膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3的表达及其启动子甲基化的研究

目的检测膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)启动子甲基化及其蛋白表达,探讨TIMP-3在该肿瘤中的作用及临床意义。方法采用免疫组化SP法和高清晰度彩色医学图文分析系统对38例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜中TIMP-3的表达进行检测分析,用甲基化特异的PCR(MSP)法检测TIMP-3基因启动子的甲基化状态。结果TIMP-3在膀胱癌中呈高表达,且与分级呈正相关,但不与分期相关,其启动子甲基化发生率为5.3%(2/38)。结论TIMP-3参与膀胱癌侵袭转移,其启动子甲基化发生率不高,检测其表达水平对膀胱移行细胞癌预后判断具有一定的参考价值。

来曲唑与克罗米酚对子宫内膜整合素α_Vβ_3和基质金属蛋白酶组织抑制因子-3表达的影响

目的 比较来曲唑（LE）与克罗米酚（CC）促排卵治疗时对植入窗期子宫内膜整合素αvβ3和基质金属蛋白酶组织抑制因子-3（TIMP-3）表达的影响。方法 收集2004年3～10月在本中心服用LE或CC促排卵治疗20例患者植入窗期子宫内膜（LE组9例，CC组11例），另取12例自然月经周期的相应时期内膜作为对照。通过免疫组织化学法测定整合素αvβ3和TIMP-3的表达强度。结果 三组子宫内膜整合素αvβ3的表达强度无显著性差异；TIMP-3表达强度CC组高于LE和对照组。结论 LE和CC都不影响植入窗期子宫内膜中整合素αvβ3的表达。CC使TIMP-3的表达信号明显加强。

基质金属蛋白酶-3和金属蛋白酶组织抑制因子-1在兔下颌牵张成骨改建期的表达及意义

目的 研究基质金属蛋白酶_3(MMP_3)和金属蛋白酶组织抑制因子_1(TIMP_1)在下颌骨牵张后形成的新骨组织中的定位表达。方法 对 8只成熟大耳白兔按每天 1mm的牵张速率延长双侧下颌骨 6mm ,在牵张结束后第 4周处死动物 ,取牵张区新骨标本作组织学和免疫组化检测。结果 MMP_3与TIMP_1在牵张骨痂中均呈高水平表达 ,MMP_3阳性信号主要定位于新生骨小梁边缘的成骨细胞和埋入新骨基质中的骨细胞 ,TIMP_1则定位于成骨细胞。

基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因转染血管平滑肌细胞移植对急性心肌梗死后早期心肌重塑的影响

目的研究基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor-3of matrix metalloproteinases,TIMP-3)基因转染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)移植,对急性心肌梗死(acute myocardialinfarction,AMI)后早期心脏结构变化的影响,并探讨其可能的机制。方法取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。另取61只Wistar雌性大鼠建立左冠状动脉远端结扎的AMI动物模型,将存活的54只大鼠模型随机分为三组,每组18只。于冠状动脉结扎后立即向缺血部心室壁内注射含有1×106个TIMP-3基因转染VSMCs(A组)、1×106个VSMCs(B组)或不含细胞的PBS液(C组)各0.5ml。术后1周,进行心脏形态学检测观察大鼠心脏结构变化,免疫组织化学染色验证TIMP-3基因转染VSMCs在缺血心肌中的存活情况,Western blot法测定大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)蛋白的含量。结果成功分离、培养VSMCs,纯度达98%,TIMP-3基因成功转入VSMCs中。术后1周,A组大鼠梗死心肌面积占左室游离壁面积的百分比为28.73%±1.56%,小于B组39.63%±1.84%和C组46.32%±2.16%(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。A组大鼠左室容积指数为5.27±0.21mm3/g,小于B组6.69±0.34mm3/g和C组9.67±0.88mm3/g(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。免疫组织化学染色见TIMP-3基因转染VSMCs被成功植入缺血心肌并在其中存活。Western blot法示A组大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白含量为300704.8±3692.8,高于B、C组的195548.8±3014.2及177991.1±2502.1(P<0.01);B组高于C组(P<0.01)。A组MMP-9蛋白含量为594827.4±5708.5,低于B、C组的921461.4±8887.4及1044445.0±8788.6(P<0.01);B组低于C组(P<0.01)。结论将TIMP-3基因转染的VSMCs移植入心肌缺血区可明显抑制AMI后早期心肌重塑。

