慢性氟中毒大鼠脑组织中依赖还原型辅酶/醌氧化还原酶1及血红素氧合酶1的表达

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中依赖还原型辅酶/醌氧化还原酶1 （quinone oxidoreductase-1,NQO1）和血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO1）mRNA和蛋白表达水平的改变,以及对转录因子NF_E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路的影响,探讨氟中毒性脑损伤的机制.方法 SD大鼠60只,采用随机数字表法,按照体质量分为对照组（饮水氟含量＜ 0.5 mg/L）、染氟组（饮水氟含量为50.0 mg/L）,每组30只,雌雄各半;实验期为10个月,观察氟斑牙情况,并收集大鼠24 h尿液;心脏灌流处死大鼠后,取后肢股骨和大脑组织.用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及骨氟;用蛋白印迹方法和实时荧光定量PCR分别检测脑组织中NQO1、HO1蛋白和mRNA表达水平.结果 染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,对照组大鼠牙齿无异常改变;染氟组大鼠尿氟[（2.16±0.39）mg/L]及骨氟[（211.07±40.52）mg/kg]均高于对照组[（1.70±0.24）mg/L,（34.67±11.15）mg/kg,t=2.11、3.23,P均＜0.05].染氟组大鼠脑组织中NQO1、HO1蛋白表达[（255.2±14.3）％、（187.2±11.1）％]高于对照组[（100.0±12.2）％、（100.0±8.9）％,t=2.14、2.05,P均＜0.05].染氟组脑组织中NQO1、HO1 mRNA表达[（210.2±9.8）％、（154.5±7.4）％]高于对照组[（100.0±10.4）％、（100.0±9.7）％,t=2.33、2.75,P均＜0.05].结论 慢性氟中毒导致脑组织中NQO1及HO1表达水平升高,可能与Nrf2/ARE信号通路的开启有关,对代偿性增强细胞抗氧化能力有一定作用.

抗氧化剂和低氧诱导醌氧化还原酶1基因的表达及其机制

目的 探讨低氧和抗氧化剂诱导醌氧化还原酶1(NQO1 )基因表达及其与细胞增殖的关系和诱导表达的调节机制。方法 人肝癌细胞SMMC 772 1经抗氧化剂[酪醇(p Ty) ,丁基羟茴香醚(BHA) ,β萘黄酮(βNF) ]、低氧或两者共同处理2 4h ,分别采用微孔板测定法、RT PCR、结晶紫显色法、电泳迁移率变动试验(EMSA)测定MQO1 活力,NQO1 mRNA表达,细胞增殖和细胞核蛋白与抗氧化反应元件(ARE)的结合情况。结果 常氧下BHA ,βNF和p Ty均能诱导NQO1 比活力增加,酪醇诱导NQO1 mRNA表达呈剂量依赖性增加,且与酶比活力存在明显的相关性;酪醇在一定范围内,其抑制细胞增殖的能力呈剂量依赖性,且细胞增殖与酶比活力存在负相关。低氧与抗氧化剂共同处理比常氧下抗氧化剂诱导NQO1 比活力有增加(r=-0 41,P <0 0 1)。EMSA试验表明,ARE能与低氧、抗氧化剂或低氧+抗氧化剂诱导的核蛋白特异结合。结论 抗氧化剂在常氧下可诱导人肝癌细胞NQO1 活力增加,低氧加强其诱导能力。其中酪醇诱导NQO1 活力与NQO1 mRNA表达量增加相关,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活力诱导增加有关。ARE参与介导抗氧化剂和低氧诱导NQO1 基因表达的调节。

NQO1基因多态性与大肠癌遗传易感性

目的:探讨依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ:醌氧化还原酶(NQO1)基因多态性与大肠癌遗传易感性之间的相关性。方法:采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因型分析技术对101例大肠癌患者及103例对照者NQO1cDNA609位点多态性进行测定。结果:基因型频率分布在大肠癌组与对照组差异显著(χ2=9.52,P<0.01),T/T基因型携带者大肠癌患病危险性是野生纯合型(C/C)的3.56倍(OR=3.56,95%CI为1.58～7.96)。NQO1T等位基因及C等位基因频率在大肠癌组与对照组分别为42.1%、57.3%,57.9%、42.7%,T等位基因频率两组有显著差异(χ2=9.43,P<0.01),T等位基因携带者患大肠癌的危险性是C等位基因携带者的1.85倍,(OR=1.85,95%CI为1.25～2.73)。结论:NQO1在大肠癌的形成过程中起一定的保护作用,而NQO1cDNA609位点T等位基因可能是大肠癌发生的危险因素,NQO1基因的多态性与生活特征共同决定个体大肠癌的患病风险。

