豆蔻酰佛波醇乙酯对人心房肌细胞肿胀激活的氯离子电流的调节作用

目的通过全细胞膜片钳技术研究蛋白激酶C(PKC)激动剂豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)对人心房肌细胞肿胀激活的氯离子电流(ICl.swell)的作用。方法术中取患者右心房组织,酶解分离出心房肌细胞。全细胞膜片钳技术记录氯离子电流。低渗台氏液灌流激活胞肿胀激活的氯离子电流后再加入PMA,观察电流变化。结果胞肿胀激活的氯离子电流达到稳定状态后再用含有1μmol/L PMA的低渗台氏液灌流,从-110 m V到+60 m V,除了在-10 m V,电流密度均增加(P<0.05,n=7)。该效应在洗脱后或者加入氯离子电流阻断剂二异氰酸二磺酸后减弱。结论该研究通过全细胞膜片钳技术观察到蛋白激酶C激动剂PMA可以增强人心房肌细胞ICl.swell。但对其机制,还需要进一步研究。

[-20-^3H]佛波醇-12-肉豆蔻酯-13-乙酯的合成

用MnO2将佛波醇-12-肉豆蔻酯-13-乙酯氧化,然后利用新制的NaB3H4氚化还原合成[20-3H]佛波醇-12-肉豆蔻酯-13-乙酯。所得产物经HPLC纯化后放化纯度>98%,其比活度达0.654 TBq/g。纯化产物在-20℃放置90天仍保持稳定。本法简单易行,标记过程中也不产生异构体。

PHA与PMA对外周血单个核细胞产生IL-4、IFN-γ水平的研究

目的 :比较 PHA(植物血凝素 )与 PMA(佛波醇乙酯 )对 PBMCs(外周血单个核细胞 )的刺激效果。方法 :选择健康人群 ,取外周静脉血 ,分离得到 PBMCs,分别加入 PHA+ ionomycin(离子霉素 )及 PMA+ ionomycin进行刺激并孵育 2 h、4h、6h、12 h、2 4h、48h,采用双抗体夹心 ABC-ELISA法 ,分别测定不同时相培养上清中 IL -4和 IFN-γ水平。结果 :刺激 2 h后 ,PHA组与 PMA组 IFN-γ和 IL -4水平无差别 ;刺激 4h后 ,PMA组 IFN-γ和 IL-4水平均高于 PHA组 (P<0 .0 1) ;刺激 6h后 ,PHA组 IFN-γ水平低于 PMA组 (P<0 .0 5 ) ,IL -4水平高于 PMA组 (P<0 .0 5 ) ;刺激 12 h后 ,PHA组 IFN-γ与 PMA组接近 ,两组 IL -4水平亦无差别 ;刺激 2 4h和 48h后 ,PHA组 IFN-γ和 IL-4水平均高于 PMA组 (P<0 .0 5 )。结论 :PHA和 PMA对 PBMCs不同时间的刺激效果不同。

fMLP、PMA、LTB_4对大鼠吞噬细胞能力的影响

目的观测fMLP、PMA、LTB4对大鼠吞噬细胞能力的影响。方法通过密度梯度离心法分离大鼠腹腔吞噬细胞,对分离后得到的巨噬细胞及中性粒细胞使用fMLP、PMA、LTB4诱导后,通过荧光显微镜观察其对荧光微球的吞噬能力,进行相关判断。结果静息状态下,大鼠腹腔巨噬细胞对荧光微球的吞噬能力显著大于中性粒细胞;经fMLP、PMA、LTB4诱导后,巨噬细胞及中性粒细胞对荧光微球的吞噬能力增强。结论大鼠腹腔中性粒细胞吞噬能力小于巨噬细胞;fMLP、PMA、LTB4可致大鼠中性粒细胞、巨噬细胞的的吞噬能力提高。

mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化

目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。

Epstein-Barr病毒BARF1基因协同TPA诱发猴肾上皮细胞恶性转化的研究

目的 探讨Epstein Barr病毒 (EBV)BARF1基因单独或协同佛波醇乙酯 (TPA)诱发猴肾上皮细胞恶性转化的作用。方法 用猴肾永生化上皮细胞PT1和PT7单独或进一步加促癌物TPA注射裸鼠或Scid小鼠背部皮下 ,观察成瘤情况。结果 EB病毒BARF1永生化细胞PT1和PT7在裸鼠不能形成肿瘤 ,但在免疫力严重缺陷的Scid小鼠能形成肿瘤 ,成瘤率为 6 6 7%～ 10 0 % ,成瘤时间较长为45～ 6 0d。加TPA后裸鼠及Scid小鼠均能形成肿瘤 ,裸鼠的成瘤时间为 2 0～ 2 2d ,Scid小鼠的成瘤时间为 5～ 7d。用聚合酶链反应 (PCR)可从肿瘤组织中扩增出BARF1基因。结论 EB病毒BARF1基因是致癌基因 ,甚至无需促癌物等辅助条件 。