化疗联合改良供者淋巴细胞输注并阿扎胞苷维持治疗异基因造血干细胞移植术后复发患者长期缓解1例并文献复习

供者淋巴细胞输注(donor lymphocyte infusion, DLI)通过诱导移植物抗白血病(GVL)作用,是目前治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发患者有效的策略之一。本文报道了一例14岁CMML移植后血液学复发患者,接受了CAG方案(注射用盐酸阿柔比星、注射用盐酸阿糖胞苷、G-CSF)化疗后联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的改良供者淋巴细胞输注(mDLI)治疗,并在MRD转阴后给予阿扎胞苷(AZA)维持治疗获得了长期缓解。

维奈克拉联合阿扎胞苷加供者淋巴细胞输注治疗髓系肿瘤异基因造血干细胞移植后复发的临床疗效及安全性分析

目的分析维奈克拉(VEN)联合阿扎胞苷(AZA)加供者淋巴细胞输注治疗髓系肿瘤异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的临床疗效及安全性。方法回顾性分析2018年9月至2022年6月在广西医科大学第一附属医院接受allo-HSCT后复发,并接受VEN+AZA+供者淋巴细胞输注(DLI)挽救性治疗的8例急性髓系白血病(AML,5例)和骨髓增生异常综合征(MDS,3例)患者的临床资料,评价其治疗效果、并发症及生存状态。结果8例患者中男女各4例,中位年龄为31(15~64)岁。allo-HSCT后复发的中位时间为316(77~1099)d,接受VEN+AZA挽救性治疗的中位时间为10(4~25)d,中位疗程为3.5(1~6)个。5例患者接受第1次VEN+AZA+DLI治疗后达到完全缓解(CR)/血细胞计数未完全恢复的完全缓解(CRi),1例患者在第2疗程联合达雷妥尤单抗治疗后获得CR。2例患者接受首次治疗后仍为未缓解(NR)。中位随访时间为429(40~746)d。8例患者中4例存活(均为首次治疗后即获得并持续CR/CRi的患者);4例死亡,其中3例因疾病进展死亡[2例为AML,1例为治疗相关性骨髓增生异常综合征(t-MDS)],1例AML患者因肺部感染导致呼吸衰竭死亡。中位生存时间为429(40~746)d,预计2年总生存率为41.67%。结论VEN+AZA+DLI治疗allo-HSCT后复发的髓系肿瘤有效,耐受性良好。

非清髓性移植后供者淋巴细胞输注治疗血液病的疗效观察

【目的】研究非清髓性造血干细胞移植治疗血液病和供者淋巴细胞输注的疗效及并发症。【方法】以抗淋巴细胞球蛋白(anti-T-lymphocyteglobulin,ALG)或抗胸腺细胞球蛋白(anti-themocyteglobulin,ATG)为基础,减量化疗的非清髓性预处理方案治疗血液病6例,包括急性淋巴细胞白血病1例、多发性骨髓瘤2例、慢性粒细胞白血病1例、急性髓细胞白血病1例、骨髓纤维化1例,6例血液病于+28d～+30d进行第1次供者淋巴细胞输注,每隔3～4周1次,平均4.2(2～8)次,逐渐增加输注细胞数量,输注的T细胞数由(1.2～9.5)×104/kg逐渐增加至(0.75～2.15)×108/kg。【结果】移植早期均形成混合性嵌合体和血液学部分缓解(1例进步),供者淋巴细胞输注后,6例血液病中4例逐渐形成供者型完全嵌合体,并达到血液学完全缓解,骨髓纤维化患者仍然为混合性嵌合体和进步状态,并发急性移植物抗宿主病2例,慢性移植物抗宿主病2例,骨髓抑制2例,1例死于严重感染。【结论】以ATG/ALG为基础的非清髓性造血干细胞移植,可实现异基因造血干细胞的成功植入。通过供者淋巴细胞输注可实现混合性嵌合体向供者完全嵌合体的转变;移植物抗宿主病和骨髓抑制为其主要并发症。