单侧输尿管梗阻大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2的表达及益气活血法的影响

目的:肾间质纤维化是肾脏疾病进展到肾功能衰竭的共同通路。通过观察益气活血法中药制剂对肾间质纤维化大鼠肾组织基质金属蛋白酶3,基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:实验于2006-12/2007-06在首都医科大学解剖与组织胚胎学系实验室完成。①实验动物:Wistar雄性大鼠30只,采用随机数字法分为模型组、西药蒙诺组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组和假手术组。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。②实验方法:其中前5组行单侧输尿管梗阻致肾小管间质纤维化模型手术,假手术组打开大鼠腹腔后,分离其左侧输尿管,不结扎即关闭腹腔。益气活血法中药制剂主要由生黄芪,当归,赤白芍,丹参,黄芩,车前草,牛膝等组成。西药组、中药小剂量组、中药中剂量组和中药大剂量组于手术前2d开始灌胃给药,1次/d,其药量分别为:西药组蒙诺10mg/(kg·d)、小剂量组0.018mL/(kg·d)、中剂量组0.036mL/(kg·d)、大剂量组0.072mL/(kg·d),连续给予2周。模型组及假手术组用相同体积的生理盐水灌胃。③实验评估:6组大鼠于术后14d麻醉后处死,观察梗阻肾脏病理改变,并用免疫组织化学方法检测肾组织对基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2的表达,通过医学病理图像分析系统对基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2的积分光密度进行统计学分析。结果:30只大鼠全部进入结果分析。肾组织切片免疫组织化学方法结果显示:基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2主要表达部位在肾小管上皮,少量表达在肾间质和肾小球。基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶3在模型组的表达较假手术组明显减弱,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药大、中剂量组及西药蒙诺组的表达较模型组显著增强,积分光密度差异有显著性意义(P<0.05)。金属蛋白酶组织抑制因子2在模型组的表达较假手术组显著增强,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药大、中剂量组及西药蒙诺组的表达较模型组有所减弱,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药小剂量组无论基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶3还是金属蛋白酶组织抑制因子2的表达与模型组相比均较为相似,两组间积分光密度比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:大鼠输尿管梗阻后呈现出的病理损害可能和肾组织基质金属蛋白酶3,基质金属蛋白酶2与金属蛋白酶组织抑制因子2的表达失衡有关,益气活血法可以上调基质金属蛋白酶2,基质金属蛋白酶3的表达,下调金属蛋白酶组织抑制因子2的表达,显示在抑制或延缓肾间质纤维化的进程中具有一定的作用。

长蛇灸对强直性脊柱炎患者血清基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶组织抑制因子1的影响

目的：观察长蛇灸对早中期强直性脊柱炎患者血清基质金属蛋白酶3（MMP-3）和基质金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP-1）的影响。方法：将60例早中期强直性脊柱炎患者随机分为两组,治疗组30例,采用长蛇灸进行治疗;对照组30例,口服柳氮磺胺吡啶治疗。观察两组患者治疗前后血清MMP-3和TIMP-1水平的变化。结果：两组患者治疗后血清MMP-3明显下降（P〈0·01~0·05）,但治疗组下降更显著,与对照组比较,有极显著性差异（P〈0·01）;两组患者治疗后血清TIMP-1明显升高（P〈0·01）,但治疗组升高更显著,与对照组比较,有显著性差异（P〈0·05）。结论：长蛇灸治疗早中期强直性脊柱炎,可减少致炎因子的释放,调节异常的基质降解和减少血管形成等炎症的病理因素,缓解AS炎症、减少软骨和骨质破坏。

