丙酮酸脱氢酶磷酸酶催化亚基1在恶性肿瘤中作用机制的研究进展

近年来,恶性肿瘤的发病率及病死率呈逐年上升趋势,发病年龄趋于年轻化,因而对恶性肿瘤的早期预防、诊断和治疗已成为肿瘤临床及基础研究的热点。有研究表明,即使在供氧充足的条件下,肿瘤细胞仍需要从内环境中摄取远高于正常细胞所需的葡萄糖以产生能量,却很少通过氧化磷酸化(OXPHOS)供能,这一现象称为Warburg效应。丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)活性的调节是关键决定点,是糖代谢途径中糖酵解向三羧酸循环转变的关键酶,丙酮酸既可以被OXPHOS进入线粒体,又可以被代谢成乳酸。而丙酮酸脱氢酶磷酸酶(PDP)主要通过增强PDC的活性,导致丙酮酸进入线粒体的浓度增加,故其极具有成为肿瘤诊断标志物及治疗靶点的潜能。本文综述丙酮酸脱氢酶磷酸酶催化亚基1(PDP1)在恶性肿瘤中作用机制的研究进展。

微小RNA-10b调控乳腺癌MCF-7细胞中乳腺癌干细胞标记物乙醛脱氢酶1 mRNA和蛋白的表达

背景:miR-10b能够调控乳腺癌干细胞的相关特性,乙醛脱氢酶1是最重要的乳腺癌干细胞标记物之一,二者在乳腺癌细胞中的相互作用尚需进一步研究。目的:探讨miR-10b对乳腺癌MCF-7细胞中乳腺癌干细胞标记物乙醛脱氢酶1 mRNA和蛋白表达的影响。方法:常规培养乳腺癌MCF-7细胞株,分别将miR-10b模拟物或其阴性对照转染进入乳腺癌MCF-7细胞;转染48 h,通过实时荧光定量PCR实验和Western blot实验检测乙醛脱氢酶1 mRNA和蛋白的表达。结果与结论:(1)将miR-10b模拟物转染进入MCF-7细胞之后,miR-10b在MCF-7细胞株中的表达显著高于对照组(P=0.003 47);(2)miR-10b过表达之后显著上调了MCF-7细胞株中乙醛脱氢酶1 mRNA和蛋白的表达(P=0.009 54和P=0.003 11);(3)结果表明,上调miR-10b表达能够诱导乙醛脱氢酶1阳性乳腺癌干细胞的产生,从而为miR-10b调控乳腺癌细胞侵袭、转移提供新的研究依据。

共转染小干扰RNA质粒联合抑制HeLa细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和转酮醇酶样基因-1表达

目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)及转酮醇酶样基因-1(transketolase like-1,TKTL-1)是肿瘤细胞磷酸戊糖代谢途径(pentose phosphate pathway,PPP)的2个重要关键调节酶。拟通过共转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体同时沉默人宫颈癌Hela G6PD及TKTL-1后,观察其对G6PD和TKTL1的联合抑制作用,旨在探讨共转染siRNA表达载体联合抑制PPP的效果及可行性。方法分别构建靶向G6PD和TKTL1基因siRNA干扰质粒载体,通过酶切和测序鉴定siRNA干扰质粒载体构建成功后,单独或共转染HeLa细胞株,RT-PCR检测G6PD、TKTL1 mRNA表达并结合G6PD、转酮醇酶(transketolase,TKT)活性测定判断并比较共转染联合抑制Hela细胞G6PD、TKTL1表达的效果。结果共转染靶向G6PD和TKTL1基因的siRNA干扰载体能显著下调G6PD和TKTL1基因表达水平[(0.96±0.05)vs(0.47±0.04),(0.98±0.05)vs(0.41±0.04),P<0.01]。同时,2个酶的活性也显著下降(99.2%vs34.5%和99.8%vs 40.1%,P<0.01)。共转染抑制G6PD基因mRNA表达较单独转染靶向G6PD基因的siRNA干扰载体的效果有显著下降[(0.47±0.04)vs(0.31±0.04),P<0.01)]。结论共转染siRNA干扰载体对人宫颈癌HeLa细胞PPP代谢通路进行联合抑制是一种有效的实验方案。

