基于LAMP-CRISPR-Cas12b-侧层析技术检测A、B型流感病毒的方法建立

目的为在疫情现场和基层医疗卫生机构实现对A、B型流感病毒的快速检测,而建立一种快速流感病毒诊断方法。方法将等温扩增技术与CRISPR-Cas12b系统联用,结合侧层析技术,建立基于LAMP-CRISPR-Cas12b-侧层析技术检测A、B型流感病毒的方法。设计A、B型流感病毒的特异性LAMP引物组及crRNA。采用梯度稀释法验证该方法的灵敏度;利用其他4种呼吸道病毒验证该方法的特异性;应用该方法对52例ILI监测样本进行检测,验证该方法的实用性。结果成功建立了LAMP-CRISPR-Cas12b-侧层析检测A、B型流感病毒的方法,最低检测极限为10 copies/μL;该方法特异性强,与其他4种呼吸道病毒无交叉反应;52例ILI监测样本结果与qRT-PCR一致,一致性好(kappa=1)。结论建立了一种适用于疫情现场和基层医疗卫生单位对流感病毒快速检测的方法。

侧流层析技术应用于真菌毒素检测的研究进展

近年来,侧流层析技术经过不断的完善和发展,其识别原件和示踪标记物有较大更新,该技术应用于真菌毒素检测的研究越来越多。本文基于侧流层析技术在真菌毒素检测方面的研究文献,梳理了各种识别原件和示踪标记物在真菌毒素检测中的应用,指出未来侧流层析技术应用于多种真菌毒素同时检测时应该关注的重点。

基于CRISPR/Cas12a的侧流层析检测HPV技术的建立

目的建立一种基于CRISPR/Cas12a的侧流层析技术检测人乳头瘤病毒(HPV)的方法,以实现对HPV的简单、准确、快速筛查。方法通过将CRISPR/Cas12a结合PCR技术与侧流层析技术对常见的10种高危型HPV质粒亚型进行检测验证其可行性;着重对HPV16、HPV52、HPV58、HPV59四种亚型进行灵敏性及特异性验证;并对31例HPV临床样本进行检测,验证基于CRISPR/Cas12a的侧流层析技术(Lateral Flaw Assay based CRISPR,LFAC)的临床检测效能。结果通过应用LFAC检测,结果表明10种高危型HPV质粒均能产生明显的检测条带,表明该检测系统具有稳定性;对HPV16、HPV52、HPV58、HPV59四种高危型HPV质粒检测结果表明,该方法具有高特异性与高灵敏度,灵敏度检测下限为1.04×10^(4)copies/μL;31例临床样本检测结果总符合率为96.77%,根据LFAC检测结果绘制ROC曲线,灵敏度为0.920,特异度为0.626。结论通过将PCR技术、CRISPR/Cas12a和侧流层析法结合建立一种基于CRISPR/Cas12a的侧流层析技术,实现对HPV的可视化检测,为HPV的快速筛查与诊断提供了技术思路。

侧流免疫层析技术在黄曲霉毒素B1检测中的研究进展

侧流免疫层析技术(lateral flow immunoassay,LFIA),是一种将色谱层析和免疫技术相结合的快速分析方法,为黄曲霉毒素B1(AFB1)的现场快速检测提供了一个良好平台。本文从比色和荧光两种方法介绍了侧流免疫层析技术在AFB1检测中的研究进展,重点阐述不同信号标记材料及其对应方法学,并讨论了目前免疫层析检测的不足及未来发展方向,以期为AFB1的现场即时检测提供参考。

基于侧流免疫层析技术制备胶体金试纸条检测莲子中黄曲霉毒素B_1的研究

目的基于侧流免疫层析技术制备一种适用于快速检测莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)的试纸条。方法利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,金颗粒标记单克隆抗体制成金标偶联物作为结合垫,特异性抗原(AFB1-BSA)和羊抗鼠Ig G二抗分别作为检测线和控制线。结果经组装测试,试纸条的灵敏度为2.5ng·m L-1,检测时间在10 min以内。在检测的23份莲子样品中,6份样品有AFB1,阳性样品经UFLC-MS/MS确证,试纸条假阳性和假阴性率为0。结论所制备的试纸条检测快速、操作简便、结果准确,适合大批量莲子中AFB1的现场检测。

侧流层析技术研究进展

在毛细管层析作用下,基于抗原抗体特异性结合或核酸探针和靶向核酸杂交反应来检测样品中的目标物质的侧流层析技术与传统检测方法相比,以其成本低、特异性强、稳定性高、节省时间、不需专业人员、可现场检验、结果肉眼可见等优势,广泛运用在人体临床医学、动植物医学、食品安全、环境监测等领域。本文重点介绍了侧流层析技术的背景、原理、设计以及国内外应用现状、发展前景等,以期为侧流层析技术的发展提供参考。

