依托泊甙中2个同分异构体杂质的分离与鉴定

从抗肿瘤药依托泊甙（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）的原料药中，用相溶度分析方法，结合柱色谱和薄层色谱分离出２个主要杂质，根据ＵＶ、ＩＲ、比旋度、质谱和核磁共振光谱数据，推断其结构均为依托泊甙的同分异构体，分别命名为４α─表依托泊甙和２β─苦依托泊甙。

腺病毒介导PDCD5基因转移促进依托泊甙诱导的K562细胞凋亡

本研究观察程序性细胞死亡5基因(programmed cell death 5,PDCD5)重组腺病毒转染K562细胞后对化疗药物依托泊甙的增敏作用。利用AdMaxTM腺病毒载体包装系统,通过同源重组方法构建Ad-PDCD5重组腺病毒及对照腺病毒Ad-null及Ad-eGFP;用不同感染复数将Ad-eGFP、Ad-null或Ad-PDCD5转染人白血病细胞系,实时定量PCR检测PDCD5mRNA的相对表达水平;利用MTT法及Annexin-V-FITC/PI双染色流式细胞术观察依托泊甙对转染后K562细胞增殖与凋亡的影响。结果表明:Ad-eGFP腺病毒对白血病细胞系K562、Jurkat及CEM的转染效率可达60%-86%。Ad-PDCD5重组腺病毒能梯度增加K562细胞PDCD5 mRNA的相对表达水平,腺病毒介导的PDCD5基因转移促进依托泊甙诱导的K562细胞凋亡。结论:PDCD5重组腺病毒可能成为化疗药物的增敏剂。

拓扑替康、依托泊甙联合顺铂治疗小细胞肺癌的临床观察

目的 :比较拓扑替康、依托泊甙联合顺铂与EP方案治疗小细胞肺癌的临床疗效和毒副反应。方法 :患者随机分为两组 ,A组使用TEP方案 :TPT 0 75～ 1 2 5mg/m2 /d ,静滴 30分钟 ,d1～ 5 ,VP 16 10 0mg口服或静滴 ,d2～ 6 ,DDP 4 0mg/d ,静滴d1～ 3;B组使用EP方案 :VP 16 10 0mg静滴或口服d1～ 5 ,DDP 4 0mg/d静滴d1～ 3。结果 :A组 14例病例 ,CR 2 1 4 3% ,PR5 6 14 % ,有效率为 78 5 7% ;B组 13例病例 ,CR 2 3 0 8% ,PR 38 4 6 % ,有效率为 6 1 5 4 %。主要毒副反应为血液学毒性及消化道反应。结论 :拓扑替康、依托泊甙联合顺铂治疗小细胞肺癌临床效果好 ,虽然毒副反应较大 。

小剂量依托泊甙对结肠癌细胞衰老的影响

目的:观察依托泊苷(etoposide,VP-16)对结肠癌细胞衰老的影响。方法:0～8μg/mL VP-16作用结肠癌LS-174T细胞后,采用CCK-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖情况,FCM检测细胞凋亡及细胞周期改变,衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色检测细胞衰老情况,Western印迹法检测p53、p16、RB、p21WAF-1/CIP1和E2F1蛋白的表达。结果:VP-16可以抑制结肠癌LS-174T细胞的增殖,且呈浓度依赖性;大剂量(2和4μg/mL)VP-16可以促进结肠癌细胞凋亡;小剂量(1μg/mL)VP-16作用后,结肠癌细胞呈现典型的大而扁平的衰老形态,SA-β-gal染色阳性,细胞周期阻滞于G2/M期。Western印迹法检测结果显示,小剂量VP-16可以促进p21WAF-1/CIP1蛋白表达,抑制E2F1蛋白表达,而对p53、p16和RB蛋白表达无影响。结论:大剂量VP-16可促进结肠癌细胞凋亡;小剂量VP-16可促进结肠癌细胞衰老,其作用机制可能与VP-16促进细胞p21WAF-1/CIP1蛋白表达及抑制E2F1蛋白表达有关。

