表达在安静何首乌饮组最高;自然恢复组明显低于安静对照组、安静何首乌饮组、何首乌饮治疗组、何首乌饮预防组,差异有统计学意义(P<0.05)。在Bax蛋白表达上自然恢复组明显高于其它各组;安静何首乌饮组明显低于安静对照组、何首乌饮治疗组、何首乌饮预防组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论何首乌饮可以上调过度训练大鼠睾丸间质细胞中的Bcl-2蛋白的表达和下调Bax蛋白的表达,从而抑制睾丸间质细胞的凋亡减轻过度训练对大鼠丸间质细胞的损伤。

何首乌饮对雌性衰老大鼠下丘脑神经递质的影响．

目的探讨下丘脑衰老时神经递质的变化及何首乌饮延缓下丘脑衰老的作用机制。方法D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老动物模型,造模后灌胃何首乌饮连续60 d后,大鼠断头取下丘脑。采用ELISA法检测各组大鼠SP,β-EP和GnRH的含量;高效液相色谱法(HPLC)以SHIMADZU-10A高效液相色谱仪和L-ECD-6A电化学检测器检测下丘脑单胺类神经递质NA,DA,5-HT的含量。结果同正常对照组相比,模型组大鼠下丘脑GnRH、SP明显增高,β-EP与NA、DA、5-HT含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,何首乌饮组下丘脑GnRH、SP明显下降,β-EP与NA、DA、5-HT含量显著升高,呈现一定的剂量依赖性。结论衰老时大鼠下丘脑正常功能被破坏,何首乌饮通过对神经递质紊乱的调节而延缓了下丘脑的衰老。