依他尼酸联合顺铂化疗促肺癌A549细胞凋亡的作用及机制研究

目的探讨依他尼酸(ethacrynic acid,EA)杀伤肺癌A549细胞球的作用及机制研究。方法无血清培养基中培养A549细胞球,应用Western blot检测CD133、SOX2、Ep CAM和ABCG2的蛋白表达水平。应用1、2、5、10、20 mg/m L的浓度顺铂(cisplatin,DDP)分别处理A549及细胞球48 h,用MTT检测48 h内细胞的存活率。应用比色法检测10、50、100、200μmol/L EA对A549细胞球中谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性的抑制作用。应用流式细胞术、Western blot、Real-timePCR、相差显微镜观察检测200μmol/L EA处理A549细胞球前后ROS水平、细胞成球能力、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白以及β-catenin启动子活性的变化情况。应用β-catenin腺病毒感染A549细胞球后,再用200μmol/L EA的处理A549细胞球,利用Real-time PCR和Western blot检测β-catenin S、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的变化,并用MTT检测A549细胞球增殖的抑制作用。结果成功培养出悬浮的A549细胞球,其高表达肿瘤干细胞标志物CD133、SOX2、Ep CAM以及耐药相关蛋白ABCG2,并可耐受不同浓度DDP的杀伤作用。200μmol/L EA处理A549细胞球后ROS水平明显升高,而GST活性、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的表达、β-catenin的启动子活性、A549细胞球的成球能力显著下降,并且200μmol/L EA联合5 mg/m L DDP可增强对抑制A549细胞球增殖的作用和增加细胞凋亡的水平(P<0.05)。过表达β-catenin后,200μmol/L EA对β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的抑制作用较空载体组显著减弱。此外,过表达β-catenin可显著缓解200μmol/L EA联合5 mg/m L DDP对A549细胞球的增殖抑制作用。结论 EA通过抑制GST活性和β-catenin水平,发挥抑制A549细胞球增殖和干性,促进其凋亡的作用。EA可望成为治疗肺癌及肺癌干细胞的药物。

依他尼酸甲酯诱导人急性髓性白血病HL-60细胞凋亡作用和机制的初步探讨

目的研究依他尼酸甲酯(EAME)对人急性髓性白血病HL-60细胞的凋亡诱导作用,并初步探讨EAME诱导HL-60细胞凋亡的机制。方法采用吖啶橙(AO)、溴化乙啶(EB)双染法考察药物的凋亡诱导活性;采用流式细胞术检测活性氧的蓄积和线粒体膜电位的变化;利用荧光标记法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量的变化。结果EAME浓度在2~10μmol.L-1内对HL-60细胞具有显著的凋亡诱导能力;EAME诱导活性氧蓄积,降低线粒体膜电位和细胞内GSH含量;N-乙酰半胱氨酸(NAC)能够完全逆转EAME对GSH水平的耗竭作用及对HL-60细胞的凋亡诱导作用;丁硫氨酸亚砜胺(BSO)可以协同EAME进一步降低细胞内GSH水平,同时增强凋亡诱导能力。结论EAME可诱导HL-60细胞发生凋亡,活性氧在凋亡诱导过程中起主要作用。细胞内GSH水平与细胞对EAME诱导凋亡的敏感性呈反向相关。