纳米颗粒在侧流免疫层析技术中的应用研究进展

侧流免疫层析技术(lateral flow immunoassay,LFIA)有效地结合了色谱分析卓越的分离能力和免疫分析的高度特异性,加之其便携性,使其为需要灵敏、定量的现场检测提供了一个理想的平台。LFIA中,标记物是影响其灵敏度的关键因素之一。目前,LFIA的检测性能主要通过使用纳米颗粒标记物来改善。纳米颗粒标记物按材料可分为有色纳米颗粒、发光纳米颗粒以及磁性纳米颗粒等。本文旨在归纳总结纳米颗粒作为标记物在LFIA中的最新研究进展,详尽解析了各类纳米颗粒对试纸条分析性能的改善情况,以期为研究者在设计试纸条时对适宜纳米颗粒的选择提供有力的技术支持。

磁性侧流层析技术在食品污染物快速检测中的研究进展

磁性侧流层析技术(MLFA)是一种将磁性纳米材料与侧流层析检测平台相结合的快速分析技术。在保留了传统侧流层析技术操作简单、快速实时、低成本优势的基础上,引入功能化磁性纳米材料,实现了复杂基质中目标物的选择性分离和富集,从而提高检测灵敏度和准确性。该文重点关注了近五年来MLFA技术在食品分析领域的研究进展,总结了磁性纳米材料的主要种类及MLFA的主要检测原理,并对食源性病原菌和真菌毒素、兽药等小分子有害物质的检测进行了介绍。最后,总结了MLFA技术的研究现状并对未来的发展方向进行了展望。

侧流免疫层析技术监控乳中致病因子的研究进展

随着乳品需求量的增加,其安全问题引起广泛关注。实时、快速、准确地检测乳中致病因子是解决乳品安全问题的重要保障。近年来,侧流免疫层析技术的发展为乳品中致病因子的现场检测提供了良好条件。本文针对乳中致病因子的监控,阐述了侧流免疫层析技术的原理,并针对增强显色的策略,新型纳米材料的应用与核酸扩增、智能手机技术的联用等增敏现状进行论述;并对多线型、多条型两种主要的高通量检测方法进行总结,旨在为实现乳中致病因子快速、高灵敏和高通量的现场监测提供理论指导。

重组酶聚合酶侧流层析技术检测新冠病毒核酸快速诊断方法的初步建立

目的建立重组酶聚合酶扩增侧流层析技术(RPA-LFD)检测新冠病毒(SARS-CoV-2)核酸快速诊断方法,为基层医院和边远地区防控新冠病毒疫情提供技术支持。方法根据新冠病毒N基因核苷酸序列中保守序列,通过生物信息学软件分析、设计和筛选最佳的重组酶聚合酶扩增引物及侧流层试纸探针,优化重组酶聚合酶扩增反应条件以及检验建立方法的灵敏性和特异性。结果利用RPA-LFD法在37℃下反应15 min可检测到每个反应最低100 fg含量的新冠病毒,并与流感病毒、副流感病毒、鼻病毒和腺病毒没有交叉反应,因此据此可以建立灵敏性高、特异性强和可操作性强的新冠病毒快速诊断方法。结论通过RPA-LFD技术建立的新冠病毒快速诊断方法可获得较为理想的灵敏度、特异性,为进一步研制新冠病毒核酸快速诊断试剂盒奠定了基础。

侧流免疫层析技术的研究进展

介绍了LFIA的基本组成,综述了其应用进展,包括在临床、食品安全及其他领域中的应用,展望了其发展趋势。未来的发展重点是对分析物进行灵敏的定量检测,使用手机对测试结果进行定量判读。LFIA检测方法中,基于AuNPs及其衍生物的光学方法最有可能发展并成为最可行的快速诊断实验技术之一。此外,使用具有较小热响应的基膜可进一步提高热敏LFIA检测方法的检测极限。随着微型机电系统技术、光电光源和传感器技术的进步及智能手机等移动设备的使用,将促进LFIA向智能化方向发展。

