抑制肾素-血管紧张素系统药物的血压依赖性与血压非依赖性作用

该文评估抑制肾素-血管紧张素系统的药物，如血管紧张素转换酶抑制剂（AcEI）与血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂（ARB），对心血管事件的血压依赖性与非血压依赖性作用。采用26个大型临床试验比较ACEI或ARB与安慰剂及其他药物的作用，研究对主要心脑血管事件的相对危险性与血压是否有关。146838名高血压病人有心血管病高危因子，

周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1在临床相关疾病中的研究进展

周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1(Ciz1)作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21^(Cip1/Waf1)的互相作用蛋白,不仅参与哺乳动物DNA复制,还参与细胞周期、细胞凋亡等生物学活动的调节。Ciz1在常见肿瘤(如肺癌、尤因肉瘤、结肠癌、胆囊癌、前列腺癌、乳腺癌)中过表达,表明Ciz1可能是肿瘤生长的驱动因素。Ciz1还与阿尔茨海默病、肌张力障碍等疾病发生相关。深入研究Ciz1与临床相关疾病的关系,可能为多种疾病的治疗提供新靶点。

HDACs去乙酰化酶非依赖性作用在疾病中的研究进展

组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases, HDACs)参与并调节众多生理病理进程,在机体内发挥重要作用。近年来越来越多的文献报道HDACs家族成员具有独立于去乙酰化酶活性的作用。本文围绕四类HDACs,综述了其最新的去乙酰化酶非依赖性调控作用,主要介绍它们的结构、生物学功能以及和疾病的关系,旨在从其结构特点揭示不同的生物学功能,进而探究对疾病发生发展的影响。去乙酰化酶非依赖性作用的研究不仅有助于对HDACs在疾病发生发展中的作用及机制的全新理解,也为以HDACs功能为靶点的新药研发提供新的思路。

葛根素的非内皮依赖性血管舒张作用机制

目的 :研究葛根素对血管的舒张作用并探讨其机制。方法 :记录离体大鼠胸主动脉环张力反应。结果 :葛根素能明显舒张由苯肾上腺素诱导收缩的大鼠主动脉环 ,其血管舒张作用为非血管内皮依赖性 ;KCl预收缩下 ,葛根素对主动脉环无舒张作用。对去内皮的血管环 ,在无Ca2 + 溶液中 ,葛根素不能够抑制咖啡因或苯肾上腺素诱导的短暂收缩。钾通道阻断剂 4 氨基吡啶和四乙胺孵育后能够明显抑制葛根素的舒张血管作用 ,但格列苯脲不能抑制其舒张血管作用。结论 :葛根素的血管舒张作用是非内皮依赖性的 ,其机制可能是通过抑制α肾上腺素受体介导的血管平滑肌细胞外Ca2 + 内流而起作用的。同时 ,KV 通道和ATP敏感性K+ 通道参与了葛根素的舒血管作用。

HCV感染人滋养层细胞过程中抗体依赖性增强作用的初步研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)在感染人滋养层细胞的过程中是否存在抗体依赖性感染增强(ADE)作用,探讨HCV母婴传播的分子机制。方法将HCV阳性血清以4种不同方式感染体外培养人滋养层细胞,应用RT-PCR法对标本进行HCVRNA定性检测,并进一步评估不同浓度CD16单抗对感染过程的阻断作用。此外,应用免疫电镜技术观察滋养层细胞感染HCV病毒颗粒情。结果HCVRNA在全血清组、CD81单抗阻断组及LDL-R单抗阻断组多个标本均为阳性表达,且平均拷贝数较高,在FcγRⅢ(CD16)单抗阻断组多个标本内未能检测到HCVRNA的表达,且阳性标本拷贝数较低;CD16单抗对感染的阻断作用随浓度的升高而增强;在全血清组、CD81单抗阻断组及LDL-R单抗阻断组多个标本细胞内可间断测得未脱壳的HCV病毒颗粒,CD16单抗阻断组细胞内未能检出。结论滋养层细胞膜CD81和LDL-R分子不参与HCV感染滋养层细胞的过程,而FcγRⅢ分子则与此过程密切相关。HCV感染人滋养层细胞过程中存在抗体依赖性增强作用。