重组金属蛋白酶组织抑制因子-3与顺铂联合应用对肺癌细胞A549生长抑制与凋亡的影响

目的探讨重组金属蛋白酶组织抑制因子-3(rhTIMP-3)和顺铂(cis-platinum,DDP)联合应用对肺癌细胞株A549生长和凋亡的影响。方法分别或联合应用不同浓度的rhTIMP-3、DDP作用于A549细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞术测定细胞周期分布和凋亡率。结果 rhTIMP-3与DDP均可抑制A549细胞的增殖,rhTIMP-3作用结果呈时间、浓度依赖性,DDP的作用结果呈浓度依赖性,二者都可以诱导A549细胞凋亡。rhTIMP-3使细胞阻滞在S和G2/M期,DDP可造成细胞S期的阻滞,当两者联合应用时对A549细胞的生长抑制作用明显加强,对诱导凋亡有明显协同作用。结论 rhTIMP-3、DDP均可抑制A549细胞的增殖,并可诱导其凋亡;二者联合应用不仅能增加细胞生长的抑制作用,而且有协同诱导细胞凋亡作用。

金属蛋白酶组织抑制因子-3的结构、表达调控和生物学功能

金属蛋白酶组织抑制因子 3(TIMP 3)是一种结合细胞外基质 (ECM)的非可溶性蛋白。TIMP 3参与正常组织的发育和重建过程 ,也参与了许多疾病的发生。TIMP 3一方面可以刺激成纤维细胞增殖 ,另一方面却诱导恶性肿瘤细胞的凋亡。由于TIMP 3能以 1∶1克分子比例与基质金属蛋白酶 (MMPs)非共价结合 ,抑制MMPs的活性 ,因此TIMP 3有抑制肿瘤生长、侵袭和转移的作用 ,肿瘤组织中TIMP 3表达水平的下调或丢失将促进肿瘤的进程。TIMP 3基因启动子区甲基化是其表达水平下调或丢失的主要原因。运用去甲基化因子可使TIMP 3启动子区去甲基化 ,使TIMP 3得以重新表达 。

血清含凝血酶敏感素1型基序的解聚素样金属蛋白酶、组织金属蛋白酶抑制因子3水平与支架内再狭窄的关系

目的探讨血清含凝血酶敏感素1型基序的解聚素样金属蛋白酶(ADAMTS-1)、组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)水平与冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后支架内再狭窄(ISR)的关系。方法选取455例行PCI的冠心病患者作为研究对象,根据随访1年后冠状动脉造影的影像学观察结果分为ISR组43例和非ISR组412例。采用Gensini评分及狭窄支数评价狭窄程度,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ADAMTS-1、TIMP3水平。采用Spearman相关分析法分析ADAMTS-1、TIMP3水平与造影后Gensini评分的相关性;采用Pearson相关系数法分析ADAMTS-1与TIMP3的相关性;采用Logistic回归分析法分析ISR发生的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估ADAMTS-1、TIMP3对ISR发生的预测价值。结果与非ISR组相比,ISR组患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、ADAMTS-1水平升高,TIMP3水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);ISR组血清ADAMTS-1水平与Gensini积分呈正相关(P<0.05),TIMP3水平与Gensini积分呈负相关(P<0.05);ISR组ADAMTS-1水平与TIMP3水平呈负相关(r=-0.616,P<0.001);多因素Logistic回归分析发现,ADAMTS-1高水平、TIMP3低水平均为ISR发生的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线显示,ADAMTS-1与TIMP3联合预测ISR发生的曲线下面积显著大于两者单独预测(P<0.05)。结论ADAMTS-1和TIMP3水平与冠心病患者PCI后ISR的发生密切相关,两者是ISR发生的独立危险因素,对预测ISR发生具有重要价值。

