TLR4信号介导内膜间质细胞侵袭增殖促子宫腺肌症发病的研究

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)信号活化内膜间质在腺肌症发生与发展中的调控作用。方法:Western blot法检测腺肌病在位子宫内膜及病灶内膜中TLR4表达情况;建立原代间质体系,lipopolysaccharide(LPS)刺激靶细胞,CCK-8技术观察细胞增殖活力;Western blot法检测TLR4核心信号表达;Western blot法和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测和分析间质细胞炎性增殖及侵袭生长相关因子表达;采用TLR4拮抗剂VIPER处理细胞,验证TLR4信号对间质生物效应的影响。结果:TLR4表达于细胞质膜,在腺肌症病灶内膜中表达最高;LPS刺激使间质细胞活力增强、TLR4核心信号及增殖侵袭因子表达增加;VIPER可抑制上述因子表达。结论:LPS/TLR4信号活促进内膜间质细胞炎性增殖、侵袭生长,在子宫腺肌症发病中发挥重要作用,提示宫腔感染可能与腺肌病发病具有一定的相关性。

褐藻聚合酚下调TGF-β_(1)/Smads信号通路抑制大肠癌细胞增殖与侵袭

目的探讨褐藻聚合酚(PFFE-A)对大肠癌细胞增殖与侵袭的影响,以及其对转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))及母体抗生物皮肤生长因子同源物2/3(Smad2/3)通路的调控作用。方法细胞分组:依次以50、100、150μmol·L-1的小、中、大剂量的PFFE-A干预细胞,另设立正常对照组细胞。5-乙炔基-2'脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞的增殖;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;异种种植结肠癌裸鼠模型检测细胞的体内生长与转移能力;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中上皮间质转化(EMT)相关基因的表达;Western blotting检测细胞中TGF-β_(1)、p-Smad2/3的表达水平。结果与正常对照组比较,PFFE-A小、中、大剂量组细胞的增殖率、侵袭细胞数、肿瘤瘤体质量、病灶转移比例、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的mRNA的表达、TGF-β_(1)和p-Smad2/3的表达明显下降(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA的表达明显升高(P<0.05),具有明显的剂量依赖性(P<0.05)。结论PFFE-A能抑制肿瘤细胞的EMT过程,抑制大肠癌细胞HT29的体外增殖与侵袭能力,下调其体内生长与转移的能力,这可能是通过下调TGF-β_(1)/Smads信号实现的。

敲低核糖体发生蛋白BRIX1能够抑制三阴乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨核糖体生物发生蛋白BRX1同源物(BRIX1)在三阴乳腺癌(TNBC)中的功能。方法通过GEPIA2数据库分析BRIX1在正常组织和三阴乳腺癌的表达差异;设计两条siRNA并分别转入三阴乳腺癌细胞系HS578T和MDA⁃MB⁃231细胞内沉默BRIX1的表达,利用Western Blot验证BRIX1的敲低效率;使用CCK⁃8和集落克隆形成实验检测敲低BRIX1后细胞的增殖情况,使用Transwell实验检测敲低BRIX1后细胞的侵袭迁移能力;使用MDA⁃MB⁃231细胞,分为三组分别转入siNC、siBRIX1#1、siBRIX1#2后提取细胞的total RNA进行RNA⁃seq检测,进行基因表达差异分析。结果GEPIA2数据库结果显示三阴乳腺癌中高表达BRIX1(P<0.05),在HS578T和MDA⁃MB⁃231细胞内敲低,克隆形成数目减少(P<0.05);cck⁃8检测OD值减弱,证明敲低BRIX1后细胞增殖活性下降;TranswellTM实验显示敲低BRIX1后,乳腺癌侵袭迁移能力减弱;RNA⁃Seq数据进行GO功能富集分析生物学过程(BP),分子功能(MF),细胞组成(CC),最终展示了top10相关性较高的信号通路,结果显示敲低BRIX1后,ERBB⁃ERK信号通路和WNT信号通路被激活,P53信号通路被抑制。结论BRIX1基因敲低后明显抑制三阴乳腺癌细胞的增殖能力和迁移侵袭,提示BRIX1基因具有成为三阴乳腺癌治疗的潜在分子靶点。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