非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究

本研究目的是探讨经受者皮肤致敏后的异基因供者淋巴细胞输注(DLI)是否能在促进形成完全供者嵌合(CC)的同时减轻移植物抗宿主病(GVHD)。以C57BL/6小鼠(H-2b,B6)为受者,于第0天接受60Coγ线全身照射(TBI),总剂量为5.5Gy,照射当天移植经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后的BALB/c小鼠(H-2d,BA)外周血干细胞(2×107个),移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于移植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示,致敏后DLI的受鼠(黑色)无1例出现GVHD,60天时转变为完全供者嵌合,表型明显呈现为供鼠(白色)特征,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降,半月后有所升高,但仍低于正常水平;未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD,嵌合率稍有上升,仍表现为混合嵌合体(MC),CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高,后期降至正常水平。结论:经受者皮肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率,CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。

混合造血干细胞移植后输注供者淋巴细胞和白细胞介素2对急性髓性白血病疗效的影响

目的:观察急性髓性白血病经混合造血干细胞移植后,应用供者淋巴细胞输注+白细胞介素2治疗的效果,并与移植后未经特殊治疗的效果进行比较。方法:①选取2000-01/2004-07解放军兰州军区兰州总医院全军血液病中心收治的19例急性髓性白血病患者,实验经医院伦理委员会批准,患者均知情同意。随机数字表法分为两组:观察组8例,年龄17～40岁,M2a 4例,M4 1例,M5a 3例;对照组11例,年龄19～39岁,M2a 2例,M3a 2例,M4 3例,M5a 4例。②两组患者采用化疗联合重组人粒细胞集落刺激因子的方法动员自体外周血造血干细胞,采集后液氮中保存5d备用。③术前采用直线加速器对患者全身及肺部照射,预处理完毕后实施混合造血干细胞移植。首先回输自体单个核细胞中位数为4×108/kg,CD34+细胞中位数为6.2×106/kg,粒-巨噬祖细胞集落形成单位中位数为5.8×104/kg。间隔1～6h后,采集人类白细胞抗原半相合异体骨髓,按回输自体单个核细胞数的1/6～1/10输注给患者。④两组患者移植期间均住无菌层流病房,给予相应并发症的防治及支持治疗。在粒细胞降至0时注射重组人粒细胞集落刺激因子150μg/12h,促进造血恢复。观察组给予供者淋巴细胞输注+白细胞介素2治疗,每次采集的供者淋巴细胞中,CD3+淋巴细胞中位数为1.43×108/kg,CD4+细胞中位数为0.97×108/kg,CD8+细胞中位数为0.41×108/kg,中位治疗次数4(1～7)次,回输后即开始应用100wu/d重组人白细胞介素2,共10d。对照组混合造血干细胞移植后未给予特殊治疗。结果:19例急性髓性白血病患者均进入结果分析。①造血恢复:两组患者均获得造血重建,术后4～9d粒细胞均降至0,12～17d粒细胞达0.5×109L-1,16～21d白细胞达4.0×108 L-1,19～23 d血小板达20×108 L-1。16～21 d骨髓检查示恢复期骨髓象。②术后并发症:两组患者不同程度地出现口腔溃疡,随着造血恢复,7～10d溃疡消失。观察组1例患者出现出血性膀胱炎,两组各2例患者出现发热。无肝静脉闭塞病和移植物抗宿主病发生。③嵌合体形成:观察组中1例M4患者形成嵌合体,对照组中2例M4患者与1例M5患者形成嵌合体,嵌合体持续存在3～12个月。④供者淋巴细胞输注+白细胞介素2疗效:观察组中有1例M2a患者在接受2次特殊治疗后7个月复发死亡;1例M2a患者接受2次特殊治疗后1年出现骨髓增生异常综合征,脑出血死亡,1例M5a患者应用特殊治疗1次后出现不明原因高热、抽搐,死于癫痫持续状态,其余5例患者随访2年均健康存活,长期生存率为62.5%(5/8)。对照组有2例M2a患者、2例M4患者、1例M5患者于移植后1～7个月复发死亡,1例M3患者于移植后25d死于脑出血,其余2例M3患者、2例M4患者、1例M5患者随访2年均健康存活,长期生存率为45.4%(5/11)。结论:混合造血干细胞移植后应用供者淋巴细胞输注+白细胞介素2治疗,急性髓性白血病患者均获得造血重建且无移植物抗宿主病发生,其长期生存率有效提高。