大鼠生长早期改变食物负荷对颞下颌关节软骨可聚蛋白聚糖酶-1和金属蛋白酶组织抑制因子-3表达的影响

目的观察大鼠生长早期改变食物硬度造成颞下颌关节负荷改变后颞下颌关节软骨内可聚蛋白聚糖酶-1和金属蛋白酶组织抑制因子-3(TIMP-3)的表达变化,并探讨其变化机制。方法 100只15 d龄雌性大鼠,21 d龄断奶后随机分为两组,实验组50只改喂极硬块状食物,对照组50只喂粉末样食物,改变食物后6 h、12 h、24 h、48 h及9 d每组分别各处死10只大鼠,采用免疫组化法及蛋白免疫印迹法半定量分别检测可聚蛋白聚糖酶-1和TIMP-3在髁突软骨细胞的表达情况。结果免疫组化发现,在所有时间段,可聚蛋白聚糖酶-1和TIMP-3主要表达在两组髁突软骨增殖层和上层肥大层的软骨细胞,可聚蛋白聚糖酶-1在两组髁突软骨下肥大层以及基质中亦有弱表达;蛋白免疫印迹结果显示,在12 h、24 h实验组可聚蛋白聚糖酶-1相对灰度值明显高于对照组(P<0.05);在6 h时间点上,实验组TIMP-3相对灰度值明显低于对照组(P<0.01);其他时间段两组表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论改变食物硬度造成大鼠颞下颌关节负荷改变,可聚蛋白聚糖酶-1和TIMP-3参与髁状突软骨代谢,其表达变化属生理范围内,是改变食物负荷极早期的一种敏感、暂时、适应性改变。

人转化生长因子β3、结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶抑制剂1基因重组慢病毒多表达质粒的构建及活性检测

背景:前期试验显示单个病毒载体介导的多基因共表达系统能够显著提高椎间盘退变转基因疗效。目的:构建人转化生长因子β3、结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶抑制剂1基因重组慢病毒多表达质粒。方法:应用全基因合成技术,以"自剪切多肽2A"串联目的基因,并克隆到慢病毒表达质粒构建重组慢病毒质粒Lenti-TGF-β3-P2A-CTGF-T2A-TIMP1。转染293细胞后,应用RT-PCR和Western-Blot技术分别检测转染后不同时间点目的基因mRNA和蛋白质表达水平。结果与结论:RT-PCR和Western-blot技术检测结果显示重组质粒成功表达了3种目的基因,并于转染后48h左右达到峰值,"2A"结构下游基因蛋白质表达量约为上游基因的80%。说明成功构建了携带人转化生长因子β3、结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶抑制剂1基因的慢病毒多表达质粒。

泥蚶基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因的克隆及镉免疫表达研究

通过已构建的泥蚶转录组文库EST,利用SMART RACE技术扩增得到泥蚶Tg-TIMP-3基因全长c DNA序列,并对其进行生物信息学和组织表达相关分析。结果显示,泥蚶Tg-TIMP-3 c DNA全长为804 bp,其中开放阅读框为570 bp,编码189个氨基酸;氨基酸序列比对发现其氨基酸序列与其他动物的相似性并不高,与长牡蛎的相似性仅为35.8%,但TIMP基因的两个功能域(N端和C端)相对保守。qRT-PCR检测结果显示:Tg-TIMP-3 mRNA在鳃中表达最高,外套膜和肝胰腺次之,表达量最低的是血液。在不同浓度重金属镉(Cd)攻毒后,泥蚶鳃中的Tg-TIMP-3 mRNA表达量先略微下调后显著上调达到最高,其中25μg/L和250μg/L镉攻毒后在6 h时表达量达到最高(P<0.01),500μg/L镉攻毒后在9 h时表达量达到最高,48 h后各浓度组Tg-TIMP-3基因表达受到不同程度抑制。研究表明,Tg-TIMP-3对重金属Cd免疫防御或解毒中可能起重要作用,而泥蚶鳃组织中的Tg-TIMP-3 mRNA表达对不同浓度Cd的抗逆免疫反应的灵敏度和时序上存在一定差异。

促红细胞生成素对单侧输尿管梗阻小鼠肾组织中基质金属蛋白酶-3及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2的影响