S100A10可促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭:基于激活AktmTOR信号通路

目的探讨S100钙结合蛋白A10(S100A10)在肺腺癌(LUAD)的表达水平及对患者预后的影响,以及S100A10对肺癌细胞增殖和转移的调控作用和作用机制。方法采用免疫组化技术(IHC)检测S100A10在LUAD及癌旁组织中的表达水平。Western blot、CCK-8和EdU、Transwell实验分别测定S100A10蛋白的表达水平、细胞增殖和侵袭能力。通过基因集富集分析(GSEA)S100A10在肺腺癌中可能的调控通路。分别将A549-shS100A10和A549-shCtrl细胞,H1299-S100A10和H1299-GFP的细胞注射到裸鼠皮下,观察S100A10的表达水平对肿瘤增殖的影响。结果与癌旁组织相比,肿瘤组织中S100A10的表达水平显著上调,并且S100A10表达水平升高与淋巴结转移、肿瘤分期、远处器官转移有关(P<0.05),而与分化程度、年龄、性别无关(P>0.05)。生存分析显示,肿瘤组织中S100A10表达水平越高,患者的预后越差(P<0.001)。体外实验显示,上调S100A10的表达,促进了肿瘤细胞的增殖和侵袭能力(P<0.001)。GSEA分析显示S100A10高表达显著富集至糖代谢、糖酵解、mTOR信号通路等基因集。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明,上调S100A10促进葡萄糖消耗和乳酸的生成,相反,下调S100A10抑制葡萄糖消耗和乳酸的生成。Western blot实验显示,S100A10能够促进Akt-mTOR信号通路激活。裸鼠移植瘤实验结果表明,上调S100A10的表达促进肿瘤增殖,而下调S100A10的表达则抑制肿瘤增殖(P<0.001)。结论S100A10通过激活Akt-mTOR-糖酵解信号通路,进而促进肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。

下调环状RNA Hsa-circ-PVT1对子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞增殖、侵袭及血管生成作用机制的影响

目的:探讨环状RNA浆细胞瘤变体易位1(Hsa-circ-PVT1)对子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞增殖、侵袭和血管生成的影响,以及其对微小RNA145(miR-145)和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)基因的调控机制。方法:qRT-PCR检测子宫腺肌病异位子宫内膜中Hsa-circ-PVT1、miR-145表达。双荧光素酶实验检测Hsa-circ-PVT1和miR-145的关系。生物信息数据库TargetScanHuman、miRDB、miRactDB预测miR-145的下游靶点。细胞分组:Hsa-circ-PVT1-inhibitor-NC+miR-145-antagomir-NC+si-MAPK1-NC(NC)、Hsa-circ-PVT1-inhibitor(inhibitor)、Hsa-circ-PVT1-inhibitor+miR-145-antagomir(inhibitor+antagomir)、Hsa-circ-PVT1-inhibitor+miR-145-miR-145-antagomir+si-MAPK1(inhibitor+antagomir+si)、正常细胞(normal组)。EDU检测各组细胞增殖,Transwell小室检测各组细胞侵袭能力;小管形成实验检测各组细胞血管生成能力;Western blot法检测各组细胞中MAPK1、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。结果:子宫腺肌病异位子宫内膜中Hsa-circ-PVT1表达明显升高,miR-145表达明显下降,双荧光素酶证实Hsa-circ-PVT1靶向miR-145的表达,miR-145下游靶标为MAPK1。与normal组Y14细胞相比,inhibitor组细胞增殖、侵袭及血管新生的性能明显降低,inhibitor+antagomir组能部分逆转这一抑制作用,而inhibitor+antagomir+si组能部分恢复这一作用,差异均有统计意义(均P<0.05)。结论:子宫腺肌病异位子宫内膜中Hsa-circ-PVT1表达明显升高,Hsa-circ-PVT1能靶向miR-145调控MAPK1表达,抑制Hsa-circ-PVT1表达能明显抑制间质细胞的增殖、侵袭及血管生成。

S100钙结合蛋白A16促进肺腺癌增殖和侵袭进展的研究

目的探讨S100钙结合蛋白A16在肺腺癌(LUAD)组织中的表达水平对患者预后的影响,以及敲低S100A16对肺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用免疫组化技术检测肺癌组织芯片中S100A16的表达水平。根据S100A16在肿瘤组织中的表达水平进行免疫组化评分,统计分析S100A16的表达与临床病理参数及患者预后的关系。通过GEPIA2.0数据库分析S100A16在肺腺癌组织和正常组织中的基因表达,将S100A16在肺癌细胞系敲低后,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过EdU实验检测肺癌细胞的增殖能力。结果免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,肿瘤组织中S100A16表达水平显著上调,并且S100A16表达水平升高与淋巴结转移、肿瘤分期、远处器官转移有关(P<0.05),而与分化程度、年龄、性别无关(P>0.05)。生存分析显示肿瘤组织中S100A16表达水平越高,患者的预后越差(P<0.001)。体外实验显示,抑制S100A16的表达,则遏制肿瘤细胞的增殖和侵袭能力(P<0.001)。结论在肺腺癌组织中S100A16的表达水平升高,其表达水平与临床病理参数有关。S100A16的表达水平升高的患者预后往往较差。S100A16的表达水平可以调控肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。

