致敏小鼠调节性T细胞对其致敏水平及免疫功能的影响

【目的】探讨致敏小鼠调节性T细胞对其致敏水平及免疫功能的影响。【方法】免疫磁珠法从致敏小鼠脾细胞中分选出CD4+CD25+Treg细胞,流式细胞术检测分选后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3基因的表达。实验分组:正常对照组、致敏对照组和输注组,输注组以不同方式向致敏小鼠体内输注CD4+CD25+Treg(5×105/只·次),流式检测在处理后的第21天检测各组血清中与供者反应性抗体结合的供者脾脏细胞百分比、CD4+CD25+Treg、记忆性T细胞和效应性T细胞的比例。ELISA法检测各组小鼠血清中Th1类细胞因子(IFN-r、IL-2)和Th2类(IL-4、IL-10)细胞因子水平。【结果】分选出CD4+CD25+Treg细胞纯度平均达到87%,细胞活性大于97%,高表达Foxp3基因。致敏对照组的CD4+CD25+Treg细胞、记忆性T细胞、效应性T细胞和血清IFN-r水平较正常对照组升高,致敏对照组的血清IL-4、IL-10水平较正常对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05);输注组CD4+CD25+Treg、记忆性T细胞比例、血清IL-4、IL-10水平较致敏对照组高;输注组效应性T细胞比例、血清IFN-r水平较致敏对照组低,且差异有统计学意义(P<0.05)。输注组小鼠血清中与供者反应性抗体结合的供者脾脏细胞百分比与致敏对照组的比较,差异无统计学意义(P>0.05)【结论】成功分选出致敏后的调节性T细胞,致敏促使免疫细胞免疫记忆,Th1细胞活化增强,Th2细胞活化受到抑制。向致敏动物体内输注CD4+CD25+Treg可降低细胞免疫,诱导Th1/Th2细胞因子向Th2偏移,但供者反应性抗体水平未降低。

致敏血清干扰小鼠骨髓移植的作用研究

目的:研究致敏血清在小鼠骨髓移植中的作用,明确抗体介导的移植排斥作用。方法:在移植前1天将200μl致敏血清或非致敏血清注射到正常BALB/c小鼠中,移植受者经致死量照射后回输1×107 C57BL/6小鼠的骨髓细胞。应用补体依赖淋巴细胞毒性方法检测移植前受者的供者反应性抗体,并观察移植后受者的生存情况及植入分析。结果:致敏血清输注可促使供者反应性抗体存在于受者体内。骨髓移植后,接受致敏血清输注的受者80%于10天左右均死于骨髓衰竭,而接受非致敏血清输注的受者能长期存活。植入分析表明接受致敏血清输注的受者在移植后其血象及骨髓细胞随时间推移进行性下降,且供者细胞的嵌合百分比也进行性减少;与接受非致敏血清输注组相比,两组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:致敏血清能介导小鼠的骨髓移植排斥,其中供者反应性抗体介导的体液免疫发挥重要作用。