重组酶介导等温扩增-CRISPR/Cas13a结合侧流层析技术快速检测猴痘病毒

目的基于重组酶介导的等温扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)和规则成簇间隔短回文重复序列(cluste redregularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)-Cas13a(CRISPRassociated protein 13a)结合侧流层析技术(lateral flow assay,LFA)建立一种快速、灵敏、特异的猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)检测方法。方法针对MPXV的F3L段基因设计其RAA扩增引物、CRISPR RNA(crRNA)、荧光报告探针及LFA探针,对反应条件进行优化,建立RAA-CRISPR/Cas13a-LFA检测体系,评价该体系的检测灵敏度与特异性,并与实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测结果进行一致性比较,同时应用实际临床样本验证该检测体系的准确性。结果RAA-CRISPR/Cas13aLFA检测体系可以在60 min内(包括实验操作)完成检测,该体系对病毒DNA的检出限为18拷贝/反应;特异性试验表明其与水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)、EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)、柯萨奇病毒A16型(CVA16)、肠道病毒A组71型(EV-A71)、麻疹病毒(measles virus,MeV)均无交叉反应;临床样本检测结果表明,RAA-CRISPR/Cas13a-LFA与qPCR法之间的差异无统计学意义,二者具有良好的检测一致性(Kappa=0.892)。RAACRISPR/Cas13a-LFA检测体系的灵敏度和特异度分别为100.0%和83.3%,阳性预测值为96.6%,阴性预测值为100.0%。结论建立的RAA-CRISPR/Cas13a-LFA检测体系可快速、灵敏、特异地检测MPXV。

侧流层析技术在大肠杆菌O157:H7检测中的应用

大肠杆菌O157:H7作为一种常见的食源性致病菌,在低感染剂量下即可导致人类患严重疾病。侧流层析技术(LFCA)由于其具有高效分离的特性,能够满足食品中大肠杆菌O157:H7的快速检测需求。然而,目前广泛应用的LFCA方法,信号强度较弱,检测灵敏度较低,难以实现样本中低浓度大肠杆菌O157:H7的检出。因此,本文重点整理了近年来出现的新型侧流层析技术,围绕检测效率、灵敏度进行了系统性归纳,比较各方法的优势与短板,为大肠杆菌O157:H7侧流层析检测技术的发展提供重要结论性指导。

基于核酸等温扩增的侧流层析试纸条在病原微生物检测中的研究进展

传统的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增方法具有较高的灵敏度、特异性和技术成熟性,但PCR仪成本高、操作复杂,且易出现假阳性。因此更为简单、便捷、低成本的基于核酸等温扩增的试纸条快速检测技术逐渐发展起来。目前,核酸等温扩增技术被应用于细菌、病毒等病原微生物的检测,其在食品安全中食源性致病菌的监管等方面也有着广阔的应用前景,因此受到广泛的关注。本文介绍了侧流层析技术的检测原理,总结了目前常用的核酸等温扩增技术及其在食源性致病菌检测方面的应用,并对其发展前景进行了展望,以便于掌握该技术的发展趋势,为相关学术研究提供研究思路。

核酸适配体侧流层析技术在微生物检测中的应用

侧流层析技术是一种简单、快速、经济、高效的检测方法,能够在非实验室环境下快速地提供测试结果,具有灵敏度高、操作简便、环境友好等优点.核酸适配体是一种新型的“化学抗体”,能够在短期内完成体外人工合成,且易于修饰、稳定性好、价格低廉.将侧流层析技术与适配体相结合,可以开发出新的快速检测技术.该技术可广泛用于食品安全、环境、临床等领域的定性、半定量及定量检测.本文介绍了近年来利用不同结构模式及标记类型的适配体,通过多种检测方式对微生物,尤其是对致病菌进行快速检测,以期为核酸适配体侧流层析技术的发展提供借鉴.

致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌RAA-LFD快检方法的建立

为建立一种简单、快速的现场检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)的方法,根据VpAHPND pVA1质粒pirB基因保守序列设计RAA-nfo特异性引物和探针,建立了VpAHPND核酸RAA-LFD检测方法。该方法特异性强,仅对VpAHPND特定毒力株核酸检测为阳性,与副溶血弧菌非毒力株、霍乱弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病病毒(IHHNV)、十足目虹彩病毒(DIV1)、虾肝肠胞虫(EHP)等病原核酸无交叉反应;灵敏度高,最低可检测到3.8×10^(2) CFU/mL的菌体细胞,质粒检测限为1.17×10^(1) copies/μL;检测时间短,37℃恒温反应20 min,以LFD显色5 min后即可完成结果判定;同时该方法具有良好的重复性和可信度,利用该方法和世界动物卫生组织(WOAH)推荐的qPCR方法平行检测58株副溶血弧菌分离株,二者符合率为100%。结果表明,本研究建立的RAA-LFD方法特异、灵敏、反应快速、操作简单且结果肉眼可视,适用于VpAHPND的现场快速检测。