Syndecan-1基因沉默抑制胶质瘤A172细胞增殖和侵袭

目的探讨多配体蛋白多糖-1(Syndecan-1,SDC1)在不同胶质瘤细胞株中的表达水平及其沉默对A172细胞的增殖和侵袭的影响。方法通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western Blotting分析SDC1在不同胶质瘤细胞株中的表达水平;将携带SDC1 sh RNA的慢病毒载体感染A172细胞,稳定沉默的细胞株为干扰组,未转染为阴性对照组,转染scramble序列为空白对照组;采用MTT法、台盼蓝拒然法和流式细胞术检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭力;q RT-PCR和Western Blotting检测相关蛋白变化。结果SDC1在不同的胶质瘤细胞株中表达强度不同,差异具有统计学意义(P<0.05)。成功构建稳定沉默SDC1的A172细胞株;与阴性对照组和空白对照组相比,干扰组细胞增殖受到抑制(P<0.05),迁移力(58.40±5.24 vs.255.8±16.09、226.5±22.84,F=126.4,P<0.05)和侵袭力(61.67±16.26 vs.233.70±17.24、244.30±28.15,F=69.87,P<0.05)明显抑制;SDC1、PCNA和MMP-9 m RNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论沉默SDC1基因的表达可抑制胶质瘤A172细胞的增殖、迁移和侵袭,提示SDC1可能成为胶质瘤生物治疗的新靶点。

胃癌组织ANGPTL2表达水平及其对胃癌细胞增殖侵袭的影响

目的探究血管生成样蛋白2(ANGPTL2)水平变化对胃癌细胞增殖与侵袭的影响。方法选择2015年12月至2017年12月于我院住院的胃癌患者60例为研究对象,以其癌组织及癌旁组织作为此次研究的实验组与对照组。Western blot检测ANGPTL2表达水平,分析ANGPTL2含量与临床参数的关系,同时,分析GES-1、N87、SGC7901、BGC823、PAMC82胃细胞株中ANGPTL2的表达情况。过表达/沉默ANGPTL2后,MTT与Transwell试验检测ANGPTL2对细胞增殖率的影响。结果肿瘤恶性程度越高,ANGPTL2的表达水平也越高;Western Blot结果提示与GES-1相比,N87、SGC7901、BGC823、PAMC82胃癌细胞株中ANGPTL2的蛋白水平均呈较高水平(P <0.05);过表达ANGPTL2后,PAMC82胃癌细胞增殖能力及侵袭能力增强,而沉默ANGPTL2,其增值、侵袭能力减弱,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 ANGPTL2在胃癌组织的表达水平较癌旁组织更高,且恶性程度越高ANGPTL2表达越高。其能加速胃癌细胞的增殖与侵袭,可作为临床治疗靶点之一。

hepaCAM基因转染对肾癌786-0细胞增殖和侵袭活性的影响

目的:肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)是近年来发现的一类免疫球蛋白超家族细胞黏附分子,具有抑癌基因特性。本文研究hepaCAM基因转染对肾癌(Renal cell carcinoma,RCC)细胞786-0增殖和侵袭能力的影响。方法:将携有hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞(实验组)后用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2(空载组)和未转染的786-0细胞(空白组)为对照,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测hepaCAMmRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测786-0细胞增殖活性,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果:稳定转染hepaCAM后786-0细胞的hepaCAMmRNA表达水平明显上调(P<0.01),MTT显示实验组与空载组相比hep-aCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6d分别为26.5%、38.1%、35.7%(P<0.01);侵袭实验显示细胞穿透ECM膜的数目为24.6±5.3(实验组)、35.5±6.23(空载组)和37.1±7.0(空白组),实验组细胞明显少于2对照组(P<0.01)。结论:抑癌基因hepaCAM转染能降低肾癌细胞786-0的增殖和侵袭活性。