两种依他尼酸衍生物对人类谷胱甘肽-S-转移酶Mu的抑制动力学研究

目的:考察所设计依他尼酰乙胺、双依他尼酰丁二胺及对应产物对人类谷胱甘肽-S-转移酶Mu(glutathione-S-transferase Mu,GSTM)的抑制动力学。方法:重组表达GSTM,以2,4-二硝基氯苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)为底物,跟踪酶反应过程的紫外吸收变化,测定酶活性。比较GSTM存在下依他尼酰乙胺、双依他尼酰丁二胺与GSH孵育前后对酶的半抑制浓度(IC50)、抑制类型。结果:依他尼酰乙胺、双依他尼酰丁二胺对GSTM的IC50分别为(44.0±2.2)μmol/L、(0.090±0.012)μmol/L(n=3),两者相对GSH是反竞争性抑制剂、相对CDNB是竞争性抑制剂。与酶和GSH孵育原位生成产物后,对GSTM的IC50分别为(8.9±0.1)μmol/L和(0.006±0.001)μmol/L(n=3);依他尼酰乙胺与GSH孵育后相对GSH是竞争性抑制剂、相对CDNB是混合型抑制剂;双依他尼酰丁二胺与GSH孵育后相对GSH和CDNB均为混合型抑制剂。两种依他尼酸衍生物与GSH孵育后产物IC50明显降低,双依他尼酰丁二胺及其GSH孵育产物IC50较依他尼酰乙胺及其产物均明显降低。结论:依他尼酰乙胺、双依他尼酰丁二胺是潜抑制剂,其产物对GSTM的抑制作用更强,抑制类型发生明显改变;双依他尼酰丁二胺及其产物较依他尼酰乙胺抑制作用更强。

人血清白蛋白和依他尼酸的相互作用

目的探讨人血清白蛋白(HSA)和依他尼酸的相互作用。方法通过荧光光谱、紫外可见吸收光谱、傅里叶变换红外光谱、圆二色谱、分子模拟技术考察两者的相互作用。结果利用Scatchard方程确定了两者相互作用的结合位点数以及结合常数;根据Van't Hoff方程求得了相互作用的摩尔焓变、摩尔熵变和吉布斯自由能变;计算出了两者相互作用的距离;利用分子模拟技术证明了两者之间主要的作用力是疏水作用力和氢键。结论 HSA和依他尼酸间存在相互作用,可改变HSA的二级结构。

依他尼酸衍生物的合成及其抑制GSTπ活性研究

目的设计合成EA衍生物,并对其抑制GST活性进行研究。方法以取代苯酚为原料,经成醚反应、Friedel-Crafts酰基化反应、羟醛缩合反应合成目标化合物;并用人急性早幼粒白血病HL-60细胞株裂解液测定目标化合物对GST的抑制活性。结果合成了15个EA衍生物,其结构经IR、MS和1H-NMR谱确证;体外活性实验表明,化合物N-4、N-5、N-6、N-7有较高的抑酶活性。结论EA衍生物对GST具有良好的抑制活性,值得深入研究。

双依他尼酸乙醇胺对谷胱甘肽S-转硫酶mu的选择性抑制作用

谷胱甘肽S-转移酶(GST)的同工酶mu (GSTM)高表达与卵巢癌顺铂耐药有关。以GST非选择性抑制剂依他尼酸设计二价潜抑制剂双依他尼酸乙醇胺(aminoethanol di-ethacrynic acid, ADEA),测定ADEA及其与还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)加合物对GST同工酶亚型A1、P1、M2的半抑制浓度(IC50)、抑制类型、结合比和结合动力学。ADEA本身对GSTM2的IC50比GSTA1低300倍,比GSTP1低3 000倍;ADEA与GSH在酶催化下反应10 min所得产物,对上述3种同工酶的IC50分别降低5、57、200倍。ADEA本身和产物对GSTM2相对于底物CDNB是反竞争性抑制剂,ADEA本身对GSTM2相对于底物GSH是混合性抑制剂,ADEA与GSH产物对GSTM2相对于底物GSH是反竞争性抑制剂。分析ADEA对GSTM2荧光静态淬灭表明ADEA及其产物是二价结合;分析荧光和酶活性随时间变化表明酶与ADEA本身结合速度比其产物CDNB慢10倍。ADEA是有效的GSTM2选择性二价潜抑制剂。

