供者来源性细胞游离DNA在肾移植诊疗中的研究进展与应用

肾移植术后排斥反应的早期诊断及治疗对于减少移植物损伤至关重要。供者来源性细胞游离DNA(dd-cfDNA)检测是基于二代测序等技术,通过浓度法及绝对定量法检测循环体液中源于坏死、凋亡的供肾组织DNA片段含量,具有监测同种异体移植物损伤的临床应用潜力。相比传统血清肌酐等检测指标,dd-cfDNA检测可提前数周至数月监测到移植物损伤,为临床治疗和延缓移植物失功提供了“时间窗”。随着近年来对ddcfDNA研究的不断深入,dd-cfDNA因其兼具无创性、灵敏度高和能够对治疗效果进行实时评估等特点受到广泛关注。本文综述了目前有关dd-cfDNA检测在肾移植诊疗中多维度应用的研究证据与结论,并讨论了dd-cfDNA未来的研究和临床应用方向,旨在为dd-cfDNA检测广泛应用于我国的临床实践提供参考依据。

供体来源细胞游离DNA在移植肾损伤监测应用中的研究进展

供体来源细胞游离DNA(donor-derived cell-free DNA, dd-cf DNA)是指供体细胞凋亡或坏死后释放到体液中的游离DNA,近年来成为了监测移植物损伤的新兴生物标志物之一。本文从供体来源细胞游离DNA的相关临床研究报道进行综述,较全面的总结了供体来源细胞游离DNA的临床应用现状,为其合理使用提供理论参考依据。

优化的供者来源细胞游离DNA检测方法的初步运用

目的报道一种根据中国人群单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)特点优化后的,供者来源细胞游离DNA(donor derived cell-free DNA,dd-cfDNA)检测方法在肾移植中的初步运用。方法使用优化选择的8个SNP位点所形成的dd-cfDNA检测试剂盒(Panel HX-8)检测保存的同种异体肾移植受者的血样,并回顾性分析了受者的临床资料。根据围术期肾功能恢复情况将受者分为5组:移植物功能迅速恢复(immediate graft function,IGF)、移植物功能缓慢恢复(slow graft function,SGF)、移植物功能延迟恢复(delayed graft function,DGF)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)反弹(creatinine elevation,CE)以及发生抗体介导排斥反应(active antibody-mediated rejection,ABMR)。结果87例受者的总计330份围术期血样被检测。在其中的84例受者中,IGF组(n=73)的Scr和dd-cfDNA均呈指数型下降,Scr在术后第7天(postoperative day 7,POD7)达到谷平台值(116.2±33.7)μmol/L,而dd-cfDNA在POD5提前达到了谷平台值0.8%±1.5%。SGF组(n=4)和DGF组(n=2)POD1的dd-cfDNA均高于IGF组(28.5%±38.8%比4.0%±3.3%,P=0.003;9.9%±1.8%比4.0%±3.3%,P=0.083)。CE组的平均Scr从(118.6±22.0)μmol/L(POD7)上涨到了(150.8±25.9)μmol/L (POD12),而平均dd-cfDNA则是更早的从1.4%±0.9%(POD5)上涨到了5.4%±9.6%(POD7)。另外3例受者发生ABMR,治疗前后平均dd-cfDNA为4.2%±2.0%比0.6%±0.1%(P=0.399)。结论 Panel HX-8法检测dd-cfDNA的临床实用性高,且dd-cfDNA可能比Scr更能敏感地反映移植肾健康状况。将Panel HX-8在临床上的广泛应用有待后续研究,以进一步明确检测肾移植受者dd-cfDNA的临床价值。

小细胞肺癌血浆中游离性DNA的3p位点杂合性缺失

目的 研究小细胞肺癌 (Smallcelllungcancer ,SCLC)患者血浆游离性DNA的 3p位点的杂合性缺失 (Lossofheteroxygosity ,LOH)在SCLC诊断中的价值。方法 用PCR 银染法对 3 3例SCLC患者的病理组织及血浆标本中三个位点微卫星 ( 3p14、3p2 1、3p2 5 )杂合性缺失的情况。结果 3 3例病理组织标本LOH的发生率为 5 4.5 % ( 18 3 3 ) ,血浆游离DNA同时发生LOH的百分率为 42 .4% ( 14 3 3 ) ;二者相关性为 77.8% ( 14 18)。结论 SCLC患者血浆游离DNA来自于肿瘤组织 ,其 3p部位的LOH在诊断中有一定的价值。