NQO1基因C609T多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的研究NQO1基因C609T多态性与糖尿病视网膜病变之间的关系。方法根据眼底检查的结果,把546例2型糖尿病患者分成糖尿病视网膜病变组(DR组)和糖尿病无视网膜病变组(NDR组)。采用构象差异凝胶电泳对NQO1基因C609T多态性进行分型。结果 NQO1基因C609T多态性的CC、CT和TT3种基因型在DR组的频率分别为29.7%、53.2%和17.1%,在NDR组的频率分别为28.1%、51.8%和20.1%,两组比较差异无统计学意义(c2=0.678,P=0.713)。结论 NQO1基因C609T多态性与我国江西汉族2型糖尿病视网膜病变的发生无关。

EGCG对糖尿病伤口愈合障碍的治疗作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对糖尿病伤口愈合障碍的治疗效果,并探讨EGCG对Nrf2的激活作用及促进HO1和NQO1基因表达的作用,以阐明EGCG对糖尿病伤口愈合障碍治疗的作用机制.方法采用腹腔注射STZ方法构建小鼠糖尿病模型,糖尿病组和正常对照组同时做皮肤创口手术,通过比较两组创口愈合率差异确定糖尿病伤口愈合障碍模型构建成功.在糖尿病伤口愈合障碍模型构建成功基础上,应用EGCG对创口进行治疗,与非EGCG治疗组比较确定EGCG的治疗效果.应用反转录荧光定量PCR技术检测皮肤组织Nrf2、HO1、NQO1的mRNA表达情况.结果糖尿病组的创口愈合率明显低于正常对照组(P<0.01),证实小鼠糖尿病模型和DNHW模型构建成功,可以进行后续试验.糖尿病+EGCG治疗组的创口愈合率明显高于非EGCG治疗组(P<0.01);糖尿病组皮肤组织Nrf2、HO1、NQO1的mRNA表达量均明显低于正常对照组(P<0.01);EGCG治疗组皮肤组织Nrf2、HO1、NQO1的mRNA表达量明显高于非EGCG治疗组(P<0.05或P<0.01).结论EGCG对糖尿病伤口愈合障碍具有较好的治疗作用,其作用机制是EGCG作为Nrf2激动剂促进了Nrf2的活化,也促进了下游抗氧化基因HO1和NQO1的表达,并能够提升其抗氧化应激能力,降低相关皮肤组织氧化应激水平,进而促进糖尿病伤口愈合障碍的伤口愈合.

过表达Nrf2基因对急性胰腺炎大鼠的保护机制研究

目的探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)过表达对急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)大鼠的保护机制。方法 32只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为4组:阴性对照组(NC),胰腺炎组(NC+AP),过表达组(Nrf2+/+),过表达胰腺炎组(Nrf2+/++AP)。采用尾静脉注射法进行慢病毒转染,转染48 h后,采用蛙皮素联合脂多糖腹腔注射法建立大鼠AP模型。建模成功24 h后处死大鼠采集标本,采用对-硝基苯麦芽七糖苷法检测大鼠血清淀粉酶活性;RT-PCR检测胰腺Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA相对表达量;Western blot检测Nrf2、HO-1和NQO1蛋白相对表达量;HE染色观察胰腺组织病理学改变并评分。结果胰腺炎组(200.72±14.56)U/dL及过表达胰腺炎组(184.60±11.75)U/dL血清淀粉酶水平均较阴性对照组(162.48±13.19)U/dL及过表达组(170.34±11.75)U/dL明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),而过表达胰腺炎组较胰腺炎组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);过表达胰腺炎组中Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA表达量分别为(2.78±0.59)、(1.51±0.18)、(1.61±0.22),较阴性对照组显著升高,且过表达胰腺炎组Nrf2 mRNA表达高于胰腺炎组,差异均有统计学意义(P<0.05);过表达胰腺炎组中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达量分别为(2.78±0.59)、(1.51±0.18)、(1.61±0.22),均较阴性对照组显著升高,且过表达胰腺炎组Nrf2和NQO1蛋白表达量明显高于胰腺炎组(P<0.05);胰腺炎组及过表达胰腺炎组胰腺组织HE染色均符合AP的表现,阴性对照组及过表达组胰腺组织病理检查除部分血管周围和胰腺间质偶尔可见少量炎性细胞浸润外,余未见明显异常改变,而过表达组胰腺组织改变较胰腺炎组有所改善,胰腺病理学损伤评分也明显降低。结论过表达Nrf2基因对蛙皮素联合脂多糖诱导的AP大鼠的胰腺具有一定的保护作用,这种作用可能与通过Nrf2的过表达,诱导其下游抗氧化酶HO-1及NQO1的表达有关。