依托泊甙复乳处方设计和稳定性考核

通过对油的品种、乳化剂及 HLB 值、稳定剂等辅料的筛选,并经正交设计试验获得较稳定的 W_1o/w_2型依托泊甙复乳处方和制备工艺条件,测定了药物包裹率并考核了稳定性。

高效液相色谱法检测人血浆中的依托泊甙

本文应用高效液相色谱法分离人血浆中的依托泊甙（ＶＰ（１６），使用ＹＷＧ－Ｃ（１８）作固定相，以甲醇－水（５５：４５）作流动相。用三氯甲烷从血浆中提取，外标法定量，ＵＶ（２５４ｎｍ）检测，可使ＶＰ（１６）排除血中成分的干扰而获得完全分离。血浆中最低检测限为５０ｎｇ／ｍｌ，方法精密度日间ＲＳＤ＝５．２０％，日内ＲＳＤ＝１０．０４％，平均回收率为９４．６％。

依托泊甙联合顺铂治疗食管小细胞癌的疗效

目的观察依托泊甙(VP-16)联合顺铂(DDP)治疗食管小细胞癌的疗效及不良反应。方法局限期(LD)患者7例,广泛期(ED)患者9例,所有患者均接受VP-16/DDP方案联合化疗。结果 LD组CR1例(14%),PR4例(57%),PD1例(14%),总有效率71%(CR+PR);ED组:CR0例,PR5例(56%),总有效率56%(CR+PR)。LD组:中位至疾病进展时间(TTP)19月(95%CI:6.1～25.1月),中位生存时间(OS)24.7月(95%CI:10.5～36.7月)。ED组:中位至疾病进展时间(TTP)8.2月(95%CI:5.7～16.9月),中位生存时间(OS)12.5月(95%CI:9.5～25.1月)。LD组和ED组中非血液学毒性发生率最高的是消化道反应,Ⅰ～Ⅱ级恶心呕吐发生率分别为:72%和44%;Ⅲ～Ⅳ级白细胞减少的发生率分别为43%和33%;本研究中无治疗相关性死亡。结论依托泊甙联合顺铂治疗食管小细胞癌疗效显著,耐受性好。

降低蛋白激酶D3的表达和活性增强前列腺癌细胞DU-145对依托泊甙的敏感性

目的探讨蛋白激酶D3(protein kinaseD3,PKD3)是否会影响依托泊甙对激素抵抗性前列腺癌(hormonal refractory prostate cancer,HRPC)的生长抑制。方法在HRPC细胞系DU-145中瞬时转染PKD3的siRNA,Western blot检测细胞中内源性PKD3的表达变化;siRNA转染48h后,分别以0、30、70、100、300μmol/L的依托泊甙处理对照siRNA、siRNA-PKD3-1、siRNA-PKD3-2转染的DU-145细胞24h,并以细胞活力测定观察敲定内源性PKD3的表达有无影响依托泊甙对DU-145的生长抑制;利用PKC单一抑制剂、PKC-PKD双重抑制剂处理DU-145细胞,以观察二者是否增强DU-145对依托泊甙的敏感性。结果 Westernblot证实siRNA-PKD3的转染敲低DU-145细胞内源性PKD3的表达;细胞活力测定表明,在非特异性siRNA(si-CTL)转染的DU-145细胞中,依托泊甙剂量依赖地抑制DU-145细胞的生长,而敲低PKD3的表达不仅可显著抑制DU-145的生长(P<0.01),还可显著增强依托泊甙对DU-145生长的抑制(P<0.01);Go6976(PKC-PKD的双重抑制剂)可明显抑制前列腺癌DU-145细胞生长(P<0.01),而Go6983(单一的PKC抑制剂)则仅对DU-145的生长起微弱抑制作用。结论 PKD3的表达和活性可增强前列腺癌DU-145细胞对依托泊甙的敏感性,提示可作为抗前列腺癌药物设计的潜在靶点之一。

