N-甲基-D-门冬氨酸受体与使君子酸受体在培养海马神经元树突上的膜表面表达与共定位

目的 研究含NR2B亚单位的N 甲基 D 门冬氨酸 (NMDA)受体 (NR2B NMDAR)与含GluR1亚单位的使君子酸 (AMPA)受体 (GluR1 AMPAR)在发育不同阶段的培养海马神经元树突上的膜表面表达与共定位。 方法 以FLAG NR2B和GFP GluR1表达载体共转染原代培养第 5d(DIV5 )的大鼠海马神经元 ,分别用相应特异性抗体和荧光标记二抗作活细胞染色 ,显示膜表面表达的受体簇。 结果 对DIV7和DIV14的培养海马神经元树突表面受体簇计数 (个数 10 0 μm) ,GluR1 AMPAR受体簇分别为 5 9 2± 5 6和 74 8± 3 1(P <0 0 5 ) ;NR2B NMDAR为 38 7±3 5和 80 8± 4 9(P <0 0 1) ;两者共定位为 16 3± 5 2和 4 0 1± 6 0 (P <0 0 1)。DIV14海马神经元 4 0 %的共定位受体簇分布在树突棘上。 结论 随着海马神经元的发育 ,树突膜表面NR2B NMDAR、GluR1 AMPAR及两者共定位受体簇密度均增加 ,提示 ,形成更多具有活性的兴奋性突触 ,且主要位于树突棘上。

海人酸、使君子酸致Huntington病鼠纹状体NOS阳性细胞的变化

为了研究海人酸和使君子酸对大鼠纹状体 NOS阳性细胞的影响 ,用神经毒海人酸、使君子酸破坏大鼠左侧尾壳核 ,将夜间活动超过 6 0 0次、主动回避试验阳性率在 35 %以下的大鼠作为成功的 Huntington舞蹈病模型。注射后 2个月 ,将动物脑切片进行 Nissl、NADPH-d组化和 GF AP免疫组化反应。结果表明 ,海人酸和使君子酸均可使纹状体 n NOS阳性神经元丢失、出现i NOS阳性胶质细胞和侧脑室扩大 ,两者无显著差异。在损伤中心区 n NOS阳性神经元减少甚至消失 ,但这种变化自中心向周围呈渐变趋势 ;i NOS阳性胶质细胞呈两种不同形态 :一类胞体略大而突起粗短 ,一类胞体小而突起相对较长。对侧纹状体及伤侧纹状体非损毁部均未见 NOS阳性胶质细胞 ;NADPH-d组化和 GFAP免疫组化双重反应表明一些 i NOS胶质细胞为 GFAP阳性胶质细胞。本研究提示 ,海人酸和使君子酸均可使纹状体 n NOS神经元减少消失 ,损毁区出现的 NOS阳性胶质细胞为诱导型神经胶质细胞 (i NOS)。海人酸和使君子酸所引起的

使君子氨酸及其受体的研究进展

使君子氨酸及其受体的研究进展张丽慧，张士善（杭州医学高等专科学校药理教研室，浙江３１００１２）使君子氨酸（Ｑｕｉｓｑｕａｌｉｃａｃｉｄ，ＱＡ）是从使君子科植物使君子种子中分离出来的化合物。７０年代以来，ＱＡ作为一种兴奋性氨基酸在中枢神经系统的作用引起...

使君子炮制前后主成分含量分析

以水浸物、水浸物及煎剂中使君子酸钾、脂肪油含量为指标,对使君子不同入药部位及炮制品进行了含量分析比较。证明三种主成分种仁高于果实一倍以上。随炮制温度升高,水浸物及其中使君子酸钾含量有不同程度的降低,但炮制适中,水煎两次使用可使果实中使君子酸钾及脂肪油含量呈增高趋势,有利于提高疗效。

柱前衍生-高效液相色谱法比较使君子果实与种仁炮制前后使君子氨酸的含量

目的:建立柱前衍生-高效液相色谱法测定使君子中驱虫活性成分使君子氨酸含量的方法,并比较果实与种仁炮制前后使君子氨酸的含量差异。方法:采用2,4-二硝基氯苯对使君子氨酸进行衍生,Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),0.2%磷酸盐水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,柱温为30℃,检测波长为360 nm,进样量为10μL。结果:使君子氨酸在3.2~420.0μg/mL范围内呈现良好线性关系(r=0.999 7),使君子氨酸的平均加样回收率为101.95%(RSD=2.21%,n=9)。15批市售使君子药材不同入药部位及炮制前后的使君子氨酸含量结果显示果实中的使君子氨酸含量均低于种仁,加热炮制后使君子氨酸含量呈下降趋势。结论:该检测方法简便、快速、准确,为完善使君子的质量评价标准提供了参考,也为其入药部位及制法的合理选用提供了依据。

