基于Caspase3探讨余甘子叶提取物对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道高反应、肺泡上皮细胞活性的影响及作用机制

目的 基于胱天蛋白酶(Caspase)3探讨余甘子叶提取物对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)大鼠气道高反应、肺泡上皮细胞活性的影响及作用机制。方法 选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、乙酰半胱氨酸颗粒(富露施,C)组、余甘子叶提取物(D)组、Caspase3抑制剂(Z-DEVD-FMK,E)组、余甘子叶提取物+Caspase3抑制剂(F)组,每组10只,对B、C、D、E、F组采用香烟发生器+脂多糖法建立慢阻肺模型,A组不建立该模型,建模成功后,C组灌胃50 g/kg富露施,D组灌胃50 mg/kg余甘子叶提取物,E组灌胃10μg/kg Z-DEVD-FMK,F组给予余甘子叶提取物联合Z-DEVD-FMK,A、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,无创肺功能仪检测气道高反应,干湿重法测定肺体脂数(LBF)、肺含水量(LWC),苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡,免疫组化法检测肺组织中Caspase3蛋白表达。结果 与A组比较,B组气道阻力、LBF、LWC含量、肺泡上皮细胞凋亡、肺组织Caspase3蛋白表达显著升高(P<0.05),肺组织病理形态遭到破坏;与B组比较,C、D、E、F组气道阻力、LBF、LWC含量、肺泡上皮细胞凋亡、肺组织Caspase3蛋白表达明显降低(P<0.05),肺组织病理形态明显改善,且D组较C组变化更显著(P<0.05),E组与D组相比无明显差异(P>0.05),F组较E组变化显著(P<0.05)。结论 余甘子叶提取物可有效改善慢阻肺大鼠气道高反应及肺泡上皮细胞活性,其作用机制可能与抑制Caspase3表达有关。

余甘子提取物在化妆品中的研究进展

介绍了余甘子、余甘子中的主要成分及其功效;比较了萃取余甘子多酚、黄酮、多糖等功效成分的不同方法,结果表明应用溶剂浸提法萃取余甘子功效成分最为广泛和便捷,尤其是使用乙醇作为溶剂;重点综述了当前余甘子提取物在化妆品中的应用和研究成果,如抗氧化、美白、抗衰老、舒缓、控油/防脱、抑菌/防腐等功效。最后就余甘子提取物的应用前景、更加优化的萃取方法、在化妆品中的潜在应用和解决其当前存在的不稳定问题进行了展望。

余甘子叶提取物对荷瘤小鼠抑瘤及免疫功能影响的研究

目的研究余甘子叶提取物(Phyllanthus emblica L.,PL)对小鼠H22实体瘤的生长抑制作用及免疫调节作用。方法①通过小鼠急性毒性试验计算出PL的半数致死量(LD50),推算出PL高、中、低剂量组的给药剂量。②建立小鼠H22实体瘤动物模型,随机分为模型对照组、环磷酰胺组和PL高、中、低剂量组,连续灌胃7d后测定各组瘤重、脏器指数、小鼠廓清指数、NK细胞活性及血清中IL-2、TNF-α的含量。结果①PL经口灌胃给药的LD50为9.911 g/kg,95%可信区间为6.807～15.831 g/kg。②与模型组比较,PL各剂量组均有一定的抑瘤作用,其中以PL高剂量(1.982 g/kg)组最为显著(0.01<P<0.05),抑瘤率达到33%;PL高(1.982 g/kg)、中(0.991 g/kg)剂量组能显著提高荷瘤小鼠脾指数(P<0.05)、胸腺指数(P<0.05),碳廓清能力(P<0.05),NK细胞活性(P<0.01或P<0.05),血清IL-2、TNF-α的含量(P<0.05),但在实验所用剂量的PL各组对荷瘤小鼠血清溶血素含量和脾淋巴细胞增殖无明显影响。结论余甘子叶提取物具有较强的抗肿瘤以及促进荷瘤小鼠非特异性免疫的作用。