供体来源细胞游离DNA在肾移植中的研究

肾移植是终末期肾病有效治疗手段。移植物损伤是影响移植物存活的主要因素。常用方法如监测血清肌酐、尿蛋白及移植肾活检等,存在迟滞性,不确定性及有创性。供体来源细胞游离DNA(donor-derived cellfree DNA,dd-cfDNA)是一种源于供体的碎片化、可降解DNA片段。现有研究发现,dd-cfDNA在移植肾损伤监测、移植物排斥鉴别、免疫抑制方案调整等方面发挥重要作用,是一种无创、可重复且灵敏度高的新型生物标志物。本文就近年来dd-cfDNA在肾移植的研究进展做一综述。

血液循环游离DNA联合甲胎蛋白对肝细胞癌诊断价值的荟萃分析

目的通过荟萃(meta)分析评价循环游离DNA结合甲胎蛋白对于肝细胞癌的诊断价值。方法通过检索pubmed、web of science、Cochrane library、中国知网、中国生物医学文献数据库、维普数据库等多个数据库,检索建库至2018年5月间使用循环游离DNA结合甲胎蛋白作为诊断肝癌的文献,采用Stata 14.0软件进行分析。结果文章纳入10篇文献,包括838例HCC患者、702例非HCC患者;循环游离DNA结合AFP检测肝细胞癌的合并敏感性、特异性分别为0.80(95%CI:0.70~0.87)和0.95(95%CI:0.90~0.98),阳性似然比和阴性似然比分别为15.9(95%CI:7.6~36.6)和0.21(95%CI:0.13~0.32),诊断比值比为76(95%CI:28~228);ROC曲线下面积(AUCROC)为0.95(95%CI:0.93~0.97)。结论循环游离DNA联合甲胎蛋白对诊断肝癌具有更高的准确性,可以作为早期肝癌筛查的指标,并且定量分析比定性分析诊断准确性更高。

胰肾联合移植供者来源细胞游离DNA水平变化与术后急性排斥反应的相关研究

目的应用高通量二代测序技术检测胰肾联合移植受者血清细胞游离DNA(cf-DNA)及供者来源细胞游离DNA(ddcf-DNA)含量,探讨胰肾联合移植术后ddcf-DNA含量与急性排斥反应(AR)的关系。方法回顾性分析2019年6月至2021年6月在广州医科大学附属第二医院器官移植科行胰肾联合移植20例受者临床资料,根据术后是否并发AR将其分为对照组(10例)和AR组(10例)。采用随机数字表法选取对照组3例受者作为观察组,检测其移植前、术中移植胰腺血流开放后2 h及术后1、3、7、14、30和60 d血清ddcf-DNA水平;对照组其余7例受者分别检测其移植前及移植后14、30 d血清ddcf-DNA水平。AR组受者分别检测其术前、AR发生时和AR逆转后血清ddcf-DNA水平。组间正态分布计量资料比较采用成组t检验,计数资料比较采用Fisher确切概率法。P<0.05为差异有统计学意义。结果ddcf-DNA片段长度为110~350 bp,受者来源cf-DNA片段长度为100~420 bp。观察组3例胰肾联合移植受者分别标记为病例1、2和3,术前ddcf-DNA含量分别为0.49%、0.55%和0.32%,移植胰腺血流开放后2 h ddcf-DNA含量急剧增至12.05%、10.64%和11.05%,并达到峰值;术后第1天开始,ddcf-DNA水平呈明显下降趋势,术后30 d左右达到稳定状态。对照组和AR组受者术前ddcf-DNA含量分别为(0.71±0.09)%和(0.66±0.10)%,差异无统计学意义(t=1.126,P>0.05);AR组受者确诊排斥反应的时间为术后(17±4)d,确诊AR发生时血清ddcf-DNA含量为(5.4±2.0)%,对照组受者术后2周血清ddcf-DNA含量为(1.70±0.48)%,ddcf-DNA含量差异有统计学意义(t=-5.59,P<0.05)。AR组受者排斥反应被逆转且稳定的时间为术后(27±4)d,此时ddcf-DNA含量为(0.93±0.32)%,对照组术后第30天血清ddcf-DNA含量稳定在(0.87±0.25)%,ddcf-DNA含量差异无统计学意义(t=-0.497,P>0.05)。结论胰肾联合移植术后并发AR时受者血清ddcf-DNA含量呈明显升高趋势,当排斥反应被逆转后呈明显下降趋势。