海仁酸致痫大鼠海马组织AMPA受体GluR2表达的变化

目的 为了研究AMPA受体在癫痫发生中的作用。方法 本研究用免疫组织化学方法观察了海仁酸致痫大鼠海马组织AMPA GluR2受体的表达变化。结果 在侧脑室注射海仁酸后 1h ,4h ,12h ,2 4h及 7d ,大鼠海马CA3区及齿状回GluR2的表达明显减弱 ,显微图像分析 :与对照组相比 ,KA 4h ,KA 12h ,KA 2 4h ,KA 7d组大鼠海马组织GluR2阳性神经元平均光密度值降低 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 在癫痫发作过程中AMPA受体 GluR2亚单位表达改变可能与癫痫发作导致的神经元损伤有密切关系。

基于UHILIC-MS/MS和NIRS法的使君子仁中2个生物碱成分的含量测定研究

目的:建立超高效亲水作用色谱串联三重四极杆质谱(UHILIC-MS/MS)法同时测定使君子仁中胡芦巴碱与使君子氨酸的含量,并建立其近红外光谱法(NIRS)快速定量模型,为使君子仁的质量控制提供新的技术手段。方法:采用UHILIC-MS/MS法,MRM正负切换离子模式进行含量测定,色谱条件为Waters ACQUITY BEH HILIC Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.20 mL·min^(-1),柱温为45℃;扫描使君子仁粉末近红外光谱,在1000~1799 nm的波长范围内以10 cm^(-1)的分辨率获取每个光谱,采集方式漫反射,并运用偏最小二乘法(PLS)构建这2个成分的定量模型。结果:使君子仁中胡芦巴碱与使君子氨酸在5.20~260和8.50~425 ng·mL^(-1)浓度范围,呈良好的线性关系(r>0.9993),回收率分别为101.6%和100.2%,RSD分别为1.3%和2.0%;90批使君子仁所建立的模型NIRS预测值具有良好的线性关系(R分别为0.9769、0.9776),胡芦巴碱与使君子氨酸校正相关系数(Rc)分别为0.9770和0.9718,预测相关系数(Rp)分别为0.9553和0.9464,校正标准偏差(RMSEC)分别为0.3739和0.2848,预测标准偏差(RMSEP)分别为0.4902和0.3635。利用10批建模外使君子仁样品对模型进行验证,胡芦巴碱与使君子氨酸NIRS预测值与实测值的平均相对偏差分别为0.242%和0.252%。结论:本研究首次基于UHILIC-MS/MS建立使君子仁中胡芦巴碱与使君子氨酸的含量测定方法,快速、高效,首次构建使君子仁的胡芦巴碱和使君子氨酸近红外定量模型,定量准确,高效无损,可用于使君子仁的快速检测分析,为使君子仁的质控提供新的技术手段。

使君子氨酸的酶法提取工艺研究

【目的】本文为提高使君子氨酸的提取收率并探讨使君子粗提液的酶解工艺,研究了本实验室筛选的J6菌所产蛋白酶对使君子粗提液的酶解特性。【方法】将J6菌所产蛋白酶在不同时间、p H及温度情况下分析蛋白酶对使君子粗提液中使君子氨酸含量的影响。【结果】在使用蛋白酶为5000U/ml,温度为20℃,p H10.0,酶解时间为24小时的条件下酶解得到的使君子氨酸含量最高,能有效提稿游离使君子氨酸含量达20%。【结论】J6菌所产蛋白酶促进了使君子的水解,加速了使君子氨酸的游离,可望将该菌所产蛋白酶用于使君子氨酸的粗提工艺中。

Neuroliginl与突触活动的相互作用

背景Neuroliginl是突触细胞黏附分子（synaptic cell adhesion molecules，SynCAM）的一种，与Neurexinlβ及突触后膜致密蛋白95（postsynaptic density protein95，PSD．95）相结合形成跨突触复合物，这一跨突触信号可以中介使君子酸（a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionate，AMPA）受体亚基突触靶向和突触前囊泡释放，在学习、记忆和疼痛中均具有重要作用。目的对Neuroliginl与突触活动的相互作用进行回顾与总结。内容NeuroliginI可通过调节AMPA受体、N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-asparticacid，NMDA）受体的突触靶向来参与到突触活动中；相应的，突触活动也能诱导Neuroliginl的裂解和磷酸化，使突触活动趋于平衡。趋向通过下调Neuroliginl的表达或干扰其与PSD-95蛋白或Neurexin1β的相互作用，可间接抑制AMPA受体的功能，是未来疼痛治疗的研究方向。