二甲双胍非降糖依赖性心肌保护作用的研究最新进展

最新流行病学研究显示,我国的糖尿病患病人数(1.144亿)位居世界第一,糖尿病已成为影响国民健康的重要疾患[1]。心血管并发症是糖尿病患者死亡的首要原因,糖尿病患者心血管疾病患病风险增加约5倍,心肌梗塞后心力衰竭或死亡的风险增加4倍[2]。大量临床及基础研究发现,二甲双胍具有显著心血管保护效应,不仅仅是通过降低血糖发挥直接作用,还通过多种机制间接的发挥心肌保护效应[3-5]。内分泌及心血管领域专家共同推荐二甲双胍作为2型糖尿病(Type 2 diabetic mellitus,T2DM)患者一线首选药物和联合治疗的基本用药[6]。本文将综述二甲双胍对心血管疾病的多重影响,并着重阐述其降糖外所获心肌保护涉及的分子机制。

病毒的抗体依赖性增强作用及其机制

抗体依赖性增强（ADE）作用是指某些病毒在相应抗体协助下复制或感染能力显著增强的现象。使用常规疫苗免疫来防治具有ADE作用的病毒病常常难以奏效,甚至引起某些疾病病情加剧。近年来,关于病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制研究取得了很大的进展,对具有ADE现象病毒有效疫苗的研发具有十分重大的意义。

磺脲类药物的非胰岛素依赖性降糖作用

磺脲类降糖药主要通过刺激胰岛β细胞释放胰岛素而降低血糖,但近来发现长期治疗过程中部分磺脲类药物还具有非胰岛素依赖的降糖机制。一方面磺脲类药可激活细胞内特异的蛋白磷酸化酶而促进葡萄糖转运子4/1的转位,激活糖原合成酶,降低糖原合成酶激酶-3活性,从而促进外周组织的葡萄糖利用。另一方面,部分磺脲类药特别是格列美脲分子可直接插入脂肪细胞/肌细胞膜上的吞饮小泡/不溶于去污剂的富含糖脂筏(caveolae/DIGs区),激活后者的非受体酪氨酸激酶pp59Lyn,进而使胰岛素受体底物-1酪氨酸磷酸化,发动代谢性的拟胰岛素信号级联反应。

周期素依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨周期素依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1(Ciz1)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学染色方法观察Ciz1蛋白在80例结肠癌和正常结肠组织中的表达。结果:癌组织中Ciz1蛋白的阳性表达率显著高于正常结肠组织(62.5%vs42.5%,P=0.007),Ciz1蛋白过表达与结肠癌T分期(P=0.027)、淋巴结转移(P=0.033)、M分期(P=0.027)以及AJCC分期(P=0.022)显著相关。结论:Ciz1蛋白过表达可能在结肠癌发生发展过程中发挥重要作用。

病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制及其意义

抗体协助病毒进入靶细胞,提高感染率,这一现象就是抗体依赖性增强作用(Antibody-dependentenhancement,ADE)。抗体介导病毒感染的敏感性增强的例子已经被很多种不同病毒属的感染证明,有充分的理由相信在一方面保护免疫的诱导作用和另一方面增强敏感性的诱导作用之间存在微妙的平衡。ADE作用的存在,使常规疫苗免疫来防制这类病毒病常常难以奏效。近年来,关于病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制研究取得了很大的进步,对有ADE现象病毒疫苗的研发具有十分重大的意义。

抗体依赖性增强作用及对新型冠状病毒疫苗研发的思考

通常情况下病毒性疫苗诱导机体产生的中和抗体能与入侵病毒结合并使其失去感染宿主细胞和发生疾病的能力,但在某些情况下疫苗接种后诱导产生的抗体不但未产生保护作用,反而加重了疾病的临床表现,即通过抗体依赖性增强作用导致疫苗增强性疾病。本文对既往疫苗临床研究和冠状病毒动物试验研究中发生的抗体依赖性增强作用及其可能的作用机制等进行了综述和分析,提出了对新型冠状病毒疫苗研发过程中安全性的思考,为尽早发现和认知抗体依赖性增强作用/疫苗增强性疾病并进行风险控制提供参考。