余甘子叶提取物对小鼠免疫功能的影响研究

目的:探讨余甘子叶提取物(PLFs)对正常小鼠免疫功能的影响。方法:选取70只健康昆明小鼠进行PLFs的急性毒性试验。各项实验的健康小鼠随机分为对照组及余甘子提取物高(1.982 g/kg)、中(0.991 g/kg)、低剂量组(0.496 g/kg),10只/组,对照组给予等容积双蒸水灌胃。灌胃1次/d,连续给药7 d。小鼠椎脱臼处死取胸腺、脾脏称量质量,计算小鼠胸腺指数和脾指数;尾静脉注射经印度墨汁,眶后静脉丛采血比色测定廓清指数K及吞噬系数α;各组常规制备脾脏细胞,酶标分析仪测定NK细胞杀靶活性和对T、B淋巴细胞的增殖影响情况;腹腔注射绵羊红细胞,测定对小鼠血清溶血素的影响。结果:余甘子叶提取物的LD50为9.911 g/kg;余甘子叶提取物高、中剂量能显著升高小鼠碳廓清能力(P<0.05)、吞噬指数(P<0.05)和NK细胞活力(P<0.05)。结论:余甘子叶提取物具有促进正常小鼠非特异性免疫功能的作用。

余甘子叶提取物体外抗菌实验研究

目的:用体外细菌培养方法研究余甘子叶提取物是否具有抗菌作用,并确定余甘子叶的抗菌有效部位。方法:采用琼脂稀释法测定余甘子叶提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌敏感株、金黄色葡萄球菌耐药株、白色念珠菌、伤寒沙门菌、肺炎克雷伯杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌的抑制作用。结果:余甘子叶提取物在体外对肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌敏感株、金黄色葡萄球菌耐药株、大肠杆菌、伤寒沙门菌、白色念珠菌均有不同程度的抑制作用,其中cc部位作用最为明显;M IC除D部位小于4.0 mg/m l外,其余部位均大于4.0 mg/m l。结论:余甘子叶提取物具有抗菌作用,其有效成分集中在cc部位。

余甘子叶提取物对慢性支气管炎并肺气肿大鼠的保护作用研究

目的研究余甘子叶提取物是否对慢性支气管炎并肺气肿大鼠有保护作用。方法采用气管内注入脂多糖(LPS)及烟熏的混合刺激方法建立慢性支气管炎并肺气肿大鼠模型,采用病理组织切片及血气分析方法观察余甘子叶提取物对慢性支气管炎及肺气肿的病理及血氧含量的影响。结果余甘子叶提取物乙酸乙酯膏(cc)部位对由LPS+烟熏引起的慢性支气管炎并肺气肿大鼠的支气管炎症及肺泡病理损害有明显保护作用,能减少支气管壁炎症细胞浸润及肺大泡形成,并能提高动脉血氧含量,各项指标均优于模型对照组及阳性药物组,而接近于正常对照组。结论余甘子叶提取物cc部位具有防治慢性支气管炎并肺气肿的作用。

余甘子提取物对糖尿病大鼠肌肉和脂肪组织胰岛素信号通路的影响

背景:余甘子具有明显的降血糖作用,但其作用机制尚不清楚。目的:观察余甘子提取物对大鼠骨骼与脂肪组织中胰岛素信号通路相关蛋白的影响。方法:将30只SD大鼠随机等分为对照组、模型组和余甘子组,后2组以腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。余甘子组用余甘子提取液灌胃6周,模型组和对照组灌胃同体积的蒸馏水。结果与结论:与对照组相比,糖尿病大鼠的体质量、空腹血糖、空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数均显著升高(P<0.05),脂肪和肌肉组织磷脂酰肌醇-3-激酶、蛋白激酶BmRNA及葡萄糖转运蛋白4mRNA和蛋白水平显著下降(P<0.05,P<0.01),灌胃余甘子提取物6周后,余甘子组大鼠体质量、空腹血糖、空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数均比模型组下降(P<0.05),脂肪和肌肉组织磷脂酰肌醇-3-激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4mRNA水平明显增加(P<0.01,P<0.05),且脂肪组织葡萄糖转运蛋白4蛋白表达增加(P<0.01),但肌肉组织葡萄糖转运蛋白4蛋白差异没有显著性意义。提示余甘子提取物可调控胰岛素介导的磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/葡萄糖转运蛋白4信号转导通路,发挥降血糖作用。