[目的]通过分析促红细胞生成素(EPO)对基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)的作用,探讨了EPO对肾间质纤维化进展过程的影响.[方法]选取2~4周龄雄性昆明种幼鼠,随机分为假手术组、肾间质纤维化模型组(UUO组)和EPO治疗组(EPO组).UUO组和EPO组采用结扎单侧输尿管的方法制作肾间质纤维化小鼠模型,EPO组于术后1 d开始腹腔注射给予EPO溶剂1000 U/(kg·d),共14 d,假手术组和UUO组腹腔注射给予等量生理盐水.于术后第3、7、14天取材,采用脲酶法检测眼球血清中BUN含量、肌氨酸氧化酶法检测SCr含量;采用HE和Masson染色技术观察肾组织病理变化,利用Banff分级法对肾间质损伤进行半定量评分,并采用Image-Pro Plus图像分析软件定量分析肾间质纤维化程度;采用免疫组织化学染色技术检测肾组织中MMP-3、TIMP-2蛋白表达,并使用Image-Pro Plus图像分析系统选取积分光密值为参数进行半定量分析.[结果]生物化学观察结果显示,各时间点UUO组SCr、BUN含量均明显高于假手术组(P<0.05)及EPO组(P<0.05).病理观察结果显示,随时间推移UUO组肾小球数量逐渐减少,肾单位大量消失,肾小管管腔塌陷,结构破坏严重,肾皮质变薄;EPO组各时间点肾组织病理改变明显减轻,肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积均明显低于UUO组(P<0.05),但均明显高于假手术组(P<0.05).免疫组织化学观察结果显示,各时间点UUO组中MMP-3和TIMP-2表达均明显高于同时间点的假手术组(P<0.05),EPO组中MMP-3表达均明显高于UUO组(P<0.05);EPO组各时间点TIMP-2蛋白表达均明显高于同时间点的假手术组、而低于同时间点的UUO组(P<0.05).[结论]EPO可能通过调节肾组织中MMP-3、TIMP-2蛋白表达抑制肾间质纤维化,从而起到保护肾组织的作用.

丹参多酚酸盐对心衰大鼠基质金属蛋白酶-3及其抑制因子-1表达的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对心衰大鼠基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)及其抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠完全随机分成模型组,丹参多酚酸盐低剂量组、高剂量组,卡托普利组,卡托普利和丹参多酚酸盐高剂量联合组(简称中西药联合组),正常对照组。除正常对照组,其余大鼠运用阿霉素腹腔注射制造心衰模型,正常对照组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水,每周1次,共6周。在开始造模的同时,各组开始相关干预。8周后,检测心功能,行心肌组织天狼猩红染色,检测心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)、心肌血管周围胶原面积与管腔面积的比例(perivasular circumferentiall area,PVCA)。荧光PCR检测心肌MMP-3、TIMP-1的mRNA水平,Western blot检测心肌MMP-3、TIMP-1的表达情况。结果与模型组相比,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组均有不同程度的降低心肌CVF、PVCA(P<0.05,P<0.01,P<0.01),中西药联合组较卡托普利组更明显(P<0.05);丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组心肌组织中MMP-3的mRNA水平及蛋白表达较模型组均降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),且中西药联合组低于卡托普利组(P<0.05);与模型组相比,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组均能上调心肌组织TIMP-1的mRNA水平及蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.01),且中西药联合组高于卡托普利组(P<0.05)。结论丹参多酚酸盐能降低心肌间质胶原,其机制可能与下调MMP-3及上调TIMP-1的表达有关。

