佛波酯诱导大鼠滑膜细胞骨架改变的研究

以体外培养的大鼠关节炎模型的滑膜细胞为研究对象,用蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)刺激细胞模拟炎症过程,应用原子力显微成像技术研究了大鼠滑膜细胞在PKC活化后细胞骨架变化情况.结果表明,利用原子力显微镜成像可以较好地表征PMA刺激引起滑膜细胞骨架的收缩隆起及细胞表面质地的变化,并揭示了PKC活化可能是引起滑膜细胞骨架改变的重要原因.这些结果为加深了解类风湿关节炎的发生机制提供了实验基础.

佛波酯联合脂多糖诱导THP-1炎症细胞模型的优化及评价

目的优化条件建立人急性单核白血病细胞THP-1炎症细胞模型,评价其对磷酸二酯酶抑制剂类抗炎剂咯利普兰的响应。方法 THP-1细胞经佛波酯(PMA)诱导分化、脂多糖(LPS)刺激,ELISA检测细胞上清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平。考察PMA和LPS剂量及其作用时间获得较优模型;于LPS同时加入咯利普兰考察此THP-1炎症细胞模型对抗炎作用的响应。结果 THP-1单核细胞经PMA诱导分化24 h呈巨噬细胞形态,延长至48 h细胞形态不变,诱导的细胞经LPS刺激产生显著升高的TNF-α和IL-6。PMA在100 ng/mL较50 ng/mL诱导分化THP-1经LPS刺激所产生TNF-α水平显著升高,且随LPS剂量增加而增加并在LPS达0.2μg/mL后趋于恒定;IL-6在PMA 100 ng/mL及LPS≥1μg/mL时释放明显。100 ng/mL PMA联合0.5μg/mL LPS相较于0.1μg/mL LPS刺激THP-1产生TNF-α被咯利普兰抑制更显著。结论 100 ng/mL PMA诱导分化的THP-1细胞在LPS刺激下炎性因子水平显著升高;100 ng/mL PMA联合不低于0.2μg/mL LPS刺激THP-1细胞可获较优炎症细胞模型,此模型对抗炎剂作用更敏感。

PKC活化对兔视网膜色素上皮(RPE)细胞Nrf2表达的影响

目的研究蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活化后是否能引起体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞内核因子E2相关因子2(nuclear factor enthroid 2-related factor 2,Nrf2)的激活和核转位,探讨PKC活化是否对RPE细胞内的Nrf2表达产生影响。方法将一定浓度的PKC特异激活剂佛波酯(phorbol 12-myristate13-acetate,PMA)作用在体外培养的兔RPE细胞(B组)以及Nrf2抑制剂预处理后的RPE细胞(C组),再培养24 h后,应用免疫荧光技术及Western blot测量Nrf2在胞核内的表达情况,并与空白对照(A)组进行对比分析。结果免疫荧光检测RPE细胞核内的Nrf2蛋白表达结果显示:与A组相比,B、C组RPE细胞核中Nrf2蛋白表达均增加,其中B组增加显著,C组较B组增加幅度低;3组之间差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测RPE细胞核内的Nrf2蛋白经图像分析处理定量,扫描灰度值差异显著(A组0.286±0.013,B组1.304±0.033,C组0.671±0.087;P<0.05)。结论PKC激活后可使兔RPE细胞浆中Nrf2发生核转位,Nrf2抑制剂能减弱PKC的作用。