HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭和增殖能力的影响

目的:探讨外源性高迁移率蛋白(High Mobility Group Box 1,HMGB1)对绒毛外滋养细胞(HTR8/SVneo细胞)侵袭和迁移能力的影响。方法:①确定HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭性的影响HTR8/SVneo细胞随机分为正常对照组及50μg/L、100μg/L和200μg/L外源性HMGB1刺激组,分别培养6 h、12 h、24 h、48 h,收集不同时间点不同刺激浓度的细胞,采用Transwell体外侵袭实验检测HTR8/SVneo细胞的侵袭性。②确定HMGB1对细胞增殖的影响:细胞随机分为正常对照及50μg/L、100μg/L和200μg/L外源性HMGB1刺激组.分别培养6 h、12 h、24 h、48 h,收集不同时间点不同刺激浓度的细胞,以CCK8方法检测细胞的增殖水平。结果:①HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭性的影响:收集不同时间点、不同刺激浓度的细胞,统计不同时间点、不同刺激浓度的细胞数量,不同时间之间差异有统计学意义(F=204.076,P<0.001);时间与刺激浓度之间存在交互效应(F=16.158,P<0.001);②HMGB1对细胞增殖的影响:不同时间因素之间有统计学意义(F=116.853,P<0.001);时间与处理因素之间不存在交互效应(F=1.933,P>0.05)。结论:外源性HMGB1可以增强绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo的侵袭能力和迁移能力。

HAI-1基因对前列腺癌LNCaP细胞迁移、侵袭和增殖的调控机制

目的探究HAI-1基因对前列腺癌LNCaP细胞迁移、侵袭和增殖的调控机制。方法培养前列腺癌LNCaP细胞和MRC-5人成纤维细胞,构建逆转录病毒表达系统,用活性逆转录病毒原液转导MRC-5细胞,用酵母表达系统重组HAI-1和HAI-2,检测HAI抑制HGF的影响和调节癌症转移的潜力。构建在人成纤维细胞系中诱导HAI表达的逆转录病毒表达系统,检测生物活性肝细胞生长因子(HGF)的表达和活性。前列腺癌LNCaP细胞的转移影响。合成了重组HAI蛋白。检测重组HAI的抑制成纤维细胞介导的前列腺癌侵袭。利用核酶转基因研究前列腺癌LNCaP细胞系中消除HAI-1和HAI-2表达对前列腺癌LNCaP细胞的迁移,增殖和侵入的影响。结果对照组平均侵入23.1±3.9的前列腺癌LNCaP细胞。培养的野生型和MRC-5^(CONTROL)成纤维细胞在体系中产生大量活性HGF,与对照相比,前列腺癌LNCaP细胞侵袭水平增加。HGFA抑制剂能单独地够将由成纤维细胞产生的活性HGF水平降低50%。同时工作的HAI-1和HAI-2抑制了75%HGF产生。前列腺癌LNCaP细胞系的HAI-1或HAI-2的损失导致这些细胞中的加速生长。结论前列腺癌LNCaP细胞系中消除HAI-1和HAI-2表达显著增强了这些前列腺癌LNCaP细胞的迁移,增殖和侵入能力。

MiR-150-5p靶向TP53对结直肠癌细胞侵袭和增殖的影响

目的:探索miR-150-5p靶向调控TP53基因对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)在临床和生物学的相关性,研究miR-150-5p调控TP53基因在结直肠癌细胞增殖和侵袭病变中的作用。方法:收集临床手术切除并病理证实的结直肠癌患者的手术及血浆样本(结直肠癌和癌旁组织)60例,另选取癌旁正常粘膜10例,腺瘤30例。根据瘤体直径分为肿瘤>5 cm(n=30)和≤5 cm(n=30)。q RT-PCR法测定样本中miR-150-5p表达,荧光素酶活性测定以确定TP53是否为miR-150-5p的靶基因。使用SW480细胞株,进行Transwell小室检测细胞侵袭能力,CCK-8检测细胞增值能力,对miR-150-5p进行生物信息学分析。结果:TP53是miR-150-5p的下游基因。癌组织及血浆中miR-150-5p表达量低于癌旁组织,直径>5 cm瘤体中的miR-150-5p表达量显著低于直径≤5 cm瘤体,Ⅰ-Ⅱ期结直肠癌组织中的miR-150-5p表达显著高于Ⅲ-Ⅳ期(P<0.05)。上调miR-150-5p后,细胞中TP53表达下降,下调miR-150-5p后,TP53表达升高;CCK-8增殖试验显示细胞中miR-150-5p过表达组抑制细胞增殖(P<0.05)。结论:Mi R-150-5p在结直肠癌组织和细胞中显著低表达,miR-150-5p通过靶向调节TP53抑制人CRC细胞的侵袭和增殖,有望成为结直肠癌治疗的新靶点。