登革热的抗体依赖性感染增强的体外实验研究

目的建立异型登革热病毒(DENV)感染所产生的抗体依赖感染增强作用(ADE)的体外实验研究模型。方法将梯度稀释的抗-Ⅱ型登革热膜前蛋白prM单克隆抗体与Ⅲ型登革热病毒(MOI=3)于37℃、5%CO2培养箱内孵育90min形成抗体-病毒复合物后感染K562细胞,通过间接免疫荧光染色,real-time PCR检测DENV抗原在细胞内的表达增强。结果抗体依赖增强作用(ADE)的效果取决于抗体浓度。稀释度为1/2560的抗体与DENV结合共同感染K562后,细胞内登革热病毒抗原的免疫荧光染色结果有明显增强,real-time PCR检测的结果也进一步证实了K562细胞内登革热病毒数量显著增加。结论成功建立了登革热病毒的异型抗体依赖感染增强作用的体外研究模拟,为后续的ADE作用机制的研究提供了可靠的研究模型和实验基础。

鹅星状病毒感染抗体依赖性增强作用

为了探究鹅星状病毒感染是否存在抗体依赖性增强作用,用中和效价为1∶94、1∶141和1∶282共3种不同抗体滴度(低、中、高效价)的鹅星状病毒卵黄抗体分别进行雏鹅保护试验和鹅胚中和试验,同时设空白对照和攻毒对照。结果显示,雏鹅保护试验中抗体效价1∶94组鹅均发病,病死率90%(9/10),1∶141效价组鹅的发病率为30%(3/10),病死率20%(2/10),1∶282效价组鹅无发病及死亡;攻毒对照组鹅100%发病,病死率80%(8/10);1∶94抗体组动物发病时间和死亡时间均早于攻毒对照组;荧光定量PCR检测结果显示1∶94和1∶141抗体效价组Ct值均小于攻毒对照组。鹅胚中和试验结果显示,3个抗体处理组鹅胚病死率分别为100%,20%和0,攻毒和阴性对照组分别为100%和0,1∶94效价组鹅胚死亡时间显著早于攻毒对照组;荧光定量检测结果显示1∶94效价组平均Ct值显著小于1∶141效价组和攻毒对照组。结果说明低中和效价的鹅星状病毒卵黄抗体能增强鹅星状病毒在雏鹅和鹅胚体内的复制能力,发病率和病死率增加,证实鹅星状病毒感染存在抗体依赖性增强作用,其结果可为临床鹅星状病毒病的防控提供理论依据。

靶向人c-Met蛋白单链抗体的制备及其对肺腺癌A549细胞的杀伤作用

目的制备并纯化出靶向细胞间质上皮转化因子(c-Met)蛋白的人源单链抗体(scFv),鉴定其靶向c-Met蛋白的特性及其对肺腺癌细胞的作用。方法将scFv基因插入至p Fuse载体构建真核表达载体,表达融合鼠源Fc段的融合蛋白Met-scFv,经AKTA蛋白纯化系统纯化;将纯化的Met-scFv进行功能性检测:ELISA检测Met-scFv亲和力;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色检测Met-scFv识别并结合肺腺癌细胞的特性;CCK-8法检测Met-scFv对细胞增殖的影响;通过补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),用乳酸脱氢酶(LDH)释放试剂盒检测Met-scFv对靶细胞A549细胞的毒性影响。结果 ELISA结果提示,Met-scFv与c-Met呈量效关系;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色实验结果提示,与对照组相比,Met-scFv组信号呈阳性,提示Met-scFv与A549细胞特异性结合;Met-scFv抑制A549细胞增殖并产生细胞毒性,且毒性大小与Met-scFv剂量呈正相关。结论制备出靶向c-Met蛋白的Met-scFv,并可在体外识别并介导杀伤A549细胞。

