余甘子总酚对动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠肝脏保护作用机制的研究

目的:研究余甘子总酚对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))动脉粥样硬化模型小鼠的肝脏保护作用,初步探讨其作用机制。方法:建立高脂饮食诱导的ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型,给予余甘子总酚灌胃8周后,酶联免疫法检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平;观察小鼠肝脏病理模型切片;酶联免疫法检测小鼠肝脏组织匀浆中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;Western blot法检测小鼠肝脏组织相关蛋白的表达。结果:余甘子总酚干预可降低ApoE^(-/-)小鼠血清中AST和ALT水平(P<0.05),减缓小鼠肝脏脂肪性病变及炎症细胞浸润现象;同时,余甘子总酚可显著降低肝脏组织匀浆中TC、TG和LDL-C水平,提高HDL-C水平(P<0.05),显著降低炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α含量(P<0.05);此外,余甘子总酚还可显著升高模型小鼠肝脏组织ATP结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白水平(P<0.05),降低小鼠肝脏组织清道夫受体CD36和类固醇受体RNA激活物1(SRA1),以及Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)P65蛋白表达水平(P<0.05)。结论:余甘子总酚可减少肝脏内胆固醇蓄积和炎症因子的释放,从而减轻动脉粥样硬化小鼠肝脏脂肪性病变和炎症反应。

余甘子总酚酸和总黄酮配伍抑制肝癌细胞增殖及对免疫功能的调节作用

目的:观察余甘子总酚酸和总黄酮不同配伍比例对癌细胞的抑制作用及观察对免疫系统的影响。方法:在96孔培养板中,每孔加入100μL(含有5 000个/mL肿瘤细胞)RPMI 1640培养液,采用MTT法观察不同配伍比例的余甘子总黄酮和总酚酸对人肝癌细胞株HepG2的体外抑制作用;将64只小鼠随机分成8组,分别为正常对照组和余甘子总酚酸总黄酮配伍后的给药组,每天ig给药1次,连续9 d,采用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞的转化增殖,测定小鼠血清白介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)含量,测定不同配伍比例的余甘子总酚酸和总黄酮的免疫调节作用。结果:MTT法测定的结果均显示,不同比例余甘子总酚酸+总黄酮的配伍,对肝肿瘤细胞的抑制作用明显,其中以总黄酮比总酚酸10∶1(110 mg.L-1∶11 mg.L-1)时抑制率最高,抑制率为60.35%。余甘子总黄酮与总酚酸配伍能促进小鼠脾淋巴细胞增殖,其中每天以总酚酸329.5 mg.kg-1总黄酮228 mg.kg-1对小鼠ig给药组脾淋巴细胞增殖率最高,刺激指数比空白组高了0.786。并且促进小鼠淋巴细胞分泌因子的生成。结论:余甘子总酚酸和总黄酮对肝脏肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用,并且能增强机体特异性免疫功能和非特异性免疫功能的作用。

余甘子总酚主要成分的含量测定和指纹图谱研究

目的:建立同时测定余甘子总酚中没食子酸和葡糖倍苷的UPLC含量测定方法,并进行余甘子总酚的UPLC指纹图谱研究。方法:采用CAPCELL PAK C_(18)MG(4.6 mm×150 mm,5µm)色谱柱;流动相:甲醇-2%乙酸水溶液,梯度洗脱;检测波长:273 nm;柱温:30℃;流速:0.8 ml/min。结果:没食子酸和葡糖倍苷分别在5.82~465.20µg/ml、12.38~793.00µg/ml范围内呈良好线性关系;平均加样回收率分别为100.57%和99.22%,RSD均<3.0%;指纹图谱共标示出7个特征峰,相似度>0.90。结论:所建立的方法简便、结果准确、重复性好,可作为余甘子总酚原料的质量控制方法。