人类白细胞相关抗原G与复发性流产患者滋养细胞侵袭功能

复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）是指同一伴侣连续发生3次及3次以上的自然流产[1]。其发生率占妊娠的1%~2%,其中40%~60%经各种临床检查未发现明确病因称不明原因复发性流产。目前的主要治疗方案为免疫治疗,但是仍然有20%~40%失败率。众多的研究证明HLA-G的表达水平与器官移植及妊娠的成功率呈明显正相关。

ACK1在子痫前期孕妇胎盘中的表达及其对滋养细胞侵袭功能的调控

目的:探究ACK1(Activated Cdc42-binding Kinase)在子痫前期孕妇胎盘中的表达及其对滋养细胞侵袭功能的调控机制。方法:选取2017年8月1日-2018年8月1日于本院产科计划行剖宫产手术的32例子痫前期孕妇作为研究组,并选取同期32例正常足月孕妇作为对照组,分别收集两组胎盘组织。采取免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(WB)检测胎盘组织中ACK1的表达情况。滋养细胞株(HTR8/SV neo)分为常氧对照组(A组)、缺氧/富氧组(B组)及ACK1基因序列慢病毒敲降组(C组),通过Transwell实验分析检测各组细胞的侵袭情况。使用Western blot检测各组细胞中ACK1蛋白,金属蛋白质酶(MMP)-9及其特异性抑制因子(TIMP)-2的蛋白表达差异。结果:通过IHC检测,对照组中ACK1表达显著,定位主要显示在滋养细胞中。通过对两组孕妇胎盘组织进行Western Blot分析,研究组胎盘组织中ACK1的表达含量明显低于对照组(P<0.05)。C组转染HTR-8/SVneo细胞效率为99.81%,可供后续研究使用。通过定量分析,H/R和ACK敲降能够使HTR-8/SVneo细胞ACK1表达水平分别降低66%和73%,A组未经处理HTR-8/SVneo细胞穿透入小室细胞数为112.315±9.877,B组经过H/R处理穿透入小室细胞数为36.423±6.871,C组经ACK1敲降穿透入小室的细胞数为28.971±3.541。B组、C组与A组相比穿透入小室细胞数明显降低,表明侵袭能力显著降低。此外,B组和C组均能够减弱MMP-9的表达,同时增强TIMP的表达。结论:子痫前期孕妇胎盘ACK1表达水平下降可使滋养细胞的侵袭功能降低,血管重铸功能减弱,导致子痫前期发病。

NOD1配体抑制人早孕期滋养细胞的侵袭功能

目的:明确固有免疫受体NOD1对人早孕期滋养细胞侵袭功能的调控及对侵袭相关因子分泌的影响。方法:采用免疫细胞化学法鉴定原代滋养细胞NOD1的表达,用transwell侵袭实验检测激活NOD1后滋养细胞侵袭功能的改变,ELISA检测配体刺激后滋养细胞MMP2和MMP9的分泌情况。结果:免疫细胞化学结果显示滋养细胞分离鉴定成功,且原代滋养细胞可以表达固有免疫受体NOD1。使用NOD1的特异性配体及非特异性配体,发现激活NOD1可以抑制滋养细胞的侵袭,且非特异性配体LPS可以下调侵袭相关金属基质蛋白酶分子MMP2和MMP9的分泌,特异性配体i E-DAP仅下调MMP9的分泌而对MMP2的分泌无影响。结论:固有免疫模式识别受体NOD1可以在早孕期滋养细胞表达,可调控滋养细胞的侵袭功能,其激活会导致侵袭相关分子MMP2和MMP9的分泌下降。

放射性药物FAK抑制剂靶向肿瘤侵袭力的作用研究

[目的]化学合成、放射性核素标记局部黏着斑激酶(FAK)抑制剂,评价新型放射性药物FAK抑制剂对恶性肿瘤组织侵袭力靶向示踪及治疗的潜在应用价值。[方法]以恶性肿瘤组织高表达FAK为靶点,利用计算机辅助药物设计方法的优势,经计算机模拟设计、化学合成新型FAK小分子抑制剂化合物,通过药物有效性筛选后,选择与FAK受体特异性结合,明显抑制肿瘤细胞增殖、侵袭能力的FAK抑制剂化合物,研究放射性核素碘标记方法,评价核素标记FAK小分子抑制剂的理化性质及体内外稳定性。[结果]对97个FAK抑制剂分子进行了3D-QSAR计算,得到FAK抑制剂的有效骨架结构,在此基础上进行不同结构修饰,设计并合成17个新型FAK小分子化合物。细胞活力实验检测发现FAK小分子抑制剂及其稳定碘标志物对恶性肿瘤细胞的毒性作用存在明显的差异。其中,对与恶性肿瘤细胞特异性结合的化合物3进行放射性核素125I标记,标记率达49%以上。应用HPLC对放射性核素标记化合物进行放化纯分析及稳定性研究发现125I标记化合物3在体外能够稳定存在。[结论 ]新型放射性药物FAK抑制剂靶向结合FAK位点,对多种恶性度较高,侵袭、转移能力较强的肿瘤靶向示踪和放射性核素靶向治疗具有潜在应用价值。