eIF-4E腺病毒载体构建及对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响

目的:构建乳腺癌真核细胞起始因子——4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF-4E)基因重组腺病毒载体,并观察其对乳腺癌细胞MCF-7转移能力的影响。方法:应用基因重组技术将eIF-4E基因构建于腺病毒载体pAD-X,转染293包装细胞得到高滴度重组腺病毒,并用real-time PCR进行eIF-4E基因表达的验证。将重组腺病毒pAD-eIF-4E感染MCF-7细胞,应用siRNA封闭eIF-4E后通过transwell小室法观察其对细胞侵袭和运动能力的影响。结果:酶切结果与预期相符,real-time PCR可检测到转染后MCF-7细胞有eIF-4E基因过表达。且病毒转染后transwell小室可见,与eIF-4E过表达组相比较,eIF-4E siRNA封闭组MCF-7细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(均为p<0.01)。结论:重组eIF-4E腺病毒载体正确构建,抑制eIF-4E的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和运动都有抑制作用。

封闭EFNA2基因表达对肝癌细胞HepG2的转移和运动的抑制作用

目的:构建Ephrin-A2(EFNA2)基因的干扰RNA重组腺病毒,并观察其对肝癌细胞HepG2转移能力的影响。方法:合成EFNA2基因的干扰RNA片段,用基因重组技术构建于腺病毒载体pAD-X,经293细胞包装得到高滴度重组腺病毒pAEFNA2/siRNA,并用real-time PCR进行EFNA2基因表达的验证。将重组腺病毒pAEFNA2/siRNA感染HepG2细胞,48h后用transwell小室法检测病毒对HepG2细胞侵袭和运动能力的影响。结果:经验证病毒正确构建,且HepG2细胞感染病毒pAEFNA2/siRNA后48小时的real-time PCR检测结果未见到有EFNA2基因的表达。病毒感染后transwell小室可见,HepG2细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(分别为105±12 v.s.21±7cells/孔和194±22 v.s.39±11,P<0.01)。结论:成功构建了重组EFNA2siRNA腺病毒,并观察到封闭EFNA2对肝癌细胞HepG2的侵袭和运动均有抑制作用。

特异性eIF-4E siRNA重组腺病毒构建及其对人卵巢癌细胞SKOV-3转移相关能力的影响

目的:构建表达真核细胞起始因子-4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF-4E)特异性siRNA的重组腺病毒载体,观察其对人卵巢癌细胞SKOV-3体外转移能力的影响。方法:应用基因重组技术将eIF-4E siRNA序列构建于腺病毒载体pLP-Ade-X,经包装细胞包装后得到高滴度重组腺病毒pLP-Ade-4EsiRNA(psiE)。将腺病毒psiE感染SKOV-3细胞,用定量PCR进行eIF-4E基因表达检测,然后应用transwell小室法观察对细胞侵袭和运动能力的影响,同时检测感染后细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:病毒检测结果与预期相符,real-time PCR可检测到感染重组腺病毒psiE后SKOV-3细胞没有eIF-4E基因表达;病毒感染后transwell小室法检测到SKOV-3细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(均为P<0.01);此外病毒感染的SKOV-3细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低。结论:封闭eIF-4E基因表达对人卵巢癌细胞SKOV-3的侵袭和运动都有抑制作用,其作用机制可能与VEGF、MMP-2、MMP-9表达相关。