S100钙结合蛋白A16促进肺腺癌增殖和侵袭进展的研究

目的探讨S100钙结合蛋白A16在肺腺癌(LUAD)组织中的表达水平对患者预后的影响,以及敲低S100A16对肺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用免疫组化技术检测肺癌组织芯片中S100A16的表达水平。根据S100A16在肿瘤组织中的表达水平进行免疫组化评分,统计分析S100A16的表达与临床病理参数及患者预后的关系。通过GEPIA2.0数据库分析S100A16在肺腺癌组织和正常组织中的基因表达,将S100A16在肺癌细胞系敲低后,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过EdU实验检测肺癌细胞的增殖能力。结果免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,肿瘤组织中S100A16表达水平显著上调,并且S100A16表达水平升高与淋巴结转移、肿瘤分期、远处器官转移有关(P<0.05),而与分化程度、年龄、性别无关(P>0.05)。生存分析显示肿瘤组织中S100A16表达水平越高,患者的预后越差(P<0.001)。体外实验显示,抑制S100A16的表达,则遏制肿瘤细胞的增殖和侵袭能力(P<0.001)。结论在肺腺癌组织中S100A16的表达水平升高,其表达水平与临床病理参数有关。S100A16的表达水平升高的患者预后往往较差。S100A16的表达水平可以调控肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。

Wnt/β-catenin信号通路对重度子痫前期患者胎盘滋养层细胞侵袭和增殖的影响

为了阐明Wnt/β-catenin信号通路在子痫前期发生发展中的作用机制,本研究应用RT-PCR检测了子痫前期和正常妊娠妇女胎盘中的Wnt1、β-catenin和cyclinD1的mRNA水平。通过Western blotting检测了Wnt1、β-catenin、Dickkopf-1 (DKK1)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白的表达水平。使用免疫组化定位胎盘中Wnt1、β-catenin和DKK1蛋白的表达。研究显示,与对照组正常胎盘相比,重度子痫前期胎盘中Wnt1、β-catenin和cyclinD1的mRNA表达水平显著降低。Western blotting结果显示,对照组Wnt1、β-catenin和GSK-3β蛋白表达水平显著升高,而DKK1表达水平显著降低。此外,与对照组相比,子痫前期组胎盘中Wnt1和β-catenin的染色强度较弱,而DKK1的染色强度明显增强。说明子痫前期患者胎盘中Wnt/β-catenin信号通路及其下游靶基因被抑制,导致滋养层的侵袭和增殖能力降低,从而促进了子痫前期的发生发展。

E3泛素连接酶TRIM59 在肺癌肿瘤相关巨噬细胞中的表达及临床意义

目的:探讨E3泛素连接酶TRIM59在肺癌肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中的表达水平与临床病理参数的关系以及对患者预后的影响。方法:采用多重荧光免疫组化技术(mIHC)检测E3泛素连接酶TRIM59在肺癌TAMs中的表达水平。根据E3泛素连接酶TRIM59在肺癌TAMs中的表达水平及平均荧光强度(MFIs)评分,统计分析E3泛素连接酶TRIM59的表达与临床病理参数(如肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期)及患者预后的关系。体外通过上调或下调巨噬细胞(THP-1源性巨噬细胞)中TRIM59的表达水平来进一步验证TAMs中TRIM59的表达水平对肺癌细胞功能的影响。结果:mIHC结果显示,与癌旁组织中的巨噬细胞相比,TAMs中E3泛素连接酶TRIM59的表达水平显著上调,并且TAMs中E3泛素连接酶TRIM59高表达与淋巴结转移、肿瘤分期、远处器官转移有关(P<0.05)。生存分析显示,TAMs中E3泛素连接酶TRIM59表达水平升高,则患者的预后结果较差(P<0.001)。Transwell实验和细胞克隆形成实验表明,巨噬细胞过表达TRIM59促进了肿瘤细胞的侵袭和增殖(P<0.01),与此相反,抑制巨噬细胞TRIM59的表达,则遏制肿瘤细胞的侵袭和增殖(P<0.01)。结论:E3泛素连接酶TRIM59在肺癌TAMs中的表达水平升高,其表达水平与临床病理参数有关。TAMs中TRIM59的表达水平升高则患者的预后较差。TAMs中TRIM59的表达水平升高促进了肿瘤细胞的侵袭和增殖能力。