佛手苷内酯对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究

目的:研究佛手苷内酯(bergapten,BG)预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:将H9C2心肌细胞系传代培养,随机分为正常对照组、缺氧复氧模型组、佛手苷内酯低、中、高浓度预处理组(浓度为5、10、20μmol/L),通过缺氧4 h、复氧24 h模拟构建心肌缺血再灌注模型,采用CCK-8法检测细胞活性,按试剂盒方法检测LDH、CKMB漏出量,ELISA法检测SOD、MDA水平,流式细胞学检测细胞凋亡水平,Western blot法检测IL-6、TNF-α和p-PI3K、p-Akt的蛋白表达。结果:与H/R组比较,5、10、20μmol/L佛手苷内酯均能显著缓解缺氧复氧诱导的细胞存活率下降,减少心肌细胞凋亡,降低LDH、CKMB漏出量,提高SOD活性,下调MDA水平,抑制TNF-α、IL-6的释放,促进p-PI3K、p-AKT的表达,并有浓度依赖性。结论:佛手苷内酯预处理对心肌细胞缺氧复氧损伤有保护作用,并且可能与PI3K/Akt信号通路有关。

佛手苷内酯对磷酸三钙磨损颗粒所致假体周围骨溶解的影响

目的:观察佛手苷内酯对磷酸三钙(TCP)磨损颗粒所致假体周围骨溶解的影响,探讨其可能作用机理。方法:60只雄性ICR小鼠随机分为5组(每组n=12):假手术组(Sham组)、TCP磨损颗粒组(TCP组)、佛手苷内酯5 mg/kg组、佛手苷内酯10 mg/kg组和佛手苷内酯20 mg/kg组。TCP磨损颗粒30 mg包埋于小鼠颅骨顶部建立小鼠假体周围骨溶解模型,Sham组小鼠仅进行原位缝合,不包埋颗粒。Sham组和佛手苷内酯组小鼠分别于术后第2天颅顶局部注射生理盐水和佛手苷内酯,隔日1次。2周后处死动物采血、取颅骨。采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和HE染色观察小鼠颅骨假体周围骨溶解和破骨细胞生成情况;化学比色法检测血清中TRAP和组织蛋白酶K(cathepsin K)活性及乳酸脱氢酶(LDH)含量;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)、白介素-1beta(IL-1β)、白介素(IL)-18和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的水平;western blot检测假体周围骨组织中炎症小体活化相关蛋白Nod样受体蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及细胞焦亡标志蛋白切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cleaved caspase-1)和IL-1β等的表达。结果:与Sham组比较,TCP组小鼠假体周围骨溶解面积和破骨细胞生成显著增加(P<0.05)、血清中TRAP和cathepsin K活性及RANKL、TNF-α、IL-1β、IL-18和LDH水平明显升高(P<0.05),NLRP3、ASC、cleaved caspase-1和IL-1β等蛋白表达显著上调(P<0.05);与TCP组比较,佛手苷内酯组小鼠假体周围骨溶解面积和破骨细胞生成、血清中TRAP和cathepsin K活性及RANKL、TNF-α、IL-1β、IL-18和LDH水平明显减少(P<0.05),NLRP3、ASC、cleaved caspase-1和IL-1β等蛋白表达也呈明显下调(P<0.05)。佛手苷内酯对TCP磨损颗粒诱导的上述检测指标上调的抑制作用具有一定的剂量依赖性(P<0.05)。结论:佛手苷内酯可通过减弱NLRP3炎症小体活化及细胞焦亡从而阻止TCP磨损颗粒所致的假体周围骨溶解和破骨细胞生成。