持续静滴顺铂与口服依托泊甙治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的 探讨持续静滴顺铂与口服依托泊甙 (VP - 16 )治疗非小细胞肺癌 (NSCLC)。方法 6 1例晚期NSCLC随机分为治疗组 (33例 )、对照组 (2 8例 )。对照组予常规EP方案。治疗组予顺铂 2 0mg/m2 /日持续静滴 4天及VP - 16胶囊 5 0mgBid× 10天。结果 有效率 (CR +PR)治疗组(5 7 6 % )高于对照组 (32 1% ,P <0 0 5 ) ;治疗组消化道反应及肾毒性小 ,生活质量改善明显 (P <0 0 5 )。结论 持续静滴顺铂与口服VP - 16胶囊为晚期NSCLC有效。

依托泊甙联合rhG-CSF动员恶性淋巴瘤自体外周血干细胞的疗效评估

目的：观察依托泊甙（VP-16）联合重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对恶性淋巴瘤（ML）患者自体外周血干细胞（APBSC）的动员效果,并对其毒性反应进行评估。方法：26例恶性淋巴瘤患者经过3-7周期常规化疗,经X线、B超、CT、骨髓穿刺、全身骨扫描及各项常规生化检查疗效达完全或部分缓解后动员,动员方案为VP-16 1 500 mg/m^2静脉滴注,白细胞下降至最低点开始回升时给予rhG-CSF 5μg·kg^-1·d-^1皮下注射,1日1次,连用3-5 d后WBC上升至5.0×10^9/L以上时开始采集,采集APBSC次数分别为1-3次。检测采集细胞中的单个核细胞（MNC）及CD34^＋细胞数量,观察动员期间不良反应及APBSC回输后骨髓造血恢复情况。结果：26例患者动员后采集获得MNC的平均数量为5.20×10^8/kg,其中17例患者CD34^＋细胞数平均为5.15×10^6/kg。所有患者均移植成功,重建造血功能,WBC恢复至1.0×10^9/L的时间为＋12 d,中性粒细胞恢复至0.5×10^9/L的时间为＋13 d。动员期间有4例患者出现中性粒细胞减少性发热,其余不良反应均可耐受。结论：VP-16联合rhG-CSF是动员恶性淋巴瘤患者自体外周血干细胞的有效方法。

高效液相色谱法测定血浆中依托泊甙

依托泊甙(足叶乙甙,Vp 16-213)是半合成的鬼臼毒衍生物,化学名为4-脱甲基表鬼臼毒9-[4,6-O-亚乙基-β-D-吡喃葡萄糖甙],具有广谱抗肿瘤活性,能抑制DNA和蛋白质的合成。但临床应用时须进行血药浓度的监测,以提高疗效,降低毒副反应。文献曾报道以氚标法及高效液相色谱法测定血药浓度。本文采用后法,并作了较大的改进。

依托泊甙(VP-16)诱导人肺腺癌细胞凋亡

目的探讨ＶＰ－１６对肺腺癌细胞凋亡的诱导作用。方法采用光镜、电镜、流式细胞仪、凝胶电泳和ＴｄＴ原位末端标记法检测ＶＰ－１６诱导人肺腺癌ＡＧＺＹ－８３－α细胞凋亡规律，并观察放线菌酮对凋亡的抑制程度。结果ＶＰ－１６在显著抑制细胞增殖的同时，能够诱导细胞凋亡，将细胞阻滞于Ｇ２期。放线菌酮对凋亡有显著的抑制作用。结论ＶＰ－１６诱导细胞凋亡，是其杀死肿瘤细胞的重要机制之一。该凋亡具有明显的时间和剂量依赖性。