感染性供者器官安全应用分析

目的探讨应用感染性供者器官的安全性。方法回顾性分析67例行同种异体原位肝移植术的供、受者临床资料。根据供者是否存在感染及感染部位将受者分为3组,血流感染组(供者非耐药菌感染,16例)、非血流感染组(供者血流以外部位存在感染,20例)和未感染组(31例)。比较3组受者围手术期临床指标,包括术前终末期肝病模型(MELD)评分、手术时间、无肝期、术中出血量、术中输血量;观察受者术后1、3、7、14、21 d肝功能及凝血功能恢复情况;记录受者肝移植术后1个月内的并发症发生率及病死率;观察受者术后感染指标恢复情况,包括白细胞(WBC)、中性粒细胞百分比(NE%)、降钙素原(PCT)。记录受者限制级别抗生素应用率及应用时间。结果3组受者围手术期临床指标的差异均无统计学意义(均为P>0.05)。3组受者术后各时间点的肝功能、凝血功能、并发症发生率及病死率差异均无统计学意义(均为P>0.05)。血流感染组受者术后3、7 d的NE%明显高于非血流感染组和未感染组受者(均为P<0.05),血流感染组受者术后3、7、14 d的PCT明显高于非血流感染组和未感染组受者(均为P<0.05)。血流感染组受者的限制级抗生素使用率、使用时间均明显高于或长于非血流感染组和未感染组受者(均为P<0.05)。结论在尽早应用抗生素的前提下,应用非耐药菌血流感染或其他局部感染捐献者的供肝是安全的。

非小细胞肺癌患者外周血ctDNA中EGFR基因突变检测的临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血来源于肿瘤的游离DNA(ctDNA)中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测的临床意义。方法用突变扩增阻滞系统法检测77例NSCLC患者外周血ctDNA与肿瘤组织中EGFR基因突变情况,患者用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗后1个月评价疗效,并随访患者至2018年3月。分析ctDNA中EGFR基因突变与患者临床病理参数、疗效及预后的关系。结果NSCLC患者外周血ctDNA与肿瘤组织中EGFR基因突变率、突变位点比较差异无统计学意义(P均>0.05)。外周血ctDNA中EGFR基因突变与肿瘤病理类型、吸烟史有关(P均<0.05)。外周血ctDNA中EGFR基因突变型患者的客观缓解率、疾病控制率均高于野生型患者,中位无进展生存时间长于野生型患者(P均<0.05)。结论NSCLC患者ctDNA中EGFR基因突变与肿瘤组织中EGFR基因突变具有较好的一致性;ctDNA中EGFR基因突变与肿瘤病理类型、吸烟史有关;ctDNA中EGFR基因突变患者TKI治疗效果佳,预后良。

免疫组库测序在实体器官移植中的应用

免疫组库一般指T细胞和B细胞的总称,它有着巨大的多样性,使免疫系统能够对多种抗原刺激做出反应。随着测序技术的发展,免疫组库测序可以从基因水平深入了解排斥反应发生时淋巴细胞克隆的变化,也为基于免疫组库测序的新型无创诊断技术的产生提供了可能。近年来,免疫组库测序在实体器官移植中的尝试不断增多,特别是在肾移植、肝移植、心脏移植以及移植后感染等领域。本文对以上领域中应用免疫组库测序的研究进行了综述,总结器官移植中免疫组库测序使用的现状和作为早期无创诊断排斥反应的新技术的潜力,以期为这项技术进一步发展并应用于临床提供借鉴。