不同途径的供者淋巴细胞输注对移植物抗宿主病的影响

目的:观察髓腔内供者淋巴细胞输注(IBM-DLI)对异基因小鼠外周造血干细胞移植(allo-PBSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法:雌性C57BL/6小鼠为受鼠,接受全身照射(TBI)预处理后,输注雄性BALB/c小鼠来源的经rhG-CSF动员后的外周造血干细胞,分别经尾静脉(IV)和髓腔内进行DLI,建立异基因GVHD模型,观察移植后小鼠的生存状态和GVHD发生情况,应用流式细胞仪检测受鼠体内嵌合体形成和CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)比例,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFNγ-)水平。结果:IBM-DLI组的受鼠GVHD发生比例和严重程度较IV-DLI组明显降低(P<0.01);移植后第7天各组受鼠骨髓中供鼠来源的细胞比例均在95%以上;与IV-DLI组比较,脾细胞中Tregs比例在IBM-DLI组明显升高(P<0.01),IBM-DLI组IL-4分泌增多,IFNγ-分泌减少(P<0.01)。结论:与IV-DLI相比,IBM-DLI有利于减轻GVHD的发生,其机制可能与受鼠体内Tregs细胞比例增高以及Th细胞向Th2细胞分化有关。目的:观察髓腔内供者淋巴细胞输注(IBM-DLI)对异基因小鼠外周造血干细胞移植(allo-PBSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法:雌性C57BL/6小鼠为受鼠,接受全身照射(TBI)预处理后,输注雄性BALB/c小鼠来源的经rhG-CSF动员后的外周造血干细胞,分别经尾静脉(IV)和髓腔内进行DLI,建立异基因GVHD模型,观察移植后小鼠的生存状态和GVHD发生情况,应用流式细胞仪检测受鼠体内嵌合体形成和CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)比例,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平。结果:IBM-DLI组的受鼠GVHD发生比例和严重程度较IV-DLI组明显降低(P<0.01);移植后第7天各组受鼠骨髓中供鼠来源的细胞比例均在95%以上;与IV-DLI组比较,脾细胞中Tregs比例在IBM-DLI组明显升高(P<0.01),IBM-DLI组IL-4分泌增多,IFN-γ分泌减少(P<0.01)。结论:与IV-DLI相比,IBM-DLI有利于减轻GVHD的发生,其机制可能与受鼠体内Tregs细胞比例增高以及Th细胞向Th2细胞分化有关。

小鼠非清髓外周造血干细胞移植后供者淋巴细胞输注的实验研究

目的:探讨受者皮肤致敏后的供者淋巴细胞输注对受者嵌合状态的影响及供者嵌合比率与混合淋巴细胞反应(MLR)和受者重建的T细胞亚群间的关系。方法:受鼠C57BL/6小(H-2b)第0天接受X射线全身照射,4小时内移植经rhG-CSF动员后的BALB/c小鼠(H-2d)外周血干细胞2×107个,第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106个。结果:移植后第21天模型组小鼠PCR检测结果均呈混合嵌合(MC)状态;致敏后DLI的受鼠60天时转变为完全供者嵌合(CC),CD4+/CD8+T淋巴细胞比值早期下降,60天时有所升高,仍略低于正常水平,MLR呈现供者特异性低反应性;未致敏的DLI受鼠嵌合率虽稍有上升,仍为MC,CD4+/CD8+比值早期升高,后期降至正常水平,MLR供者反应性亦有所下降。结论:经rhG-CSF动员后可以成功建立非清髓性allo-PBSCT小鼠MC模型;经受者皮肤致敏后的DLI能够诱导稳定的CC,高比率嵌合与供者CD4+/CD8+比值下降及MLR的特异性免疫低反应性间具有良好相关性。