Nrf2-ARE通路在帕金森病大鼠黑质中的表达改变

目的观察由鱼藤酮制备的帕金森病(PD)大鼠模型黑质多巴胺能神经元中氧化应激参数、转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)及其基因产物血红素氧合酶1(HO-1)和依赖还原型辅酶/Ⅱ醌氧化还原酶1(NQO1)的表达变化情况。方法将健康成年雄性Wistar大鼠40只随机分为对照组和实验组,20只对照组大鼠给予背部皮下注射葵花油[1 m L/(kg·d)],20只实验组大鼠,按照2.0 mg/(kg·d)背部皮下注射鱼藤酮(鱼藤酮溶解在葵花籽油中)制备PD大鼠模型,共30 d。最后一次注射结束后实验大鼠迅速断头取材,采用分光光度法检测大鼠脑内纹状体中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化,采用Western blot检测两组大鼠中脑黑质中Nrf2、HO-1和NQO1的表达。结果对照组和实验组脑内纹状体中MDA含量分别为(6.51±1.45)、(18.13±2.14)nmol/mgprot,与对照组比较,实验组大鼠纹状体中MDA升高了64.09%(P<0.01)。对照组和实验组纹脑内状体中GSH含量分别为(44.53±4.71)、(26.41±2.52)mg/gprot,与对照组比较,实验组大鼠纹状体中GSH降低了40.69%(P<0.01)。对照组大鼠中脑黑质中Nrf2、HO-1和NQO1与β-actin免疫印迹条带相对吸光度比值分别为(0.81±0.05)、(0.84±0.07)和(0.91±0.15),实验组大鼠中脑黑质中Nrf2、HO-1和NQO1与β-actin免疫印迹条带相对吸光度比值分别为(0.42±0.06)、(0.49±0.03)和(0.33±0.04)。与对照组比较,实验组大鼠黑质神经元中Nrf2、HO-1和NQO1表达分别降低了48.15%、41.67%和63.74%(P<0.01)。结论氧化应激在PD发病中起着非常重要的作用,内源性抗氧化损伤通路Nrf2-ARE与PD的发病关系密切,可能是PD新的治疗靶点。

马兜铃酸肾病与代谢酶基因多态性的相关性研究

目的:探讨依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶(NQO1)和细胞色素P450 1A1(CYP1A1)基因多态性与马兜铃酸肾病(AAN)的相关性。方法:应用双相引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP),对90例AAN患者和159例健康对照组进行NQO1基因609位点和CYP1A1基因4889位点单核苷酸多态性的检测,比较两组基因型分布频率的差异。并将病例组按不同基因型分组,分析不同基因型与临床表现的关系。Logistic回归检验AAN患者发生重度贫血的影响因素。结果:CYP1A1A4889G基因型和等位基因分布频率在两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。AAN组NQO1C609T低表达基因型(TT+CT)分布频率高于对照组(76.7%vs65.4%,P<0.05);TT基因型患者重度贫血的发生率明显增高(P<0.05);Logis-tic回归分析提示NQO1C609T低表达基因型为AAN患者重度贫血的危险因素。结论:NQO1 C609T基因多态性与马兜铃酸肾病的发病有关,并且可能增加了AAN患者早期重度贫血的风险。