肝硬化患者血清中基质金属蛋白酶-3、基质金属蛋白组织抑制因子-1水平与肝硬化进程的研究

目的 探讨肝硬化患者血清中的基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和基质金属蛋白组织抑制因子-1 （TIMP-1）值对于肝硬化进程的影响.方法 分析台州恩泽医疗集团路桥医院2011年1月～2012年6月收治的30例乙型肝炎后肝硬化代偿期患者（代偿组）及30例失代偿期患者（失代偿组）的临床资料,30名健康者作为正常对照组.采用BAS-ELISA法测定MMP-3的血清含量,同时采用ELISA双抗体夹心法测定TIMP-3的浓度;计算TIMP-1/MMP-3的比值.对比两组患者的MMP-3、TIMP-1的临床指标的异同.结果 ①代偿组患者血清MMP-3水平[（20.32±3.10） ng/mL]显著高于正常对照组血清MMP-3水平[（17.45±2.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜ 0.05）;代偿组患者血清TIMP-1水平[（1.72±0.40）ng/mL]显著高于正常对照组[（1.49±0.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;代偿组TIMP-1/MMP-3值为（0.088±0.010）,比正常对照组TIMP-1/MMP-3值（0.086±0.010）有所升高,但差异无统计学意义（P＞0.05）.②失代偿组患者血清MMP-3水平[（22.73±5.20）ng/mL]显著高于正常对照组[（17.45±2.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者血清TIMP-1水平[（2.24±0.30）ng/mL]显著高于正常对照组[（1.49±0.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值为（0.103±0.020）,显著高于正常对照组（0.086±0.010）,差异有统计学意义（P＜0.05）.③失代偿组患者血清中MMP-3水平显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者血清TIMP-1水平显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜ 0.05）.结论 代偿期肝硬化患者MMP-3以及TIMP-1皆显著升高,TIMP-1/MMP-3比值有升高趋势.失代偿期肝硬化患者MMP-3以及TIMP-1皆显著升高,TIMP-1/MMP-3比值显著升高.MMP-3/TIMP-1的比值与TIMP-1的表达与肝硬化程度有关.

正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因对小鼠成纤维细胞表达细胞外基质的影响

目的 观察正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP- 1)基因对小鼠成纤维细胞生物学行为的影响。方法 应用正、反义人金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP- 1)逆转录病毒表达载体转染 NIH3T3细胞 ,观察其对 NIH3T3细胞增殖的影响 ,Northern blot检测细胞 胶原 (α1)、MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1m RNA的表达 ,酶谱法分析细胞培养液中 MMP- 2、MMP- 9的蛋白表达 ;EL ISA测定细胞培养液中 FN、 、 、 型胶原的含量。结果 正义转染组显示出促细胞生长作用 (P<0 .0 1) ;反义转染组显示抑制细胞生长作用 (P<0 .0 1) ;TIMP- 1m RNA在各组均有表达 ,反义转染组表达明显减弱。正义转染组细胞培养液中 FN及 、 、 型胶原含量明显增高 (P<0 .0 1) ,MMP- 2 ,MMP- 9含量降低 ;而反义转染组 FN及 、 、 型胶原含量明显降低 (P<0 .0 1) ,MMP- 2 ,MMP- 9含量增高。结论 正义 TIMP- 1促进NIH3T3细胞的增殖 ,反义 TIMP- 1则抑制 NIH3T3细胞的增殖 ;反义 TIMP- 1通过抑制细胞 TIMP- 1的表达而促进小鼠成纤维细胞的 FN及 、 、 型胶原降解。

携带基质金属蛋白酶组织抑制因子的重组腺病毒对人乳头瘤病毒阳性子宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

目的研究携带基质金属蛋白酶组织抑制因子-3(TIMP-3)的重组腺病毒(Ad-TIMP-3)对人乳头瘤病毒(HPV)阳性子宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。方法采用Ad-TIMP-3感染HeLa-Luc和CaSki细胞,MTT法检测Ad-TIMP-3对HeLa-Luc和CaSki细胞增殖的影响,平板克隆形成实验检测Ad-TIMP-3与X线联合应用对细胞生长能力的影响。将经过不同处理的HeLa-Luc细胞接种于裸鼠腋下,分别观察正常对照组、单独病毒组、单独放射组和联合应用组裸鼠体内肿瘤的生长情况,绘制生长曲线。结果 Ad-TIMP-3能显著抑制HeLa-Luc和CaSki细胞增殖,呈现剂量效应关系。Ad-TIMP-3与X线联合应用可显著减少HeLa-Luc和CaSki细胞平板克隆形成数(P均<0.05)。单独病毒组、单独放射组和联合应用组裸鼠移植瘤重量分别为(0.216±0.098)、(0.276±0.073)和(0.044±0.043)g,均明显低于正常对照组的(0.534±0.218)g(P均<0.05),联合应用组明显低于单独病毒组和单独放射组(P均<0.05)。单独病毒组、单独放射组和联合应用组的抑瘤率分别为59.60%、48.30%和91.80%。结论 Ad-TIMP-3能抑制子宫颈癌细胞增殖,与X线联合应用可显著提高子宫颈癌细胞对放射治疗的敏感性,抑制子宫颈癌细胞体内致瘤能力。

