基于分子发夹/荧光微球的侧向层析法定量检测黄曲霉毒素B1

基于分子发夹/荧光微球探针构建了一种侧向层析定量检测黄曲霉毒素B1(AFB1)的新方法。一条含有AFB1适配体的分子发夹与荧光微球偶联后,形成的标记探针被喷涂在试纸条的结合垫上。一条5'端含有链霉亲和素的寡核苷酸序列包被在硝酸纤维素膜的检测线上,另一条包含有AFB1适配体互补链的寡核苷酸序列包被在硝酸纤维素膜的质控线上。当待测样本中含有AFB1时,AFB1先与标记物结合垫处标记探针中的AFB1适配体结合,同时,标记探针中的DNA分子发夹‘茎’的双链被打开,AFB1与标记探针形成的复合物层析到反应膜的检测区时,被检测区的寡核苷酸序列捕获,检测区出现亮线。利用该原理,通过一个"off-on"的光信号,实现了对AFB1的高灵敏检测。实验结果表明,AFB1在0.1~50μg/L质量浓度范围内,检测线处的荧光强度(T)和质控线荧光强度(C)的比值与AFB1质量浓度呈良好的线性关系,检出限(S/N=3)达0.05μg/L,且具有很高特异性,可实现对实际样品中AFB1的准确检测。

侧向层析法检测隐球菌荚膜多糖抗原在隐球菌感染诊断中的临床价值

目的了解隐球菌荚膜多糖抗原侧向层析法在临床检出隐球菌感染所致疾病的性能,为临床筛查隐球菌感染选择检验项目提供更好依据。方法收集四川大学华西医院2018年送检隐球菌荚膜多糖抗原病例资料。分析侧向层析法检测患者隐球菌荚膜多糖抗原对隐球菌感染所致疾病的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。对侧向层析法检出阳性并有明确临床诊断的样本与该例患者送检的墨汁染色法、真菌培养法结果进行比较分析。结果共检测721例。侧向层析法检测荚膜多糖抗原诊断隐球菌感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为100.00%、99.39%、93.93%、100.00%;墨汁染色法、真菌培养法及侧向层析法检测隐球菌感染的阳性率分别是63.46%、48.00%、100.00%。62例患者已明确临床诊断,其中隐球菌性脑膜炎45例(72.58%),隐球菌肺炎16例(25.81%),骨隐球菌感染1例(1.61%)。结论隐球菌荚膜多糖抗原-侧向层析法在检出隐球菌感染所致疾病中敏感性和特异性均较高,对临床早期筛查及辅助诊断隐球菌感染有较好临床应用价值,且操作快速简便,对检测人员的经验要求不高,适合各等级医院开展。

鳗鲡疱疹病毒基础RPA及RPA-LFD检测方法的比较

【目的】鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)是鳗鲡“脱黏败血综合征”的主要病原,对鳗鲡养殖产业造成了严重的经济损失。为达到早期预警和防止病毒扩增蔓延的目的,建立一套AngHV快速检测技术对中国鳗鲡养殖疾病防控具有重要意义。【方法】本研究根据AngHV ORF55设计了扩增引物和探针,建立了基于重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA)的基础RPA及RPA侧向流层析试纸条法(RPA-LFD)检测方法,探究了不同时间和温度对基础RPA和RPA-LFD扩增效果的影响,并比较了2种方法的灵敏度、特异性和临床应用效果。【结果】本研究建立的AngHV基础RPA及RPA-LFD快速检测方法扩增产物大小为394 bp;2种检测方法都仅需20~40 min即可完成检测过程;温度的变化对检测方法的影响不大,37~43℃范围内均能得到较好的扩增效果;2种检测方法均与鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus)、锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus)和鲤疱疹病毒(Cyprinid herpesvirus)无交叉反应,表现出良好的特异性;RPA-LFD检测方法具有更高的检测灵敏度,检出限至1.32×10^(0)copies/mL,基础RPA检出限至1.32×10^(3)copies/mL;检测实验室保存的20份鳗鲡病料DNA,2种方法检测的结果一致,阳性率均为30%,表明AngHV基础RPA和RPALFD检测方法均具有良好的临床应用潜力。【结论】AngHV基础RPA和RPA-LFD检测方法十分适用于基层科研单位、鳗鲡产品加工场及养殖场的病毒检测,丰富了AngHV检测手段的可选性。

3种方法检测艾滋病患者血和脑脊液中隐球菌的结果分析

目的比较真菌培养、墨汁染色、侧向免疫层析法(LFA)检测艾滋病患者脑脊液和血标本中隐球菌的阳性率差异,以期为临床医生提供隐球菌感染理想的检测方法。方法采用回顾性分析,收集2017年本院就诊的1 049例AIDS患者的血液和脑脊液标本,进行真菌培养、侧向免疫层析法和脑脊液墨汁染色。数据分析应用SPSS 14.0软件。结果 1 049例AIDS患者,其血培养、隐球菌抗原检测、脑脊液培养和墨汁染色阳性率分别为2.8%(19/688)、10.96%(115/1 049)、9.18%(29/316)、17.99%(59/328),其中201例患者同时做了脑脊液和血标本的隐球菌抗原检测,阳性率分别为27.86%和37.31%,差异有统计学意义(P<0.05)。292例AIDS患者同时做了脑脊液的墨汁染色和隐球菌抗原检测,阳性率分别为19.52%和23.97%,隐球菌抗原检测的阳性率大于墨汁染色法,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3种方法检测结果显示侧向免疫层析法阳性率最高,比较脑脊液和血标本侧向免疫层析法阳性率,血标本阳性率较高,所以血标本侧向免疫层析法检测是诊断AIDS是否合并隐球菌感染的理想方法之一。

新型冠状病毒抗原检测试剂性能评价相关研究进展

新型冠状病毒核酸检测阳性是确诊新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的金标准。但该项检测需要复杂的仪器,对技术人员专业素质要求高,且耗时较长,因此在应急大规模检测中具有一定的局限性。为满足疫情常态化防控和突发情况应急处理的需求,相关部门发布了新型冠状病毒抗原检测的指导意见,对在特定人群中开展新型冠状病毒抗原检测做出指导,为及时阻断病毒传播提供了新的思路。文章就新型冠状病毒抗原检测试剂性能相关研究进行综述。