佛手苷内酯下调miR-503表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎性因子表达和细胞凋亡

目的考察佛手苷内酯(bergapten,BG)是否通过下调miR-503表达抑制高糖(high glucose,HG)诱导的肾小管上皮细胞炎性因子表达和细胞凋亡。方法将肾小管上皮细胞分为正常对照(Con)组、高糖(HG)组、高糖+BG低、中、高浓度(HG+BG-L、-M、-H)组、HG+inhibitor-NC组、HG+miR-503 inhibitor组、HG+BG+miR-NC组、HG+BG+miR-503组。利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达,流式细胞术测定细胞凋亡,Western印迹测定凋亡蛋白裂解天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)3、cleaved-caspase 9表达,qRTPCR测定miR-503表达。结果HG组肾小管上皮细胞的TNF-α、IL-6表达、凋亡率、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9蛋白、miR-503表达量均比Con组增加(P_(均)<0.05)。HG+BG-L组、HG+BG-M组、HG+BG-H组肾小管上皮细胞的TNF-α、IL-6表达、凋亡率、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9蛋白、miR-503表达量均比HG组减少(P_(均)<0.05),且BG的抑制作用呈现浓度依赖性。干扰miR-503表达后,HG+miR-503 inhibitor组肾小管上皮细胞的miR-503表达量、TNF-α、IL-6表达、凋亡率、cleaved-caspase 3蛋白、cleaved-caspase 9蛋白均比HG+inhibitor-NC组降低(P_(均)<0.05)。HG+BG+miR-503组肾小管上皮细胞的miR-503表达量、TNF-α、IL-6表达、凋亡率、cleaved-caspase 3蛋白、cleaved-caspase 9蛋白表达量均高于HG+BG+miR-NC组(P_(均)<0.05)。结论BG通过下调miR-503的表达,以浓度依赖方式抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎性因子表达和细胞凋亡。

佛手苷内酯对磷酸三钙磨损颗粒诱导骨细胞损伤的影响及机制

目的:研究佛手苷内酯(BP)对磷酸三钙(TCP)磨损颗粒诱导骨细胞损伤的影响,并阐明其可能作用机制。方法:将TCP磨损颗粒与小鼠骨细胞MLO-Y4细胞共孵育48 h建立骨细胞体外损伤模型,随机分为正常对照(Control)组、TCP磨损颗粒(TCP,0.1 mg/ml)组、佛手苷内酯(1μmol/L)组、佛手苷内酯(5μmol/L)组和佛手苷内酯(20μmol/L)组。MTT法和Calcein-AM染色检测各组骨细胞活性和形态改变;Hoechst 33342染色和流式细胞术分析各组骨细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR检测各组骨细胞特征蛋白牙本质基质蛋白-1(DMP-1)、骨硬化蛋白(SOST)、成纤维细胞生长因子23(FGF23)的mRNA水平;Western blot法检测各组骨细胞中内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、活性转录因子(ATF4)和C/EBP同源蛋白(CHOP)等的表达及caspase-3的活化变化。结果:与Control组比较,TCP组骨细胞的活性和DMP-1的mRNA水平显著降低(P<0.05),骨细胞凋亡率及SOST、FGF23的mRNA水平显著增加(P<0.05),GRP78、ATF4和CHOP等蛋白质表达、p-PERK/PERK值和p-eIF2α/eIF2α值显著升高;与TCP组比较,佛手苷内酯组骨细胞损伤明显减轻,骨细胞凋亡率显著减少(P<0.05),GRP78、ATF4和CHOP等蛋白质表达、p-PERK/PERK值和p-eIF2α/PERK值也明显下降(P<0.05)。结论:佛手苷内酯可明显抑制TCP磨损颗粒所致的骨细胞损伤,其机制可能与减弱TCP磨损颗粒诱导的内质网应激反应及PERK通路的活化密切相关。

佛手苷内酯通过调控长链非编码RNA阿片样受体基因表达对糖氧剥夺诱导的PC12细胞损伤的影响

目的研究佛手苷内酯(BG)是否通过调控长链非编码RNA(lncRNA)阿片样受体基因(Oprm1)表达保护糖氧剥夺(OGD)诱导的PC12细胞损伤。方法将PC12细胞分为对照组(Con)、OGD组、OGD+BG低浓度(BG-L)组、OGD+BG中浓度(BG-M)组、OGD+BG高浓度(BG-H)组、OGD+pcDNA组、OGD+pcDNA-Oprm1组、OGD+BG+si-NC组和OGD+BG+si-Oprm1组。试剂盒测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。流式细胞术分析细胞凋亡率。Real-time PCR分析Oprm1表达水平。结果与Con组比较,OGD组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。与OGD组比较,OGD+BG-L组、OGD+BG-M组、OGD+BG-H组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+pcDNA组比较,OGD+pcDNA-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+BG+si-NC组比较,OGD+BG+si-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。结论BG可减轻OGD诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调lncRNA Oprm1表达有关。