NQO1基因ns-cSNP与淮安汉族人群食管癌易感性的关系

目的探讨依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductasel,NQO1)基因非同义编码 SNP(C609T、C465T、G406C)与淮安汉族人群食管癌易感性的关系。方法采用1:1配对的病例-对照研究,选择淮安地区原发性食管癌患者和对照者各106例。采用 PCR-RFLP 和 AS—PCR 技术检测研究对象的基因型,比较不同基因型与食管癌易感性的关系。结果在对照组与病例组中均未检测到 NQ01 406C/C 基因型;未发现 NQO1 CA65T 多态性与淮安汉族人群食管癌易感性的关系;携带 NQ01 609T 等位基因的个体与对照组相比,其患食管癌的易感性升高(OR=4.76,95%CI=1.064～3.397)。结论 NQ01 C609T 基因多态可能与食管癌的发生有关。

亚洲人群NQO1 C609T基因多态性与胃癌易感性的Meta分析

目的探讨亚洲人群NQO1 C609T基因多态性与胃癌易感性关系。方法计算机检索数据库,收集有关亚洲人群NQO1 C609T基因多态性与胃癌病易感性关系病例对照研究,提取纳入文献的相关数据进行Meta分析,以病例组与对照组NQO1 C609T各种基因模型的比值比(OR)为效应指标,Egger's检验和Bgger's检验偏倚。结果共7篇研究符合纳入标准,累计病例数1 584例,对照组2 263例。meta分析表明NQO1 C609T基因多态性与胃癌病易感性有明显关联性。结论亚洲人群NQO1 C609T基因多态性与胃癌病易感性明显关联性[CC vs.TT;OR=1.19,95%CI:0.99,1.44,P=0.070;TC vs.TT:OR=1.10,95%CI:0.97,1.25,P=0.137;CC/TC vs.TT:OR=1.10,95%CI:0.98,1.22,P=0.100;CC vs.TC/TT:OR=1.19,95%CI:0.89,1.59,P=0.233]。

NQO1与乳腺癌研究进展

目的:总结了醌氧化还原酶〔NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1〕在乳腺癌的发生发展中可能起到的作用及其与乳腺癌防治的联系。方法:应用PubMed、Springer Link及CNKI期刊全文数据库检索系统,以"乳腺癌(breast cancer)、NQO1、单核苷酸多态性(SNP)、雌激素(estrogen)"等为关键词,检索2000-2012年的相关文献,共检索到英文文献93篇,中文文献2篇。纳入标准:1)NQO1的生物学特征;2)NQO1的基因定位及其多态性;3)NQO1在乳腺癌中发生发展的作用及其表达;4)NQO1与乳腺癌的治疗及预后。符合分析的文献28篇。结果:NQO1作为人体内一种可被多种物质诱导的还原酶,在很多癌组织中表达异常,它具有多种功能,包括对苯醌等醌类物质产生的细胞毒性的解毒、氧化应激状态下稳定p53蛋白的表达、防止雌激素及其代谢产物对人类细胞的毒性和致癌作用等。NQO1频繁的基因多态性导致了个体中此酶活性的降低或缺乏,可能增加了乳腺癌的易感性。结论:NQO1对雌激素的作用使其在雌激素依赖性恶性肿瘤乳腺癌的发病及防治中有着重要意义,是一个强大的预后预测指标。

CYP1A1和NQO1及EPHX1基因多态性与膀胱癌易感相关性分析

目的:探讨细胞色素P450 1A1(CYP1A1)、依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1(NQO1)和环氧化物水解酶(EPHX1)基因多态性与浙江地区膀胱癌易感性的关系。方法:采用病例对照研究方法,应用相对的2对引物-聚合酶链反应技术(PCR-CTPP),对99例膀胱癌患者和100例非肿瘤患者的CYP1A1A4889G、NQO1C609T和EPHX1A416G基因型进行检测,并分析其与膀胱癌易感性的关系。结果:NQO1C609T基因型分布频率在膀胱癌组和对照组之间的差异有统计学意义,P<0.05;携带609TT基因型的个体罹患膀胱癌的风险是携带609CC基因型个体的2.448倍(95%CI为1.125～5.326)。CYP1A1A4889G和EPHX1A416G基因型分布频率在两组间的差异均无统计学意义,P>0.05。携带NQO1 609TT与EPHX1 416AA两高危基因型的个体罹患膀胱癌的风险是同时携带两低危基因型个体的4.181倍(95%CI为1.465～11.934)。相类似的,携带CYP1A1 4889AG/GG、NQO1 609TT与EPHX1 416AA三高危基因型的个体罹患膀胱癌的风险则为4.765倍(95%CI为0.895～25.364)。结论:NQO1C609T基因多态性可能与膀胱癌的易感性相关,携带NQO1 609TT基因型的人群易患膀胱癌。而且,基因与基因(NQO1 609TT与EPHX1 416AA,CYP1A1 4889AG/GG、NQO1 609TT与EPHX1 416AA)的交互作用增加了这种风险。