11β-羟基类固醇脱氢酶1在炎症调控中的作用

11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)是调节糖皮质激素(GC)作用的关键酶。11β-HSD有两个同工酶:11β-HSD1和11β-HSD2,催化具有活性的皮质醇与无活性的可的松之间的相互转化。1βl-HSD1主要表达于GC的靶器官,如肝脏、肺、脂肪组织、卵巢、脑组织等,在体内主要作为还原酶起作用,催化可的松还原为皮质醇。11β-HSD1在下丘脑-垂体-肾上腺轴及代谢综合征、肥胖、胰岛素抵抗、炎症调控等众多领域中有重要作用。11β-HSD1的作用越来越受到重视,现阐述11β-HSD1在炎症调控中的意义。

LncRNA LBX2-AS1调节miR-873-5p/G6PD轴对胃癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)瓢虫同源盒2反义RNA1(LBX2-AS1)调节微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:以SGC7901细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组、sh-LBX2-AS1+miR-873-5p inhibitor组;qRT-PCR法检测LncRNA LBX2-AS1、miR-873-5p、G6PD的表达;MTT法和平板克隆实验检测SGC7901细胞增殖;划痕实验检测SGC7901细胞迁移;Transwell实验检测SGC7901细胞的侵袭;Western blot检测SGC7901细胞中MMP-2、PCNA、MMP-9、G6PD蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测LncRNA LBX2-AS1与miR-873-5p,miR-873-5p与G6PD之间的相互作用;小鼠荷瘤实验验证敲除LncRNALBX2-AS1对CC肿瘤生长及G6PD表达的影响。结果:sh-LBX2-AS1组SGC7901细胞中A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、LncRNA LBX2-AS1、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-873-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组相比,sh-LBX2-AS+miR-873-5p inhibitor组miR-873-5p表达降低,A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.05)。LncRNA LBX2-AS1靶向负调控miR-873-5p,miR-873-5p靶向负调控G6PD。实验组移植瘤质量、体积、Ki-67阳性率、G6PD阳性率低于对照组(P<0.05)。结论:敲除LncRNA LBX2-AS1可能抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能是调节miR-873-5p/G6PD轴实现的。

RNA干扰乙醛脱氢酶1A1表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的研究小RNA干扰乙醛脱氢酶1A1基因(ALDH1A1)表达对胃癌细胞生物学行为包括增殖、克隆形成和侵袭能力的影响。方法构建表达ALDH1A1的si RNA的PGPU6/GFP/Neo-ALDH1A1真核细胞表达载体,转染人胃癌细胞系MKN-45细胞为实验组,同时设阴性对照组和空白对照组,Western blotting检测干扰ALDH1A1基因表达的效果。MTT法、克隆形成实验、Transwell小室侵袭实验检测ALDH1A1表达下降后MKN-45细胞增殖、克隆形成和侵袭能力的情况。结果 Western blotting检测显示实验组MKN-45细胞ALDH1A1蛋白表达低于阴性对照组(0.36±0.04 vs.0.72±0.08,P<0.05);MTT法显示实验组MKN-45细胞的增殖抑制率高于阴性对照组[(52.56±1.81)%vs.(30.32±2.23)%,P<0.05];克隆形成实验显示实验组MKN-45细胞的克隆形成能力低于阴性对照组(21.67±2.00 vs.36.78±3.53,P<0.05);Transwell小室侵袭实验显示实验组胃癌细胞的侵袭能力低于阴性对照组(55.11±7.98 vs.84.78±6.00,P<0.05)。结论通过RNA干扰技术可明显下调ALDH1A1蛋白在MKN-45细胞中表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力。ALDH1A1有望成为胃癌治疗的一个新的靶点。

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位、转录激活反应RNA结合蛋白1在表皮生长因子受体突变晚期非小细胞肺癌中的表达及对患者预后的影响