余甘子叶提取物对荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞CD4^+、CD8^+亚群的影响

[目的]观察余甘子叶提取物(PL)对荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞CD4+、CD8+亚群的影响。[方法]建立H22荷瘤小鼠模型,灌胃给予余甘子叶提取物高、中、低剂量(1.982,0.991,0.496 g/kg),观察余甘子叶提取物对荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞CD4+、CD8+亚群的影响。[结果]余甘子叶提取物高、中剂量(1.982,0.991 g/kg)能显著提高荷瘤小鼠T淋巴细胞及其CD4+亚群相对数量(P<0.05),上调CD4+/CD8+亚群比例(P<0.05)。[结论]通过提高T淋巴细胞及其CD4+亚群相对数量,使CD4+/CD8+比例接近正常值,此可能是余甘子叶提取物抗肿瘤的免疫学机制之一。

余甘子提取物抗衰老和防脱生发功效的研究

通过测试余甘子提取物的总抗氧化能力和其对弹性蛋白酶的抑制能力,在生化层面考察其抗衰老的功效;人体内的睾酮在5α-还原酶的作用下还原成二氢睾酮,其含量过高是导致雄激素性脱发的首要原因。开发抑制5α-还原酶的植物提取物以降低二氢睾酮含量是缓解雄激素性脱发的有效方式。真皮毛乳头(DP)不仅是毛发生长的信号中心,还表达丰富的5α-还原酶,是毛囊中睾酮发挥作用的靶位点。体外3D培养人毛囊真皮毛乳头细胞(HFDPC)是检测植物提取物防脱生发功效理想的细胞模型。通过测试余甘子提取物的5α-还原酶抑制率、对3D培养HFDPC细胞活性和离体人毛囊生长的影响,在生化、细胞和体外组织层面验证其防脱生发的功效。结果表明,一定质量浓度的余甘子提取物具有抗氧化和弹性蛋白酶抑制作用,还具有抑制5α-还原酶和β-半乳糖苷酶活性、促进HFDPC细胞增殖、增强HFDPC的毛发诱导能力以及促进离体人毛囊生长的功效。

高效液相色谱法测定余甘子提取物中没食子酸与鞣花酸含量

目的建立测定市售余甘子提取物中没食子酸与鞣花酸含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用Zorbax SB Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长分别为273 nm和254 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min。结果没食子酸与鞣花酸进样量分别在0.282～4.230μg和0.043 6～0.654 0μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 9(n=5);平均加样回收率分别为99.14%和102.86%,RSD分别为0.64%和0.78%(n=5); 10批样品中有8批为正品,含量分别为12.79～105.07 mg/g和3.09～33.47 mg/g; 2批伪品中2种成分含量均为0。结论市售余甘子提取物质量差异较大,存在伪品。该方法准确可靠,重复性好,为评价余甘子提取物的质量提供了依据。

余甘子提取物HPLC特征图谱研究

目的建立余甘子提取物HPLC特征图谱分析方法,并与药材进行了相关性分析。方法采用ZORBAX SB A_qC_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%(体积分数)H_3PO_4溶液进行梯度洗脱;检测波长为273 nm;柱温为30℃;流速为1.0 mL/min。结果 10批余甘子药材共标示出12个特征峰,鉴定出2个特征峰(没食子酸、鞣花酸),相似度为0.828~0.979,提示不同批次药材的质量差异较大。12批余甘子提取物中有10批检出与药材一致的特征峰,标示出6个特征峰,相似度为0.914~1.000;有2批为未知伪品,均未检出相应的特征峰。结论本方法建立的特征图谱准确可靠、重复性好,为评价余甘子提取物及余甘子药材的质量提供了依据。