伊立替康联合顺铂方案对照依托泊甙联合顺铂方案治疗广泛期小细胞肺癌疗效的回顾性分析

目的回顾性分析比较伊立替康联合顺铂方案和依托泊甙联合顺铂方案治疗广泛期小细胞肺癌的近期疗效和毒性反应。方法收集2006年1月一2010年10月43例小细胞肺癌患者的病历资料，其中18例采用IP方案治疗．25例采用EP方案治疗。统计分析两种方案的近期疗效及不良反应。结果IP方案组与EP方案组的有效率分别为50％和48％，差异无显著性。IP方案组的Ⅲ-Ⅳ度腹泻和Ⅲ一Ⅳ度恶心呕吐发生率分别为17％和ll％，EP方案组发生率分别为4％和8％．差异亦均无显著性。但IP方案组的Ⅲ-Ⅳ度骨髓抑制发生率为11％，明显低于EP方案组（40％）。结论IP方案和EP方案治疗广泛期小细胞肺癌的疗效相当，但IP方案的血液学毒性较EP方案明显减轻．不失为治疗广泛期小细胞肺癌的一线治疗选择。

HSS介导依托泊甙对人肝细胞癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：了解肝细胞生长刺激物质（ＨＳＳ）介导依托泊甙（ＶＰ－１６）对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法：建立人肝细胞癌裸鼠移植瘤模型，对荷瘤小鼠腹腔内注射不同剂量ＶＰ－１６及ＨＳＳ治疗２周；治疗结束后，于不同时间处死动物，进行病理学检查，并计算肿瘤生长抑制率。结果：与对照组相比，中、大剂量ＶＰ－１６（０．７５，１．５ μｇ／ｇ）联合ＨＳＳ（１ μｇ／ｇ）组肿瘤生长明显受抑，抑瘤率分别为７１％ 和６９％ （Ｐ＜ ０．０１），但中、小剂量组之间差异无显著性（Ｐ＞ ０．０５）；而小剂量联合（ＶＰ－１６ ０．３８ μｇ／ｇ）组及单用ＨＳＳ（１ μｇ／ｇ）组较对照组无明显差异（Ｐ＞ ０．０５），抑瘤率分别为２３％ 和５％ 。单用大剂量ＶＰ－１６副作用明显。中、大剂量ＶＰ－１６联合ＨＳＳ均可显著延长小鼠存活期。结论：ＨＳＳ介导大、中剂量ＶＰ－１６具有明显抑瘤效应，以中剂量为佳。

TNF-α基因与依托泊甙联合诱导胶质瘤凋亡的实验研究

目的在体外水平（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）建立对胶质瘤杀伤作用的 ＴＮＦ－α基因／ＶＰ１６系统，研究该系统诱导胶质瘤凋亡的作用。方法用逆转录病毒载体将ＴＮＦ－α基因转染人胶质瘤细胞株ＳＨＧ－４４，经生长抑制试验，比较转ＴＮＦ－α基因前后 ＳＨＧ－４４细胞对依托泊甙（Ｅｔｉｏｐｏｓｉｄｅ， ＶＰ１６）的敏感性，并通过形态学及流式细胞仪检测 ＶＰ１６诱导转基因细胞凋亡的情况。结果生长抑制试验表明，转染ＴＮＦ－α基因后的ＳＨＣ－４４细胞对ｙＰ１６的敏感性是转基因前细胞的１０倍（Ｐ＜０．０１），ＩＣ５０为０．８μｇ／ｍＬ。流式细胞检测表明，ＶＰ１６对转ＴＮＦ－α基因细胞有较强的诱导凋亡的能力。结论ＶＰ１６对转ＴＮＦ－α基因ＳＨＧ－４４细胞诱导凋亡的能力大大增加，表明ＴＮＦ－α基因／ＶＰ１６系统对胶质瘤的基因治疗有效。