目的探讨丙酮酸脱氢酶E1α亚单位(PDHA1)、转录激活反应RNA结合蛋白1(TARBP1)在表皮生长因子受体(EGFR)突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法取95例接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者的肿瘤组织,免疫组化法检测PDHA1、TARBP1蛋白的表达情况,并分析其与患者临床特征的关系。随访3年,记录患者的总生存率,NSCLC患者预后的影响因素采用Cox风险比例回归模型分析。结果95例NSCLC患者肿瘤组织中,PDHA1阳性表达率为45.26%,阴性表达率为54.74%;TARBP1阳性表达率为74.74%,阴性表达率为25.26%。分化程度为中低分化、淋巴结转移NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1蛋白的阳性表达率较低、TARBP1蛋白的阳性表达率较高。至随访结束,95例NSCLC患者病死67例,生存28例。PDHA1阳性表达患者总生存率为44.2%,明显高于PDHA1阴性表达患者的17.3%(P﹤0.01);TARBP1阳性表达患者的总生存率为18.3%,明显低于TARBP1阴性表达患者的62.5%(P﹤0.01)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度为中低分化、有淋巴结转移、PDHA1表达阴性、TARBP1表达阳性均是NSCLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1阴性表达率较低、TARBP1阳性表达率较高,且PDHA1阴性表达、TARBP1阳性表达患者的预后较差。

11β-羟化类固醇脱氢酶1促进3T3-L1前脂肪细胞分化

目的:应用3T3-L1细胞模型研究11β-羟化类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)与前脂肪细胞分化的关系,探讨11β-HSD1在前脂肪细胞分化及肥胖中的作用。方法:构建11β-HSD1-SiRNA表达质粒pGCsilencerTMH1/TetO1-11β-HSD1并稳定转染3T3-L1细胞,采用油红染色观察脂滴堆积情况,采用Westernblot方法检测11β-HSD1在正常3T3-L1细胞分化过程中的表达;并用Real-timePCR检测脂肪细胞分化相关标志基因的变化,阐明11β-HSD1对前脂肪细胞成脂分化的影响。结果:正常3T3-L1前脂肪细胞在上述三联诱导分化后脂滴堆积随着分化过程逐渐增加;在pGCsilencerTMH1/TetO1-11β-HSD1转染的3T3-L1诱导分化过程中可见脂滴堆积的减少。在3T3-L1前脂肪细胞分化模型中(days0,2,4,6,8),11β-HSD1蛋白水平是上调的。3T3-L1前脂肪细胞分化模型中GR在分化模型早期(D4及D6)是上调的,但是在分化后期(D8)很快又下降。在正常3T3-L1前脂肪细胞分化早期LPL上调,随着分化后期FAS、PPARγ等明显上升,Pref-1作为脂肪细胞分化抑制因子,在分化早期升高,在分化后期明显下调。在pGCsilencerTMH1/TetO1-11β-HSD1转染后的3T3-L1细胞分化模型中上述有关标志基因发生变化。结论:11β-HSD1作为受体前调节剂促进前脂肪细胞分化,与肥胖和胰岛素抵抗相关。

11β-羟类固醇脱氢酶1型基因沉默对胰岛β细胞系NIT-1葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响

目的观察RNA干扰阻断胰岛β细胞系NIT-1中11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)表达对细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)的影响。方法pSuper质粒为载体,构建针对11β-HSD1基因的质粒oligo886、oligo866和乱序对照质粒oligoScr886,转染NIT-1细胞,RT-PCR和蛋白印迹法检测11β-HSD1mRNA和蛋白表达。oligo886重组质粒转染25 mmol/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞,测GSIS。结果转染oligo886和oligo866质粒的NIT-1细胞11β-HSD1mRNA分别下降78.1%±2.9%和51.7%±2.7%,11β-HSD1蛋白的水平分别下降82.2%±2.1%和56.5%±2.0%。oligo866转染25 mmol/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞后,GSIS较对照组明显升高(P<0.01)。结论11β-HSD1基因沉默能改善NIT-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌能力,提示胰岛β细胞NIT-1通过11β-HSD1调节糖皮质代谢,参与葡萄糖刺激胰岛素分泌。