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU87增殖及侵袭活性的影响

背景与目的:PTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验研究外源性PTEN转染后,人膀胱癌细胞系BIU87增殖和侵袭活性的改变。方法:将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测PTEN基因转染前、后BIU87细胞增殖和侵袭活性的变化。结果:pBp-PTEN的酶切鉴定证实含有目的基因PTEN;pBp-PTEN-BIU87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-PTEN-BIU87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(P<0.05),以正常BIU87细胞为对照,PTEN基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%。细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-PTEN-BIU8为39.3±7.7,BIU87和pBp-BIU87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-PTEN-BIU87细胞明显少于两对照组(P<0.05)。结论:抑癌基因PTEN转染能降低膀胱癌细胞的增殖和侵袭活性。

赖氨酰氧化酶体内外对乳腺癌增殖和侵袭作用的研究

目的探讨赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)对人乳腺癌细胞的生长增殖、侵袭及转移能力的影响及可能作用的机制。方法构建LOX基因的特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实验设3个组,即空白组(Con)、干扰组(RNAi)、阴性对照组(Mock),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落形成实验及流式细胞仪观察细胞生长及增殖情况,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭及迁徙能力改变;免疫组织化学法检测111例人乳腺癌组织、癌旁乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX、基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)的表达,并对LOX与临床病理资料及MMP-2、MMP-9的相关性进行分析。结果转染72h后,MTT法显示干扰组细胞生长明显受抑制;细胞集落形成实验显示干扰组的细胞集落形成率明显低于空白组和对照组;Transwell侵袭和迁移实验结果显示RNAi组穿过Transwell小室滤过膜细胞数分别为47±2和63±2,差异有统计学意义(P=0.000);流式细胞仪测定细胞周期,3组之间差异无统计学意义。LOX蛋白在人乳腺癌、癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织中的表达率分别为48.64%(54/111)、26.13%(29/111)、20.00%(4/20),乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织(P=0.019)。LOX蛋白在不同肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移的表达率存在显著差异。相关分析显示,LOX蛋白表达与MMP-2(r=0.262,P=0.005)、MMP-9(r=0.424,P=0.000)蛋白之间呈显著正相关。结论 LOX可以促进乳腺癌的侵袭转移;LOX和MMP-2、MMP-9转移因子可能具有协同促进作用,促进了乳腺癌的侵袭转移。

不同小鼠腹水型肝癌细胞增殖侵袭能力与膜联蛋白A7的亚细胞定位和亚型表达研究

目的探讨在小鼠淋巴道转移潜能不同的肝癌细胞中,肝癌细胞增殖侵袭能力与膜联蛋白A7的亚细胞定位和亚型的表达。方法以小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移潜能不同的细胞株Hca-F细胞和Hca-P细胞为研究对象,通过CCK8法检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western blotting方法检测膜联蛋白A7在体外增殖侵袭能力不同的肿瘤细胞中的亚细胞定位和亚型的变化。结果发现Hca-F细胞无论是增殖能力还是侵袭能力都高于Hca-P细胞。膜联蛋白A7在Hca-F细胞和Hca-P细胞主要为47 kD亚型表达,而51 kD亚型只少量表达于细胞浆。47 kD亚型在Hca-F细胞的细胞浆、细胞膜、细胞器膜以及细胞骨架中的表达均明显高于Hca-P细胞,分别为(73%±7%)v(s49%±19%)、(36%±8%)v(s24%±9%)和(53%±7%)v(s40%±12%)(均P<0.05)。结论膜联蛋白A7的47 kDa亚型在细胞浆、细胞膜、细胞器膜和细胞骨架的定位表达,可能与肝癌细胞增殖侵袭能力密切相关。

miR-613通过下调Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭

目的:研究miR-613在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-613是否通过下调Wnt信号通路活性抑制前列腺癌细胞系细胞的增殖和侵袭能力。方法:收集临床前列腺癌组织及配对癌旁组织20例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组组织中miR-613的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-613 mimic和miR-NC至离体培养的PC-3、DU-145细胞中,随后,采用MTT法、平板克隆实验检测细胞增殖和Matrigel侵袭实验测定前列腺癌细胞的侵袭情况,采用荧光素酶分析方法评估Wnt信号通路活性变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因的转录(包括Cyclin D1和c-Myc),WB法检测细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达量。结果:相比配对癌旁组织,miR-613在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-613 mimic后,PC-3、DU-145细胞增殖能力下降(P<0.05),PC-3、DU-145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);miR-613的过表达显著降低Wnt信号通路活性、β-catenin蛋白表达及Wnt信号下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的转录及蛋白表达。结论:miR-613通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来影响前列腺癌细胞的增殖与侵袭,为前列腺癌的潜在治疗靶点之一。