供体来源细胞游离DNA鉴别移植肾急性排斥反应类型

目的探讨血浆供体来源的细胞游离DNA(donor-derived cell-free DNA,dd-cfDNA)片段在鉴别移植肾T细胞介导的排斥反应(T cell-mediated rejection,TCMR)和抗体介导的排斥反应(antibody-mediated rejection,ABMR)中的价值。方法回顾性纳入2017年12月1日至2019年7月18日在浙江大学医学院附属第一医院经肾活检确诊的移植肾急性排斥反应患者。根据2017年Banff移植肾排斥反应病理分类诊断标准将患者分为ABMR组和TCMR组,后者又分为TCMRⅠ型亚组和TCMRⅡ型亚组。采用二代测序+目标区域捕获的方法检测入选者外周血浆dd-cfDNA水平。比较两组患者人口学及临床病理指标的差异。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评价血浆dd-cfDNA和血肌酐水平对鉴别两种移植肾ABMR和TCMR的诊断价值。结果共60例移植肾急性排斥反应患者入选本研究,TCMR组42例,ABMR组18例。ABMR组患者血浆dd-cfDNA百分比较TCMR组显著升高[2.33(1.19,4.30)%比0.98(0.50,1.82)%,P=0.001];ABMR组dd-cfDNA绝对值亦较TCMR组显著升高[0.94(0.60,2.27)ng/ml比0.43(0.20,0.96)ng/ml,P=0.003]。ROC曲线分析结果显示,dd-cfDNA百分比鉴别诊断TCMR和ABMR的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.76(95%CI 0.64~0.88),阈值为1.11%,敏感性88.89%,特异性59.52%;dd-cfDNA绝对值鉴别诊断TCMR和ABMR的AUC为0.74(95%CI 0.61~0.86),阈值为0.53 ng/ml,敏感性88.89%,特异性54.76%。TCMR亚组与ABMR组血浆dd-cfDNA水平的比较结果显示,TCMR两亚组间dd-cfDNA百分比及绝对值水平的差异均无统计学意义(均P>0.05);ABMR组dd-cfDNA百分比显著高于TCMRⅠ型亚组(P=0.008)和TCMRⅡ型亚组(P=0.030)。ABMR组dd-cfDNA绝对值显著高于TCMRⅠ型亚组(P=0.003)。结论血浆dd-cfDNA水平检测对鉴别ABMR和TCMR两种排斥反应类型有辅助诊断价值。

慢性移植肺功能障碍的诊断与治疗现状

慢性移植肺功能障碍(CLAD)是影响肺移植受者远期生存的最大阻碍,代表了一系列术后移植肺功能显著且持续恶化的复杂临床表现。由于缺乏有效的早期诊断和预防策略,一半以上的肺移植受者在5年内会出现CLAD,且这一比例将在10年内提高到75%。目前没有任何药物可以完全阻止或逆转CLAD的进展。近年来,随着2019年国际心肺移植学会(ISHLT)更新了CLAD的定义、诊断和治疗,国际上对CLAD的认识有了较大提高。本文将对CLAD的综合诊断方式和潜在治疗策略进行详细总结,为CLAD发生、发展的早期监测和管理提供理论参考和见解。

山东潍坊地区29例性染色体异常的产前筛查与诊断

目的探讨孕妇血浆游离DNA高通量测序对性染色体异常检出的效果及可行性,并分析母体血清学筛查、胎儿超声筛查和孕妇高龄对胎儿性染色体异常筛检的临床价值。方法对具有产前诊断指征的7 521例单胎孕妇进行游离DNA高通量测序或羊水细胞核型进行分析。结果应用血浆游离DNA高通量测序方法筛查出性染色体异常42例,其中29例与核型分析结果一致,阳性预测值为69.05%;在29例胎儿性染色体异常孕妇中,血清学筛查异常21例,超声指标异常10例,高龄妊娠12例。结论孕妇血浆游离DNA高通量测序可用于胎儿性染色体非整倍体异常的检测,阳性预测值偏低;以母体血清学筛查、B超筛查和高龄为产前诊断指征,对胎儿性染色体异常的检出具有一定价值。

非侵入性产前诊断研究及临床应用新进展

由于环境情况不良、生育年龄延迟,出生缺陷的发病率在升高。非侵入性产前诊断是研究热点。通过分离母体血中胎儿细胞、经宫颈收集胎儿细胞,由母体血清中提取胎儿游离DNA及mRNA可对染色体异常疾病、基因异常疾病及RhD血型进行的产前诊断称之为非侵人性产前诊断（non—invasiveprenataldiagnosis，因该检查手段并非完全无创，故认为非侵入性产前诊断更为合适）。