安宫牛黄散中的朱砂雄黄对感染性脑水肿大鼠乳酸脱氢酶及其同工酶的影响

目的研究生理、病理状态下安宫牛黄散中的朱砂、雄黄对机体作用的不同特点,探讨复方中朱砂、雄黄的药理作用机制。方法将SD大鼠随机分成6组(8～10只/组) :正常组,正常加安宫牛黄散(下简称整方)组(2 78mg/kg) ;正常加除去朱砂、雄黄的安宫牛黄散(下简称拆方)组(2 2 2. 7mg/kg) ;脑水肿模型组(一侧大鼠颈总动脉注射百日咳杆菌2 50亿/kg) ;模型加整方组(造模前1h给药2 78mg/kg) ;模型加拆方组(造模前1h给药2 2 2 . 7mg/kg)。一次给药后5h(模型组注菌后4h)采血、制备脑匀浆。用比色法测定脑组织、血清中乳酸脱氢酶(LDH)总活力,琼脂糖凝胶电泳法测定血清中乳酸脱氢酶同工酶LDH1 -5 百分酶活力。结果与正常组比较,模型组LDH总活力、LDH1 、LDH2 百分酶活力显著升高(P <0 .0 1) ;正常加整方组、正常加拆方组LDH总活力升高(P <0 . 0 5) ,LDH1 、LDH2 百分酶活力均显著升高(P <0 . 0 1)。LDH4、LDH5 百分酶活力下降(P <0. 0 1) ,但除LDH5 外,整方组和拆方组各项酶活力组间差异无显著性。与模型组比较,模型加整方组、模型加拆方组LDH总活力显著下降(P <0 . 0 1) ,LDH5 百分酶活力显著升高(P <0 .0 1) ,但两组间差异无显著性;模型加整方组LDH2 、LDH3 百分酶活力显著下降(P <0 . 0 1) ,LDH1 。

siRNA沉默转酮醇酶样蛋白1基因对人肝癌HepG2细胞生长微环境的影响

目的:通过siRNA技术沉默肝癌细胞系HepG2转酮醇酶样蛋白1(TKTL1)基因后观察其对生长微环境中乳酸生成水平、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及NADPH/NADP+比值的影响,旨在探讨肿瘤细胞TKTL1表达与其转移特性的内在联系。方法:用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转染HepG2细胞株,RT-PCR检测TKTL1 mRNA表达并结合转酮醇酶(TKT)活性测定判断其干扰效率;以未转染HepG2细胞为对照,进一步观察TKTL1沉默的癌细胞内乳酸生成水平、GSH含量、NADPH/NADP+比值及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性的变化。结果:siRNA沉默HepG2细胞TKTL1基因后TKTL1 mRNA表达下降、TKT活性显著降低(P<0.01),乳酸生成、GSH水平及NADPH/NADP+比值较对照组细胞均显著降低(P<0.01),但G-6-PD活性无明显变化(P>0.05)。结论:肿瘤可能通过TKTL1高表达调整葡萄糖代谢从而改变乳酸及氧化自由基生成,使细胞生长微环境利于肿瘤转移。

醛脱氢酶18家族成员A1在食管癌细胞中结合的靶标及测序分析

目的研究醛脱氢酶18家族成员A1(aldehyde dehydrogenase 18 family member A1,ALDH18A1)作为一种RNA结合蛋白在食管癌细胞(KYSE150细胞)中结合RNA的分子特征及对肿瘤生长的影响。方法通过体外培养人食管鳞癌细胞(KYSE150细胞)。同时,采用RNA免疫共沉淀技术研究细胞内RNA与蛋白结合情况,利用目标蛋白的抗体将相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,分离纯化捕获的RNA。分析ALDH18A1结合RNA的分子特征,并且对ALDH18A1结合靶基因进行京都基因与基因组百科全书聚类分析。结果蛋白质免疫印迹实验显示目的蛋白被抗体较好富集。ALDH18A1具有广泛的RNA结合活性,结合显著富集在编码区、内含子和5’非翻译区。ALDH18A1主要结合在RNA的UGUAAUC基序。聚类分析结果表明,ALDH18A1结合的RNA分子主要参与了在对焦点黏附、癌症的中心碳代谢、细胞周期、剪接体、RNA运输和泛素介导的蛋白水解等。结论ALDH18A1能结合RNA分子,可在食管癌相关基因的表达过程以及相关的生物学过程过程中发挥作用。