余甘子提取物对幼鼠非酒精性脂肪肝病的防治作用

目的探讨余甘子提取物对高脂饮食诱导幼鼠非酒精性脂肪肝病的防治作用。方法 48只3周龄SD大鼠随机分为对照组、造模组、二甲双胍组和余甘子提取物低、中、高剂量组。对照组进食普通饲料,其余组进食高脂饲料,每日定时灌胃:二甲双胍组予二甲双胍混悬液250 mg/kg,低、中、高剂量组分别予余甘子提取物250、500和1 000 mg/kg,对照组、造模组予等量生理盐水,饲养及给药6周。检测:①体质量、肝重,计算肝指数;②测血清AST、ALT、TG、LDL、GLU、CHO、INS含量,计算HOMA-IR指数;③HE染色观察肝组织病理形态,进行NAS评分。结果造模组体质量、肝重、ALT、AST、CHO高于对照组,中、高剂量组体质量低于造模组,差异有统计学意义(P<0.05)。低剂量组ALT、AST、CHO低于造模组(P<0.05),中剂量组ALT、AST、CHO、LDL低于造模组(P<0.05),高剂量组ALT、AST、CHO低于造模组(P<0.01)。各剂量组NAS分值较造模组下降(P<0.05),肝细胞脂肪变有改善。结论余甘子提取物可减轻高脂饲料诱导的幼鼠肝脂肪变病变程度,改善肝功能,起到防治作用。

余甘子提取物对非酒精性脂肪性肝病大鼠外周血Treg细胞及肝组织LXRα/FAS通路表达的影响

目的探讨余甘子提取物对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠外周血Treg细胞及肝组织LXRα/FAS通路表达的影响。方法将48只SD大鼠随机分对照组、模型组、多烯磷脂酰胆碱及小剂量、中剂量和大剂量余甘子处理组,在造模成功后,给予对照组生理盐水灌胃,给予模型组多烯磷脂酰胆碱处理,另给予不同剂量的余甘子灌胃处理,连续给药6周。采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-17和IL-10水平,使用流式细胞术检测血CD4^+IL-17^+和CD4^+CD25^+Treg细胞百分比,采用WB法检测肝组织LXRα和FAS蛋白表达。结果与模型组比,大剂量余甘子提取物处理组肝组织病理学损伤显著改善,血清ALT、AST、TC、TG水平显著降低(P<0.05);血清TNF-α和IL-17水平显著降低,分别为(34.7±0.9)pg/ml和(3.2±0.2)pg/mL,而IL-10水平显著升高,为(4.8±0.2)pg/mL(P<0.05);大剂量余甘子处理组CD4^+IL-17^+百分比为(1.1±0.6)%,显著低于模型组[(1.9±0.4)%,P<0.05],CD4^+CD25^+Treg百分比为(1.5±0.6)%,显著高于模型组[(0.9±0.2)%,P<0.05];小、中、大剂量余甘子提取物处理组肝组织LXRα和FAS蛋白表达显著减弱[分别为(1.8±0.1)和(2.0±0.2),P<0.05]。结论余甘子提取物可改善NAFLD大鼠肝组织病理学损伤,可能与其对炎性细胞因子、Th17/Treg细胞和LXRα/FAS通路因子的表达产生了某种影响有关。

余甘提职物及其制品清除自由基和抗氧化的特性

用化学发光法（CL）和顺磁共振法（ESR）测定结果表明，余甘提取物及其制品有清除活性氧的能力。通过大鼠大脑缺血、缺氧模型试验，证明余甘果汁对大脑缺血再灌的氧化损伤有防护作用。余甘提取物混入霜剂后，仍然有清除自由基的活性，而已其有效成分可透过皮肤，清除皮肤内部产生的过量自由基。该有效成分既耐热又耐贮存，因而具有较好的应用前景。

不同产地的余甘子提取物中没食子酸含量测定

目的:测定不同产地余甘子提取物的没食子酸含量。方法:采用高效液相色谱法对13批不同产地的余甘子提取物进行没食子酸含量测定。结果:余甘子提取物中没食子酸在0.0684~0.6843 mg·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系,没食子酸平均回收率为98.85%,RSD值为1.63%。没食子酸含量在2.52%~8.96%。结论:不同产地余甘子提取物的没食子酸含量存在一定的差异,为评价余甘子提取物的质量提供参考。

余甘子提取物质量标准的研究

目的:初步建立余甘子提取物的质量标准。方法:对13批次的余甘子提取物进行感官测定、薄层色谱鉴别、理化指标测定、没食子酸含量测定、重金属指标测定和微生物检查。结果:建议余甘子提取物中水分含量≤7%,灰分含量≤6%,粒度(过100目筛)≥90%,没食子酸含量(以干燥品计)≥2.0%,铅含量≤5.0 mg·kg^(-1),砷含量≤2.0 mg·kg^(-1),汞含量≤0.2 mg·kg^(-1),镉含量≤0.3 mg·kg^(-1),菌落总数≤1000 CFU·g^(-1),霉菌和酵母≤100 CFU·g^(-1),大肠埃希氏菌和沙门氏菌不得检出。结论:初步建立了余甘子提取物的质量标准。