登革病毒prM抗体的中和作用及ADE作用研究

【目的】研究登革病毒(DENV)前膜蛋白(pr M)多克隆抗体对不同型别登革病毒的中和作用和抗体依赖性感染增强作用(ADE),为进一步阐明pr M蛋白在登革病毒致病与免疫过程中的重要作用提供依据。【方法】采用ELISA方法检测登革热患者血清中是否存在pr M抗体;用重组登革病毒2型(DENV-2)pr M蛋白免疫家兔,制备pr M蛋白多克隆抗体;采用空斑减数中和试验和流式细胞术检测pr M抗体对4种血清型登革病毒(DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4)的中和作用及ADE作用。【结果】登革热患者血清中存在特异性pr M抗体;pr M抗体对4种血清型登革病毒只有部分中和作用,但在一定浓度范围内对DENV1-4型均有明显的感染增强活性,且对异型DENV的感染增强作用强于同型,其中对登革病毒2型未成熟颗粒(im DENV-2)的感染增强作用最为明显。【结论】登革热患者血清存在pr M特异性抗体;pr M抗体对不同血清型DENV均只有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE效应,证明登革病毒pr M抗体是一种感染增强性抗体。

FcγRⅡB介导的PRRSV感染的抗体依赖性增强作用

将PRRSV Hn-1/06株阳性血清(中和效价为1∶2)做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪肺泡巨噬细胞(PAM细胞)表面的FcγRⅡB,然后分别将感染性免疫复合物和非感染性免疫复合物与PRRSV的混合物感染封闭后的PAM细胞,培养48h后收获样品,采用荧光定量RT-PCR检测收获样品中PRRSV的含量。结果表明,选择性封闭PAM细胞的FcγRⅡB能增强PRRSV的抗体依赖性增强作用。

不同周龄ApoE^(-/-)雄性小鼠离体胸主动脉内皮依赖性舒张作用研究

目的:研究不同周龄ApoE^(-/-)雄性小鼠离体胸主动脉内皮依赖性舒张功能的变化。方法:采用不同周龄(18~44周)ApoE^(-/-)雄性小鼠,分离其胸主动脉,以不同浓度的乙酰胆碱(Ach)分别评价其内皮的完整性,并绘制浓度-舒张曲线,观察不同周龄ApoE^(-/-)小鼠胸主动脉内皮的依赖性舒张作用;胸主动脉行油红O染色,以评价不同周龄ApoE^(-/-)小鼠胸主动脉脂质沉积、斑块面积大小。结果:不同周龄ApoE^(-/-)小鼠离体胸主动脉在浓度为10-5mol/L的Ach作用下,其舒张率均<80%,且随着周龄的增加,舒张率呈逐渐降低趋势;与24周相比,48周ApoE^(-/-)雄性小鼠离体胸主动脉在不同浓度Ach下,其舒张率均显著降低;与24周和36周ApoE^(-/-)小鼠相比,48周ApoE^(-/-)小鼠其斑块面积/血管剖面面积显著增加。不同周龄ApoE^(-/-)小鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)差异均无统计学意义(P>0.05)。ApoE^(-/-)雄性小鼠胸主动脉内皮完整性、血管舒张功能与周龄呈负相关关系(P<0.05),同时与脂质沉积、斑块面积也呈负相关关系(P<0.05)。结论:ApoE^(-/-)雄性小鼠血管内皮依赖性舒张率随着周龄及斑块面积/血管剖面面积的增加而降低,其胸主动脉血管内皮依赖性舒张功能与周龄、斑块面积/血管剖面面积呈负相关关系。

抗HER2单抗报告基因法检测抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性方法的建立及应用

目的利用报告基因法建立抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。方法以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系为靶细胞,通过荧光素酶检测系统建立抗HER2单抗的ADCP测活方法,并运用实验设计(design of experiment,DOE)方法进行实验优化和方法学验证。结果该方法量效关系符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法优化确定量效范围为400~3.959 ng·mL(-1),靶细胞接种密度为每孔1.5×10^(4)个,效靶比为5∶1,诱导时间为7 h。该方法具有良好的专属性;不同稀释组样本百分相对效价分别为(55.04±1.35)%、(78.10±6.33)%、(102.69±5.21)%、(133.32±2.58)%和(152.87±8.11)%;回收率在101%~110%,相对标准偏差(RSD)均小于10%。结论本研究成功建立抗HER2单抗ADCP生物学活性方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCP生物学活性的评价方法。