枳黄方对酒精性肝损伤大鼠肝胃ADH_1 mRNA的影响

目的:探讨枳黄方对大鼠酒精性肝损伤的防护作用及其机理。方法:将30只SD大鼠随机分为3组:空白对照组、酒精攻击组、枳黄方防护组,每组10只。10天后,处死大鼠,取大鼠肝脏进行HE染色观察肝病理变化,RT-PCR法测定肝、胃组织ADH1mRNA的变化。结果:枳黄方能缩短大鼠醉酒时间(P<0.05),枳黄方防护组肝、胃病理表现较模型组明显改善,其肝、胃ADH1mRNA表达量高于模型组(P<0.01)。结论:枳黄方对大鼠酒精性肝损伤有较明显的防护作用,这可能与其能提高肝、胃ADH1mRNA的表达有关。

LncRNA FZD10-AS1通过调控miR-337-3p/GPD1分子轴抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇女儿童医院儿童骨科2016年9月至2018年12月47例行骨肉瘤根治术切除的癌组织及相应癌旁组织,qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织及癌旁组织、骨肉瘤细胞株和正常成骨细胞中的表达量。选择FZD10⁃AS1表达量最低的细胞株为研究对象,Lipofectamine 2000转染试剂分别转染表达FZD10⁃AS1的质粒(观察组)和阴性对照质粒(对照组)至骨肉瘤细胞,CCK⁃8法和细胞划痕实验检测分别FZD10⁃AS1过表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FZD10⁃AS1的作用机制。qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1过表达对下游基因表达的影响,Western Blot检测有关蛋白的表达量。结果骨肉瘤组织中FZD10⁃AS1的表达明显少于癌旁组织(P<0.01)。骨肉瘤细胞株中FZD10⁃AS1的表达明显少于正常成骨细胞(P<0.01),在U⁃2OS细胞中表达量最少(P<0.01)。过表达FZD10⁃AS1明显抑制U⁃2OS细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示,FZD10⁃AS1可互补结合miR⁃337⁃3p,miR⁃337⁃3p可进一步互补结合GPD1 mRNA。过表达FZD10⁃AS1后U⁃2OS细胞中miR⁃337⁃3p表达量明显下降(P<0.01),GPD1 mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.01)。结论FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织和细胞株中表达明显降低,FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p促进GPD1基因的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力,FZD10⁃AS1可能成为骨肉瘤治疗及诊断的靶点。

异柠檬酸脱氢酶-2基因小干扰RNA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑瘤作用

能量代谢在肿瘤发生发展中起重要的作用，其中三羧酸循环的异柠檬酸脱氢酶（IDH）在许多肿瘤中发生突变，可能是因为这些突变通过激活原癌基因或抑制抑癌基因的途径导致肿瘤发生。目前国内外对IDH一2基因研究主要集中于神经胶质瘤和急性髓性白血病[1]，在肝癌中报道尚少。

抗疲劳1号对培养大鼠皮质神经细胞的抗损伤作用

目的；探讨抗疲劳１号（ＡＦ－１）对培养大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用及机制。方法：应用谷氨酸诱导培养大鼠皮层神经细胞损伤的模型。通过测定乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出率、ＤＮＡ断裂率、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和脂质过氧化物（ＬＰＯ），观察ＡＦ－１药物的保护作用。结果：高浓度的谷氨酸可增加培养神经细胞的ＬＤＨ释放率和ＤＮＡ断裂率，并诱导自由基产生。ＡＦ－１明显降低谷氨酸的神经细胞毒性，使ＬＤＨ释放率及ＤＮＡ断裂率明显降低，ＬＰＯ含量明显下降，ＳＯＤ含量明显升高。结论：ＡＦ—１对大鼠皮层神经细胞损伤具有明显的保护作用。