miR-301a对三阴性乳腺癌细胞侵袭与增殖的调控作用

目的探讨microRNA-301a(miR-301a)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的侵袭、增殖的调控作用及潜在的作用机制。方法应用real-time PCR检测miR-301a在MDA-MB-231细胞与MCF-10A细胞中的表达;转染MDA-MB-231,按转染质粒分为Mimics miR-301a组、Mimics NC组、Inhibitor miR-301a组、Inhibitor NC组,通过Transwell小室实验、MTT实验检测miR-301a对MDA-MB-231细胞侵袭及增殖能力的影响;应用生物信息学软件预测miR-301a的下游靶点,并应用荧光素酶报告实验以及Western blot分析miR-301a对靶点的调节作用。结果miR-301a在MDA-MB-231细胞中的表达明显高于正常乳腺细胞(P<0.05);Transwell小室实验提示过表达miR-301a能够增强MDA-MB-231细胞的侵袭能力(P<0..05);MTT实验提示过表达miR-301a能够增强MDA-MB-231细胞的增殖能力(P<0.05);荧光素酶报告实验以及western blot实验证实miR-301a与MEOX2的靶向关系,Mimics miR-301a组MEOX2蛋白表达量明显低于Mimics NC组和空白组(P<0.05),Inhibitor miR-301a组MEOX2蛋白表达量明显高于Inhibitor NC组和空白组(P<0.05)。结论miR-301a在TNBC中高表达,并可通过靶向作用于MEOX2促进TNBC细胞的侵袭、增殖,从而作为TNBC的促癌基因发挥作用。

细粒棘球绦虫原头蚴对肝癌HepG2细胞增殖侵袭的影响

目的研究细粒棘球绦虫原头蚴(EgPSCs)对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响。方法加入不同数量EgPSCs(0、50、100和200个/孔)与肝癌细胞HepG2共培养,采用MTT、细胞划痕实验和transwell检测,分别检测不同时间点,各实验组HepG2细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结果MTT结果表明,50、100和200个/孔的EgPSCs48、72、96 h的增殖能力均显著高于0个/孔的EgPSCs(P<0.05);细胞划痕实验结果表明,培养24、48 h时100、200个/孔的EgPSCs比0个/孔EgPSCs的剩余划痕面积显著减小(P<0.05);transwell结果表明,100个和200个/孔EgPSCs实验组的侵袭细胞数显著高于0个/孔EgPSCs实验组(P<0.01)。结论体外研究表明,EgPSCs和肝癌HepG2细胞共培养,能促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭,为明确细粒棘球绦虫对肝癌的分子作用机制奠定基础。

长链非编码RNA在胆囊癌增殖侵袭中作用机制的研究进展

胆囊癌是世界上较为常见且致死率较高的肿瘤之一,尤其以发展中国家女性占较大比例。由于胆囊癌早期症状不典型、晚期手术治疗效果不佳、早期易发生转移扩散等原因,患者的5年生存率仍偏低。正因如此,胆囊癌的靶向治疗成为当下研究的热点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是非编码RNA当中的一群,曾经被认为没有任何生物学功能。在最近的研究当中,发现多种LncRNA分子异常表达于胆囊癌组织当中,可以通过调节上游基因或直接与microRNA结合调节下游相关蛋白,从而促进或抑制胆囊癌的增殖、侵袭与转移。因此,对于LncRNA的深入研究或许能够为未来胆囊癌的早期诊断与靶向治疗提供新的研究方向,为胆囊癌提供一个崭新的治疗手段。