余甘子叶提取成分没食子酸的体外抗肿瘤实验研究

目的探讨从余甘子叶提取分离得到的活性成分没食子酸的抗肿瘤作用。方法采用MTT法和细胞集落形成法观察没食子酸对人肝癌细胞株Bele7404、人胃癌细胞株SGC7901、小鼠肝癌细胞株H22和小鼠肉瘤细胞株S1804种肿瘤细胞的体外抑制作用。结果MTT法和细胞集落形成法测定的结果均显示,当没食子酸浓度在2.5μg/m l以上时,4种肿瘤细胞株的生长均受到明显抑制。结论余甘子叶提取成分没食子酸在体外对不同组织来源的肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用。

余甘子对胰岛素抵抗大鼠过氧化物酶体增生物激活受体γ表达的影响

目的:观察余甘子提取物对胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)mRNA表达的影响。方法:Wistar大鼠30只,随机分为正常对照组10只,给予基础饲料;模型组20只,给予高脂饲料。模型组大鼠给予高脂喂养6w后,随机分为两个亚组:胰岛抵抗组(继续高脂饮食)和余甘子组(给予高脂饲料同时进行2ml剂量3.5g/kgbw余甘子提取物灌胃)。干预6w后,利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)分别检测三组大鼠脂肪中PPARγ表达的差异。结果:高脂饮食成功诱导了胰岛素抵抗,余甘子提取物显著改善了胰岛素抵抗,胰岛素抵抗组大鼠的脂肪中PPARγ表达稍高于对照组,但显著低于余甘子组。结论:余甘子提取物明显改善胰岛素抵抗,可能与其提高PPARγmRNA表达有关。

余甘子提取物调控LINC01772/miR-153对肺癌细胞A549生物学行为的影响

目的:探讨余甘子提取物对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:体外培养A549细胞,分为对照组、不同剂量(低、中、高剂量)余甘子提取物组、si-NC组、si-LINC01772组、高剂量余甘子提取物+pcDNA组和高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组,细胞计数试剂盒(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,嵌入式细胞共培养法(Transwell)检测细胞侵袭,免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC01772和miR-153表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01772和miR-153调控关系。结果:与对照组相比,不同剂量余甘子提取物组A549细胞中LINC01772表达降低,且光密度值(OD值)、克隆形成数、迁移以及侵袭细胞数减少(P<0.05),而miR-153含量与E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05)。LINC01772在A549细胞中负调控miR-153表达。与si-NC组相比,si-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力受到抑制(P<0.05)。与高剂量余甘子提取物+pcDNA组相比,高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力增强(P<0.05)。结论:余甘子提取物可能通过调控LINC01772/miR-153轴抑制肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,其可能通过下调LINC01772进而上调miR-153表达发挥作用,具有开发为治疗肺癌药物的潜在价值。

余甘子对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌PKB表达和GLUT4 mRNA表达的影响

目的:观察余甘子提取物对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌PKB表达和GLUT4 mRNA表达的影响.方法:SD大鼠30只,随机分为正常对照组10只,给予基础饲料;模型组20只,给予高脂饲料.模型组大鼠给予高脂喂养6wk后,随机分为2亚组:胰岛抵抗组,继续高脂饮食;余甘子组:给予高脂饲料同时进行2mL剂量3.5g/kg余甘子提取物灌胃.干预6wk后,分别检测3组大鼠骨骼肌PKB表达和GLUT4 mRNA表达的差异.结果:高脂饮食成功诱导了胰岛素抵抗,余甘子提取物显著改善了胰岛素抵抗,胰岛素抵抗组大鼠骨骼肌PKB表达和GLUT4 mRNA表达显著低于安静对照组和余甘子组,余甘子组与安静对照组相比无显著差异.结论:余甘子提取物明显改善胰岛素抵抗,可能与其提高大鼠骨骼肌PKB表达和GLUT4 mRNA表达有关.