非清髓性造血干细胞移植加供者淋巴细胞输注治疗多发性骨髓瘤1例报告并文献复习*

目的:研究非清髓性造血干细胞移植(NST)治疗多发性骨髓瘤(MM)的疗效,观察移植相关并发症的发生。方法:1例42岁MM患者,供者为其胞姐,HLA配型完全相合。动员方案:粒细胞集落刺激因子(G CSF)10μg·kg-1·d-1×5 d。预处理方案:抗胸腺细胞球蛋白(ATG)8 mg·kg-1 ·d-1 ×3 d,马法兰(MEL)120 mg/m2×1 d。移植单个核细胞数(MNC)6.5×108/kg;CD34+ 细胞4.4×106/kg。环胞菌素A(CsA)和短程甲氨蝶呤(MTX)预防移植物抗宿主病(GVHD)。移植后分别于+41 d、+76 d和+112 d进行3次供者淋巴细胞输注(DLI)。结果:移植后15 d中性粒细胞计数>0.5×109/L,21 d血小板计数>50×109/L,24 d性染色体和微卫星法DNA指纹图监测显示为混合嵌合体,随着DLI的进行,逐渐转为供者型完全嵌合体,骨髓瘤细胞和血清M蛋白均逐渐消失,移植后8个月达完全缓解。在+180 d(第三次DLI后68 d)发生II度急性GVHD,经甲泼尼龙和CsA治疗得以控制。现随访36个月,患者情况良好,仍处于完全缓解状态。结论:非清髓性造血干细胞移植加供者淋巴细胞输注治疗MM是可行和有效的。

G-CSF动员的供者淋巴细胞输注治疗异基因造血干细胞移植后慢性髓细胞白血病复发

目的探索G-CSF动员的供者淋巴细胞输注治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后白血病复发的方法。方法慢性髓细胞白血病慢性期(CML-CP)患者1例,白消安/环磷酰胺(Bu/Cy)方案预处理,供受者为同胞间HLA6/6相合,回输外周血干细胞,单个核细胞8.69×108/kg,CD34+细胞6.69×106/kg。急性移植物抗宿主病(GVHD)的预防采用骁悉(MMF)、环胞素A(CsA)联合短疗程甲氨蝶呤(MTX)方案。移植后125天,分子生物学复发。先后给予3次未经动员的供者淋巴细胞输注(DLI),细胞剂量分别为1×107/kg、1.5×107/kg和1.5×107/kg。移植后307天,给予G-CSF动员的DLI,MNC 8.69×108/kg。结果 ANC≥0.5×109/L的时间是移植后16天,PLT≥20×109/L的时间是移植后19天。移植后41天,FISH结果示Bcr/Abl融合基因阴性,XX染色体占59%,移植后125天分子生物学复发。3次DLI后患者Bcr/Abl融合基因逐渐下降,XX染色体的比例逐渐上升,但出现严重的全血细胞减少。在G-CSF动员的DLI联合CsA治疗后,患者造血恢复,完全供者型植入,没有出现GVHD的临床表现,并且达到了分子生物学完全缓解。结论 G-CSF动员的DLI和传统的较未经G-CSF刺激的DLI安全性高,且有较好的GVL效应。

供者淋巴细胞输注联合替比夫定治疗慢性乙型肝炎一例

尽管目前临床上已有多种能够有效抑制HBV的药物可供选择,慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）的治疗仍面临许多挑战,如长期使用可能出现病毒基因发生耐药突变等[1]。

非清髓性异基因造血干细胞移植联合供者淋巴细胞输注治疗恶性血液病

目的：探讨非清髓性异基因造血干细胞移植（non-myeloablative allogeneic stem cell transplantation，NAST）联合供者淋巴细胞输注（DLI）治疗恶性血液病的疗效和并发症。方法：采用FBCA方案[氟达拉宾30mg／（m^2·d），用5d；马利兰4mg（kg·d），用2d；环磷酰胺0．6～0．8g／d，用2天；Ara-C2g/（m^2·d），用5d]对12例恶性血液病患者预处理，行异基因造血干细胞移植，移植后第30d开始予DLI，并动态观察造血恢复指标、嵌合状态、GVHD及疗效指标。结果：12例患者造血顺利恢复，中性粒细胞（ANC）〉0．5×10^9／L平均为13d，血小板计数（PLT）〉20×10^9／L平均为14．5d，移植后第30d时经短串重复系列（STR—PCR）检测12例植活患者中10例为完全嵌合状态（CDC），2例为混合嵌合体，第90d时又有1例患者转为CDC，发生Ⅲ～Ⅳ度急性GVHD3例（25％），Ⅱ度急性GVHD1例（8．3％），发生慢性GVHD5例（41．7％），死亡3例，2例死于移植相关合并症，1例死于复发，9例存活，中位随访时间为321d（75～1143d），3例持续CR，2年总生存率、无病生存率及复发率分别为66．7％、58．3％及8．3％。结论：NAST联合DLI治疗恶性血液病安全可靠，造血功能恢复迅速且持久稳定，长期无病生存率高，急性GVHD发病率、严重程度低，而白血病复发率并未增加。