依他尼酸抑制小鼠气管平滑肌收缩

本研究旨在探讨依他尼酸(ethacrynic acid, EA)抑制气管平滑肌(airway smooth muscle, ASM)收缩的作用及其机制。利用BL-420S系统测量小鼠气管环张力,用全细胞膜片钳技术记录ASM细胞通道电流,用钙成像系统测量ASM细胞内Ca^2+浓度。结果显示,EA剂量依赖性地抑制高-K^+(80 mmol/L)和乙酰胆碱(acetylcholine, ACh, 100μmol/L)引起的小鼠气管环收缩,最大舒张百分比分别为(97.02±1.56)%和(85.21±0.03)%,半数有效浓度(median effective concentration, EC50)分别为(40.28±2.20)μmol/L和(56.22±7.62)μmol/L。EA分别降低高-K^+和ACh诱导的细胞内Ca^2+浓度,分别从0.40±0.04降到0.16±0.01,0.50±0.01降到0.39±0.01。此外,EA抑制ASM细胞L-型电压依赖钙通道(L-type voltage-dependent calcium channel,LVDCC)和钙库操纵的钙离子通道(store-operated calcium channel, SOCC)电流,以及高-K^+和ACh引起的外Ca^2+内流。同时,EA可以降低小鼠呼吸系统阻力(resistance of the respiratory system, Rrs)。以上结果提示,EA通过抑制小鼠ASM细胞LVDCC和SOCC,抑制Ca^2+的内流,降低细胞内Ca^2+浓度,导致ASM舒张,提示EA是一种潜在的支气管扩张剂。

老年人的合理用药

由于卫生保健事业的发展,人的平均寿命明显延长,高龄者的比例增加。对老年人的保健和用药问题,已引起人们的重视。老年人机体的特点是:①体重减轻,体表面积缩小,代谢率降低,消化道形态和功能改变。

常用药物

Drugs Used Uropoiem System Diseases 泌尿系统用药Amiloride 阿米洛利Bumetanide 丁尿胺依他尼酸（利尿酸）Etacrynic Acid 依他尼酸（利尿酸） Furosemide 呋塞米（呋喃苯胺酸，速尿） H ydrochlorothiazide 氢氯噻嗪（双氢克尿塞）

USE OF ETHACRYNIC ACID (ECA) AS AN ADJUNCTIVE THERAPY IN (NPDS)

Twelve patients with uncontrolled open angle glaucoma underwent Non-Penetrating Deep Sclerectomy in the usual manner. After unroofing of Schlemms Canal and esxpure of its inner wall, ECA (5 micrograms) was introduced to the lumen of SC through its cut edges and applied over the inner wall. Following this, NPDS was completed as usual. IOP was reduced as expected

应尽量减少不必要的联合用药

目前临床治疗多采用联合用药,少则3～5种,多则10种以上。联合用药能够较好地发挥药物的治疗作用,但同时也产生一些副作用或毒性,甚至可导致死亡。据报道,同时应用5种药物时,其有害反应出现率为4.2%,6～10种为7.4%。

如何合理应用袢利尿剂?

利尿剂作用于人体肾脏,能够显著增加Na^+、C1^-等电解质和水的排泄,产生利尿作用。临床上常用的利尿剂有5大类,其中袢利尿剂被称为高效能利尿剂,在疾病的治疗上应用较为广泛。袢利尿剂能够选择性抑制NaCl的重吸收,并且不容易导致患者酸中毒。目前临床上常用的袢利尿剂主要包括呋塞米、依他尼酸、布美他尼。袢利尿剂在某些疾病的治疗中发挥着重要的作用,特别适用于有明显液体潴留或伴有肾功能受损的患者。现笔者汇总袢利尿剂的临床适应证及使用注意事项,供大家参考。

2,3-二氯苯甲醚的合成新工艺研究

以2,3-二氯氟苯和甲醇甲醇钠为起始原料,代替硫酸二甲酯法生产2,3-二氯苯甲醚的新工艺。优化工艺条件为:投料比n(2,3-二氯氟苯)∶n(30%的甲醇钠甲醇溶液)=1∶1.1,反应温度60℃,反应时间为12 h,在此条件下2,3-二氯苯甲醚收率为98.4%,2,3-二氯氟苯的转化率达100%。