心脏移植的发展现状和新挑战

心脏移植是终末期心力衰竭患者的首选治疗。供者不足一直以来都是限制心脏移植数量增长的主要问题,随着新技术的不断更新和引入,供者池被不断扩大,比如使用年龄较大的供者、丙型肝炎病毒感染的供者、毒品过量致死的供者或心脏死亡器官捐献(DCD)供者的心脏等。与此同时,高龄、多器官功能不全、机械循环支持及人类白细胞抗原抗体致敏受者的比例近几年明显增加。供者数量的不足、受者状况的复杂化、免疫抑制治疗的个体化管理和远期移植物血管病的防治等都是心脏移植领域面临的挑战。本文通过概述现今全球在扩大供者库、提高受者质量、加强排斥反应的诊治和心脏移植物血管病变的预防等方面的新进展,以期有助于改善在等待或已经接受心脏移植的终末期心力衰竭患者的生存时间和生活质量。

肾移植新兴生物标志物之研究进展

宿主对移植器官的免疫反应复杂多样,能否利用生物标志物解释移植物免疫反应的复杂性和疾病损伤的程度至关重要。传统的生物标志物如估算肾小球滤过率、免疫抑制药血药浓度等在精准识别移植肾免疫性和非免疫性损伤方面缺乏灵敏度和特异度。移植肾活组织检查虽然是目前诊断术后并发症的“金标准”,但是存在有创和费用昂贵等缺点。新兴生物标志物在移植肾亚临床损伤的无创诊断、治疗反应的预测和免疫抑制方案的个体化调整方面具有潜在优势。本文综述了肾移植领域近年来已经进入和有希望进入临床应用的新兴生物标志物,包括血液、尿液和组织生物标志物,并分析了其应用范围和效果,以期能促进有前景的新兴生物标志物更好地、合理地应用于临床。

器官移植术后供体来源细胞游离DNA监测的研究进展

器官移植是治疗终末期器官疾病的唯一治愈手段。器官移植术后患者需要接受长期的免疫抑制治疗并适时调整免疫抑制剂方案以维持移植物功能稳定。供体来源细胞游离DNA（donor-derived cell-free DNA，ddcfDNA）是一种来源于移植器官细胞的游离胞外DNA。器官移植术后，ddcfDNA可在受体血液、尿液中检测到。研究发现ddcfDNA含量在器官移植术后患者发生急性排斥反应时甚至经活组织检查诊断数周前已发生实质性增高，表明其作为一种非侵入性、早期诊断移植物损伤的生物标记物具有较高的临床应用价值。本文将结合已有的相关研究对ddcfDNA在移植物监测中的应用进展作一综述。

分子生物学技术在人巨细胞病毒流行病学中的应用

近年来,分子生物学技术的长足发展,已使其渗透到生命科学的各个领域。尤其是分子克隆,核酸杂交、限制性内切酶图谱分析及多聚酶链反应等技术的不断深入,使该技术不仅用于感染性疾病的诊断、抗病毒治疗效果的观察,而且也用于某些病毒的快速、特异性检测。同时促进了传染性疾病的分子流行病学研究。

单倍体造血干细胞移植联合供者来源的细胞因子诱导的杀伤细胞治疗自体造血干细胞移植后复发的血液恶性肿瘤

目的 观察单倍体造血干细胞移植联合供者来源的细胞因子诱导的杀伤细胞治疗自体干细胞移植后复发的血液恶性肿瘤的疗效.方法 1例急性髓性白血病患者及1例T淋巴母细胞淋巴瘤/急性T淋巴细胞白血病患者经过常规化疗方案、自体移植后复发,对其实施单倍体造血干细胞移植.同时采集供者外周血单个核细胞在IFN-γ、IL-2、CD3单克隆抗体的刺激下进行体外培养,获得细胞因子诱导的杀伤细胞,反复多次回输给患者.结果 例患者造血重建过程顺利,移植过程中患者出现出血性膀胱炎.多次输注细胞因子诱导的杀伤细胞后,患者出现局限性慢性移植物抗宿主病,骨髓持续完全缓解.结论 供者来源的细胞因子诱导的杀伤细胞主要的效应细胞是CD3＋CD56＋细胞,CD8＋细胞和干扰素-γ.它可以在单倍体造血干细胞移植后有效地清除微小残留病灶,延长无病生存期,而不加重移植物抗宿主病程度,值得进一步研究.