供者淋巴细胞输注治疗小鼠H22肝癌的实验研究

目的:观察供者淋巴细胞输注(DLI)对小鼠H2 2肝癌的治疗作用。方法:荷瘤昆明小鼠分荷瘤对照组(A组)、5- 氟脲嘧啶(5 - FU)化疗组(B组)、DLI组(C组)及5 - FU加DLI组(D组) 4组。比较各组小鼠生存期、抑瘤率及瘤体病理检查结果,检测NK细胞及IL 2的活性。结果:B、C组生存时间长于A组(P <0 .0 1) ,D组长于C组(P <0 .0 1) ;B、C、D各组抑瘤率依次为61.3 %、3 4.7%、89.5 % ;C、D两组NK细胞及IL 2活性明显高于A、B组(P <0 .0 5 ) ;病理观察见C、D组大量炎性细胞浸润。结论:DLI对小鼠H2 2肝癌有治疗作用,是一种潜在可行的实体瘤细胞过继免疫治疗方法。

供者淋巴细胞输注的研究进展

供者淋巴细胞输注(DLI)是治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的恶性血液病患者的有效方法之一。DLI主要通过移植物抗肿瘤效应(GVT)来诱导和维持缓解。在有些病例,DLI诱导的缓解非常持久,并能治愈一些其他治疗方法无效的患者。作者综述了DLI的细胞成分、剂量、疗效、并发症及应用展望。

供者淋巴细胞骨髓腔内输注对移植物抗宿主病和外周血IL-4与IFN-γ水平的影响

本研究观察骨髓腔内供者淋巴细胞输注对异基因小鼠外周造血干细胞移植(allo-PBSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)和外周血IL-4和IFN-γ水平的影响。以雌性C57BL/6小鼠为受鼠,接受全身照射(TBI)预处理后,先骨髓腔移植雄性BABL/c小鼠来源的经rhG-CSF动员后的外周造血干细胞,然后分别经尾静脉和骨髓腔内进行供者淋巴细胞输注(DLI),建立异基因GVHD模型,观察移植后小鼠的生存状态和GVHD发生情况;以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平。结果显示:骨髓腔内-DLI组的受鼠GVHD发生比例和严重程度较尾静脉-DLI组明显减低(p<0.01);与尾静脉-DLI组比较,骨髓腔内-DLI组IL-4分泌增多,IFN-γ分泌减少(p<0.01)。结论:与尾静脉-DLI相比,IBM-DLI有利于减少GVHD的发生。

异基因反应性NK细胞在供者淋巴细胞输注治疗单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发中的作用研究

本研究旨在探讨预处理中异基因反应性NK细胞(allo-reactive NK cells,Allo-NK)在供者淋巴细胞输注(DLI)治疗单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发中的作用。采用免疫磁珠富集F1供鼠(H-2d/b)脾脏allo-NK,流式细胞术和LDH法检测其异体反应性。建立小鼠单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发模型,采用放射性核素标记法追踪DLI的体内分布。比较不同处理组小鼠的肿瘤大小、淋巴细胞浸润程度,采用RayBio(小鼠细胞因子抗体芯片检测血清中22种细胞因子的变化。结果表明:在移植后24-48小时,allo-NK组的回输供者淋巴细胞在受者肺脏、脾脏、肾脏中明显蓄积,浓度最高,时间最长。化疗+DLI组与化疗+PBS组的肿瘤体积相比无明显区别,但allo-NK+DLI组的肿瘤体积显著小于化疗+DLI组(p<0.05)和allo-NK+PBS组(p<0.01)组,且镜下可观察到肿瘤局部较多的淋巴细胞浸润。allo-NK+DLI组中MCP-1、IL-17、IL-12和MCP-5较对照组分别升高1.56、1.36、1.20、1.17倍;而IL-10降低42.8%。结论:allo-NK可以延长DLI在宿主体内停留时间,促进炎性因子和Th1类细胞因子分泌,抑制肿瘤生长,提高DLI治疗移植后肺癌复发的疗效。