广佛手化学成分、药理作用的研究进展及质量标志物的预测分析

广佛手为中国传统中药,其道地产区主要为广西、广东等南方省区。中医认为广佛手具有疏肝理气、和胃止痛、燥湿化痰之功。现代研究证实,广佛手的主要化学成分有挥发油类、黄酮类、香豆素类、多糖类,其药理作用较为广泛,主要包括免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抑菌等。对广佛手化学成分进行归纳总结,阐述广佛手基于传统功效和拓展功效的药理作用,分析其发挥抑菌药效的机制及通路,并从植物亲缘学、传统功效、传统药性等方面分析可作为其质量标志物的成分,为广佛手的精准质量控制与深入开发利用提供有益的参考。

维药芹菜根化学成分的研究

目的:对维药芹菜根的化学成分进行研究。方法:药材粉碎后用含水乙醇提取,经硅胶和Sephadex LH-20等色谱填料分离到单体化合物;再利用质谱、核磁共振等现代波谱技术和化学方法鉴定出化合物的结构。结果:分离并鉴定了5个化合物,分别为:佛手苷内酯(Ⅰ),豆甾醇(Ⅱ),棕榈酸豆甾醇酯(Ⅲ),棕榈酸乙二醇单酯(Ⅳ),棕榈酸(Ⅴ)。结论:化合物Ⅲ、Ⅳ为首次从该植物中分离得到。

无花果叶中有效成分鉴别及含量测定

近年来,无花果叶片中所含成分分析主要集中在同类型物质或整类物质,而对多种类型单一有效物质的定性定量研究较少。本文采用溶剂浸提-超声波辅助法对无花果叶片中的有效成分进行了提取,利用气相色谱-质谱和超高效液相色谱-离子阱质谱对有效成分进行了鉴定。结果表明,无花果叶中主要成分为绿原酸、芦丁、补骨脂素和佛手苷内酯。采用单因素实验法,确定了4种成分的最佳提取工艺。利用高效液相色谱建立了绿原酸、芦丁、补骨脂素和佛手苷内酯的定量分析方法。绿原酸在1. 84~9. 2μg范围内有良好的线性关系(R^2=0. 9991),回收率为95. 2%;芦丁在3. 4~17μg范围内有良好的线性关系(R^2=0. 9981),回收率为96. 8%;佛手内脂在4~20μg范围内有良好的线性关系(R^2=0. 9998),回收率为89. 5%;补骨脂素在4~20μg范围内有良好的线性关系(R2=0. 9963),回收率为87. 1%。

HPLC法同时测定陇西地区防风中色原酮和香豆素类成分

目的 建立HPLC-DAD法同时测定并比较分析陇西地区防风类药材中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素、亥茅酚苷、补骨脂素、欧前胡素、佛手苷内酯、花椒毒素的量。方法 采用甲醇回流法得到提取物，HPLC-DAD法测定提取物中8种成分量，乙腈-水梯度洗脱，体积流量1.0 mL/min，检测波长为254 nm，柱温为30 ℃。结果 8种成分的回归方程r值均在0.999 2～0.999 9，平均加样回收率在96.2%～104.1%，RSD均＜3%。防风中以4种色原酮为主要成分，同时含有4种香豆素；葛缕子及白花前胡中未检测到色原酮，而香豆素量均高于防风。结论 该方法简便、准确，重复性好，可用于防风类药材中8种成分的测定。陇西地区的2种习用防风从8种主要成分量上看不能代替防风使用。