白细胞介素-1β对人冠脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶系统分泌平衡的影响

目的：研究白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）对人冠状动脉平滑肌细胞（human coronary artery smooth muscle cell,HCASMC）基质金属蛋白酶3（matrix metalloproteinase3,MMP-3）金属蛋白酶组织抑制因子1（tissue inhibitor of metallopro-teinase1,TI MP-1）分泌平衡的影响。方法：培养HCASMC,至第5-7代时,分别加入20μg·L^-1和0μg·L^-1IL-1β（0μg·L^-1组设为对照组）,均分别孵育2h、4h、8h、24h、36h后,收集细胞培养液上清;采用IL-1β（0、5、20、40μg·L^-1）刺激HCASMC6h后分别收集细胞和细胞培养液上清。采用ELISA法检测细胞培养液上清内MMP-3及TI MP-1的表达量。结果：IL-1β组MMP-3,TI MP-1的表达量在2h时开始增加,并随时间的延长而不断增加,MMP-3/TI MP-1在2h开始升高,8h达到顶峰,后缓慢下降;随IL-1β剂量增加,MMP-3和TI MP-1的表达量、MMP-3/TI MP-1均不断升高。结论：IL-1β可造成HCASMC分泌不稳定斑块标记物MMP-3、TI MP-1及MMP-3/TI MP-1的升高,说明炎症可能是急性冠状动脉综合征发生发展的机制之一。

人肝细胞癌金属蛋白酶组织抑制因子-3的表达及与其基因启动子甲基化的关系

目的 探讨肝细胞癌的发生和门脉浸润机制。方法 20例肝细胞癌患者,每例在手术后分别取原发瘤、门脉瘤栓及远离肝癌之肝组织。用Western印迹法检测金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIMP-3 mRNA的表达,用甲基化特异性PCR检测TIMP-3基因启动子的甲基化。结果 远离肝癌之肝组织中均可见TIMP-3蛋白和mRNA的表达,原发瘤和门脉瘤栓组织TIMP-3蛋白和mRNA表达明显降低,其中分别有5例和6例完全丢失。远离肝癌之肝组织均未发现TIMP-3启动子甲基化。原发瘤中有7例、门脉瘤栓组织中有9例出现甲基化。所有有甲基化的肝癌组织,包括原发瘤和门脉瘤栓,有13例TIMP-3 mRNA和蛋白表达完全丢失,6例表达降低。TIMP-3启动子甲基化和肝细胞癌组织学分级无关(P>0.05)。结论 肝细胞癌的发生和门脉浸润与TIMP-3基因和蛋白缺失或降低相关、而TIMP-3启动子甲基化是其基因和蛋白缺失或降低的原因。

组织金属蛋白酶抑制因子3重组蛋白诱导小鼠成骨细胞MC3T3-E1凋亡

目的研究组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)重组蛋白对MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响。方法细胞存活率和凋亡分别用MTT及ELISA检测。Fas,FasL,Bcl-2,Bax,caspase-3,caspase-8,细胞色素c的表达以及JNK,p38,细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的磷酸化水平用Western印迹检测。结果MTT及ELISA检测提示TIMP-3降低MC3T3-E1细胞存活率,诱导MC3T3-E1细胞凋亡。TIMP-1增加Fas、FasL蛋白表达,对Bax、Bcl-2蛋白表达无影响,但可诱导细胞色素c的释放及caspase-8、caspase-3的活化。TIMP-3促进p38和ERK磷酸化,而PD098059(ERK阻断剂)和SB203580(p38阻断剂)消除p38和ERK的促凋亡作用。结论TIMP-3诱导MC3T3-E1细胞凋亡的信号途径为凋亡受体Fas介导,并有p38、ERK信号转导途径参与。