环境雌激素双酚AF诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖与侵袭的体外实验

目的探讨环境雌激素双酚AF(bisphenol AF,BPAF)对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y增殖,及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)转录活性的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染ERE-Luc或Cat D-Luc荧光素酶报告基因后,使用0.01μmol/L、0.03μmol/L、0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L、3μmol/L和10μmol/L浓度梯度的BPAF处理SH-SY5Y细胞,采用荧光素酶报告基因实验(luciferase)检测BPAF对ERα转录活性的影响;使用BPAF作用诱导ERα转录活性的EC_(max)浓度处理SH-SY5Y细胞,采用CCK-8实验检测细胞样品在450 nm波长的吸光度值;在ERα表达阴性的三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞系MDA-MB-231中转染ERα表达载体;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的小干扰RNA(si RNA)或使用ERα的拮抗剂ICI-182780(100 nmol/L)预处理SH-SY5Y细胞后,检测BPAF对ERα转录活性的诱导作用或对SH-SY5Y细胞增殖/侵袭的促进作用。结果 BPAF能够剂量依赖性地(R^2=0.94,P=0.007 6)在SH-SY5Y细胞中提高ERα的转录活性,其EC_(50)值为(0.44±0.09)μmol/L,EC_(max)值为3μmol/L;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的si RNA载体,或使用ERα的拮抗剂(100 nmol/L ICI-182780)处理SH-SY5Y细胞能够显著下调BPAF诱导的ERα转录活性(抑制率分别为76.97%和77.75%),及其对SH-SY5Y细胞增殖(抑制率分别为77.42%和86.76%)、侵袭的促进作用(抑制率分别为95.87%和105.56%)。结论 BPAF可能通过诱导ERα的转录活性,促进神经母细胞瘤细胞系的增殖与侵袭。

miR-509-3p及XIAP表达与肝癌细胞增殖侵袭能力影响

目的了解微小RNA(micro RNA,miR)miR-509-3p和XIAP表达对肝癌细胞增殖侵袭能力的影响及其作用机制。方法应用实时定量PCR(RT-PCR)检测107例肝癌患者肝癌组织和癌旁组织中miR-509-3p和XIAP表达,利用细胞增殖实验和Transwell侵袭实验观察转染miR-509-3p类似物和抑制剂的HepG2细胞、RNA干扰XIAP表达的HepG2细胞的增殖和侵袭能力。结果肝癌组织miR-509-3p与XIAP的相对表达量分别为0.415±0.098、1.657±0.147,癌旁组织miR-509-3p与XIAP的相对表达量分别为1.127±0.126、0.425±0.113,癌组织中miR-509-3p相对表达量显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(t=3.257,P=0.002),而XIAP的相对表达量显著偏高(t=4.201,P=0.000)。肝癌组织miR-509-3p与XIAP mRNA表达水平呈负相关(r=0.218,P=0.046)。与对照组相比,转染miR-509-3p类似物48、72、96及120 h时,HepG2细胞增殖率明显偏低,差异有统计学意义(均P<0.05);与对照组相比,转染miR-509-3p抑制剂48 h后HepG2细胞增殖明显偏高(P均<0.05),与对照组相比,转染miR-509-3p类似物后24 h HepG2细胞侵袭数目明显较低,分别为96.32±0.52、51.47±0.45,差异有统计学意义(t=2.263,P=0.021);与对照组相比,转染miR-509-3p抑制剂后24 h HepG2细胞侵袭数目明显较高,分别为94.65±0.42、120.14±0.45,差异有统计学意义(t=2.463,P=0.013)。结论 miR-509-3p与XIAP的表达与肝癌细胞的增殖与侵袭能力有关,miR-509-3p表达可能通过影响XIAP表达而发挥调节肝癌细胞增殖和侵袭能力的作用。

TRIP13在非小细胞肺腺癌中促增殖侵袭和血管生成的影响及作用机制

目的:研究甲状腺激素受体作用因子13(Thyroid hormone receptor interactor 13,TRIP13)对非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)增殖、侵袭和血管生成的影响及作用机制。方法:收集45例NSCLC患者肿瘤及其对应癌旁组织,通过qRT-PCR检测肿瘤和癌旁组织中TRIP13表达量并分析其与患者临床特征的相关性。检测人肺腺癌细胞系A549和肺鳞癌细胞系SKMES1 TRIP13表达量。通过慢病毒转染法将PLK-TRIP13转染至A549和SKMES1,分析其与NSCLC细胞增殖、侵袭和血管生成的关系。结果:与癌旁组织相比,TRIP13在肿瘤组织高表达。TRIP13的高表达与肿瘤类型、肿瘤分期和淋巴结转移相关。过表达TRIP13显著促进A549细胞增殖、侵袭和血管生成,而对SKMES1细胞增殖、侵袭和血管生成的促进作用不显著。结论:TRIP13能够促进非小细胞肺腺癌的增殖、侵袭和血管生成,检测TRIP13与NSCLC病理类型可以作为一种潜在的肺腺癌临床治疗方案。