环状RNA在缺氧/复氧诱导的大鼠H9c2细胞焦亡中的作用及其机制

目的探讨环状RNA(circRNA)在缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为A~F组,分别进行缺氧0、1、3、6、12、24 h处理后,再进行6 h复氧,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒及Western blot方法检测H/R处理的H9c2细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白表达水平,确定诱导H9c2细胞焦亡的最佳缺氧时间。将H9c2细胞分为对照组和实验组,对照组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,实验组H9c2细胞置于厌氧培养箱进行H/R处理,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测两组H9c2细胞中circRNA的表达水平。将H9c2细胞分为G~I组,G组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,H组转染对照siRNA(NC),I组转染mmu_circ_0000723特异性siRNA(siRNA-mmu_circ_0000723)。转染24 h后,采用RT-qPCR方法检测各组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达水平。将H9c2细胞分为J~M组,J组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,K组H9c2细胞置于厌氧培养箱进行H/R处理,L组和M组H9c2细胞分别转染对照NC和siRNA-mmu_circ_0000723,并于转染24 h后进行H/R处理。分别采用碘化丙啶(PI)染色、LDH试剂盒和Western blot方法检测J~M组的PI阳性细胞比率、细胞上清液中LDH活性,以及焦亡相关蛋白的表达水平。结果A~F组H9c2细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白的表达水平差异有显著性(F=24.86~2153.00,P<0.05)。与A组相比,D组H9c2细胞中LDH活性及焦亡相关蛋白的表达显著性差异最明显(t=4.14~62.88,P<0.05)。与对照组相比,实验组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达水平明显降低(t=9.78,P<0.05)。G~I组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达差异有显著性(F=348.20,P<0.05);与G组相比,I组H9c2细胞中mmu_circ_0000723相对表达水平显著降低(t=22.88,P<0.05)。J~M组PI阳性细胞比例、细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白的表达水平差异均有显著性(F=34.39~8528.00,P<0.05);与K组相比,M组H9c2细胞上述5个指标均明显升高(t=4.99~54.00,P<0.05),而L组细胞上述5个指标差异无显著性(P>0.05)。结论mmu_circ_0000723通过调控焦亡相关蛋白的表达,在H/R诱发的H9c2细胞焦亡中发挥重要作用。

下调ADAR1表达对人肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的:探讨下调作用于RNA的腺苷酸脱氢酶1(ADAR1)对肺癌H1299和H520细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响,并阐明其作用机制。方法:H1299和H520细胞系分为对照组(转染negative shRNA)和shADAR1组(转染shADAR1)。实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测各组细胞中ADAR1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖活性和克隆形成数,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,Western blotting法检测各组细胞中E钙黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,shADAR1组的H1299和H520细胞中ADAR1 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,shADAR1组H1299和H520细胞增殖活性、克隆形成数量和细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.05或P<0.01),H1299和H520细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),vimentin蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:下调ADAR1表达能够抑制肺癌细胞的增殖、迁移及EMT。

参三七皂甙Rg_1预适应对肥厚乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护

目的应用血管紧张素II刺激致新生SD大鼠心肌细胞肥厚,探讨参三七皂甙Rg1(Rg1)对缺氧复氧(H/R)损伤的保护作用及机制。方法用AngII刺激致乳鼠(SD大鼠)心肌细胞肥厚,细胞H/R损伤前48h给予Rg10.01～10.00μmol/L预适应处理,检测各组心肌细胞表面积和细胞蛋白含量,测定心肌细胞凋亡率、细胞生存能力和培养液中乳酸脱氢酶、丙二醛及一氧化氮含量。结果与H/R损伤组相比,Rg10.01～10.00μmol/L预适应组细胞表面积和蛋白含量分别减少47.92%和46.99%;细胞生存率增加37.98%,细胞凋亡率降低85.29%;乳酸脱氢酶活性和丙二醛含量分别降低56.25%和70.78%,一氧化氮含量增加2.6倍。结论Rg1预适应可显著减轻AngII致肥厚心肌细胞缺氧复氧损伤,增强受损细胞生存能力,机制与抑制细胞凋亡、减少乳酸脱氢酶释放、增强一氧化氮活性,减少脂质过氧化有关。