TRAIL联合依托泊甙对骨肉瘤OS732细胞增殖、凋亡的影响

目的观察TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合依托泊甙对骨肉瘤OS732细胞增殖、凋亡的影响。方法对数生长期的OS732细胞接种于96孔培养板中培养,待细胞完全贴壁后给药。将细胞分为三组,TRAIL组分别加10、50、100、1 000 ng/mL的TRAIL;依托泊甙组分别加1、5、10、20μg/mL的依托泊甙,协同组同时加50 ng/mL的TRAIL与5μg/mL的依托泊甙。采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率,倒置显微镜下观察OS732细胞形态学变化,荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。结果 TRAIL组在10、50、100、1 000 ng/mL TRAIL作用下OS732细胞增殖抑制率分别为6.47%±0.76%、9.85%±0.97%、15.24%±2.48%、51.32%±4.71%(P均<0.05),依托泊甙组在1、5、10、20μg/mL依托泊甙作用下OS732细胞增殖抑制率分别为3.67%±0.74%、10.15%±2.62%、29.37%±3.36%、43.59%±5.92%(P均<0.05)。协同组细胞增殖抑制率为48.36%±6.42%,高于单用TRAIL(50ng/mL)时的9.85%±0.97%及单用依托泊甙(5μg/mL)时的10.15%±2.62%(P均<0.05)。倒置相差显微镜下见协同组大部分细胞脱落,悬浮于培养液中,少部分细胞破裂呈坏死状,荧光显微镜下见协同组细胞内发亮的荧光显色及荧光浓聚,提示有大量OS732细胞发生凋亡。结论 TRAIL、依托泊甙联用可抑制骨肉瘤OS732细胞增殖,促进其凋亡,效果优于其单药应用。

依托泊甙复乳的理化性质与体外释放

测定了依托泊甙复乳的显微结构、粒经分布、渗透压、电学和流变学性质。体外释放试验显示本复乳有快、慢两个释放相,10h 和48h 时释药分别为50%和88%,表明具有缓释作用。用零级(Q-t)和 Higuchi模式(Q-t^(1/2))对复乳的体外释放数据进行拟合,相关系数分别为0.9027、0.9803,表明其体外释放主要以扩散形式进行。

依托泊甙致多药耐药细胞株K562/AO_2 DNA双链断裂及hMRE11蛋白表达和分布的研究

目的研究依托泊甙(VP-16)作用多药耐药细胞K562/AO2后DNA双链断裂和核内hMRE11蛋白表达与分布,了解hMRE11蛋白在多药耐药白血病细胞被DNA靶向化疗药杀伤后的DNA修复过程中的可能作用机制。方法采用MTT药物敏感试验鉴定K562和K562/AO2细胞对VP-16的药敏性,运用脉冲凝胶电泳(PFGE)检测DNA双链断裂,RT-PCR检测敏感株及耐药株中hMRE11的转录水平,免疫荧光技术观察细胞核中hMRE11蛋白灶(hMRE11protein foci)形成情况,并通过流式细胞术检测其细胞周期分布。结果经100μg/ml VP-16处理后8 h,K562细胞的DNA双链断裂率为(37.27±2.58)%,明显高于K562/AO2细胞(13.28±2.33)%(P<0.05);虽然VP-16处理K562与K562/AO2细胞后hMRE11的mRNA表达水平无明显变化,但hMRE11蛋白却在细胞核中形成散在蛋白灶(foci),这种hMRE11蛋白灶阳性(>5 foci)K562细胞比例(62.33±4.09)%高于K562/AO2细胞(34.73±3.29)%(P<0.01);此时K562细胞周期分布为:S期(47.55±2.35)%,G0/G1期(32.76±1.33)%,G2/M期(19.69±2.11)%;对照组K562细胞周期分布为:S期(21.95±2.91)%,G0/G1期(49.29±0.83)%,G2/M期(28.76±3.72)%。结论依托泊甙致K562和K562/AO2细胞DNA双链断裂后,hMRE11蛋白在胞核内重新分布形成蛋白灶,同时大部分细胞阻滞在S期;而且耐药细胞K562/AO2DNA双链断裂率及核中hMRE11蛋白灶的阳性率均低于敏感株K562。