袢利尿剂与骨骼健康

如果你正在服用袢利尿剂降血压或者排除多余的体液．最好检查一下骨密度。袢利尿剂包括布美他尼（丁尿胺）、依他尼酸、呋塞米（速尿）、托拉塞米。近日有研究发现上述的袢利尿剂与男性的骨质流失有关（发表于内科学杂志）。既往的研究也发现袢利尿剂与女性的骨质流失有关。其它类型的利尿剂则相反。可促进骨骼健康。

前列腺增生患者应该避免服用哪些药物

近日,80岁的张老因头痛、流涕到药店买了一盒抗感冒药,服药当天排尿不出,折腾一夜,腹胀难忍,天亮后到医院经过B超和化验检查诊断为良性前列腺增生症。医生告诉张老,排尿不出,可能是感冒药中所含麻黄碱与扑尔敏,使原有的前列腺增生加重,而诱发了急性尿潴留,经导尿后,

利尿药的药物分析

利尿药是直接作用于肾脏，增加电解质及水排泄、使尿量增多的药物。临床应用范围日益广泛，既能治疗心、肾、肝疾病引起的水肿、腹水，也对高血压、尿崩症等非水肿性疾病有疗效。高效能利尿药包括呋塞米（呋喃苯胺酸）、依他尼酸、布美他尼（丁苯氧酸）。现对利尿药物对肾脏泌尿功能的影响及高效能利尿药进行分析。

卡那霉素、多黏菌素B、甲硝唑、醋竹桃霉素

卡那霉素 依他尼酸（利尿酸）由于协同作用,两药同时应用可以使耳毒性发生的概率升高。其他氨基糖苷类抗生素与依他尼酸、布美他尼、呋塞米等药物之间都有类似的相互作用。两药同时应用是禁忌的。

利尿剂对降压效果的影响

当谈到降压药物时,血管紧张素受体拮抗剂和血管紧张素转换酶抑制剂是你的医生在可供选择的几种降压药物中的首选。但你服用的第一种药物可能不能有效地控制血压。在这种情况下,医生可能会为你添加或完全转换为另一种称为利尿剂的药物。利尿剂可使体内钠含量和水分减少,减少水分就意味着血容量减少而使血压降低。

灰鼠畸变产物耳声发射改变和外毛细胞缺失程度的相关分析

目的探讨灰鼠畸变产物耳声发射（DPOAE）幅值的降低与外毛细胞缺失率之间的关系。方法联合应用顺铂和利尿酸钠，建立灰鼠耳蜗毛细胞损伤模型。12只灰鼠在静脉注射利尿酸钠（40mg／kg）同时，腹腔注射顺铂（0．2mg/kg），分别于用药前和用药后的1周、2周及3周在清醒状态下检测动物DPOAE，并在施行最后1次DPOAE检测后处死动物。常规制备灰鼠耳蜗基底膜铺片并进行全耳蜗毛细胞计数。计算用药前和处死前DPOAE幅值的改变程度，通过Person相关分析对DPOAE幅值的降低与外毛细胞缺失程度之间的相关性进行分析。结果顺铂和利尿酸钠引起灰鼠耳蜗外毛细胞缺失的特点是病变始发于基底膜的底回并逐渐向顶回发展，外毛细胞的缺损程度沿着基底膜从底回向顶回逐渐减轻，而不同频率DPOAE幅值降低的程度亦遵循从高频向低频发展的规律，各频率DPOAE在注射顺铂和利尿酸钠后的幅值改变与基底膜上相应部位的外毛细胞缺损程度存在一定的对应关系（r=0．796，P〈0．05）。外毛细胞每损失1％，可引起约0．24dB的DPOAE幅值降低。结论在灰鼠耳蜗损伤模型中，从DPOAE幅值的变化可以大致评估耳蜗外毛细胞的缺失程度。