NQO1基因多态性与膀胱癌易感性的关系

[目的]探讨浙江地区依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1（NQO1）基因多态性与膀胱癌易感性的关系。[方法]采用病例对照研究方法,应用相对的两对引物—聚合酶链反应技术（PCR-CTPP）,对99例膀胱癌患者和100例非肿瘤患者的NQO1C609T基因型进行检测,并分析其与膀胱癌易感性的关系。[结果]NQO1C609T基因型分布频率在膀胱癌组和对照组之间的差异具有统计学意义（P〈0.05）,携带609TT基因型的个体罹患膀胱癌的风险是携带609CC基因型个体的2.448倍（95%CI为1.125~5.326）。NQO1C609T基因型分布频率在膀胱癌不同病理分级和临床分期之间的差异均无统计学意义（P〉0.05）。[结论]NQO1C609T基因多态性可能与膀胱癌的易感性相关,携带NQO1609TT基因型的人群易患膀胱癌。

Nrf2、NQO1在足月胎膜早破产妇胎膜组织中的表达变化及临床意义

目的探讨足月胎膜早破(tPROM)产妇胎膜组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)和还原型辅酶/醌氧化还原酶1(NQO1)的表达变化及临床意义。方法选择2019年5月-2019年12月期间在陆军军医大学第二附属医院妇产科足月分娩的tPROM(>12h)产妇90例和正常对照组产妇50例。收集产妇分娩后的胎膜组织,采用免疫组化法检测Nrf2蛋白和NQO1蛋白表达,采用放射免疫沉淀法检测各组产妇胎膜组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、维生素E(VitE),硫代巴妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,并对胎膜早破的影响因素进行多因素非条件Logistic回归分析。结果tPROM产妇胎膜组织Nrf2和NQO1蛋白阳性表达率均低于正常对照组(P<0.01),且两者表达具有正相关性(rs=0.373,P<0.05)。tPROM产妇胎膜组织中CAT、SOD、VitE水平低于正常对照组(P<0.05),MDA水平高于正常对照组(P<0.05)。而且tPROM产妇胎膜组织中Nrf2蛋白阳性表达者或者NQO1蛋白阳性表达者CAT、SOD、VitE水平高于阴性表达者(P<0.05),MDA水平低于阴性表达者(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,Nrf2蛋白、NQO1蛋白是胎膜早破发生的独立影响因素。结论tPROM产妇胎膜组织中Nrf2蛋白和NQO1蛋白表达量降低与胎膜组织抗氧化应激能力减弱有关,可能在胎膜早破发生过程中发挥着重要作用。

姜油树脂对辐射后间充质干细胞Nrf2及其靶基因表达的影响

目的 探索姜油树脂对辐射后间充质干细胞中核转录因子E2相关因子2（Nrf2）及其下游靶基因表达变化的影响.方法 采用MTT、实时PCR以及Western Blot检测不同浓度姜油树脂、不同时间点处理后Nrf2及其下游靶基因血红素加氧酶（HO1）和还原型辅酶Ⅰ醌类氧化还原酶（NQO1）的表达变化.结果 姜油树脂对辐射后间充质干细胞中Nrf2基因本身的影响并不大,但在给予姜油树脂24h后,10-5和10-4g/ml姜油树脂联合照射组下游靶基因HO1和NQO1的mRNA及蛋白水平均有所上升.结论 姜油树脂不影响Nrf2的转录和表达,但可提高其下游抗氧化基因的表达,发挥辐射防护作用.