采用体外侵袭实验分离侵袭性人原代肾细胞癌细胞

目的:体外分离肾细胞癌原代侵袭性和非侵袭性细胞。方法:消化法或植块法对32例临床新鲜肾细胞癌进行原代培养。在预实验确定铺胶浓度、消化回收时间的基础上,采用涂有M atrigel的Transwell对3例原代培养的肾细胞癌细胞进行体外侵袭实验,分离回收侵袭性和非侵袭性细胞。结果:(1)原代培养成功率为90.6%(29/32)。(2)以1.0 mg/m l、20μl/孔对Transwell铺胶,固定细胞悬液密度(5×105/m l),第5天消化回收细胞较为理想。非侵袭性细胞散在生长,侵袭性细胞多呈克隆样生长。侵袭性细胞倍增时间为36.1 h,非侵袭性细胞为50.6 h。结论:Transwell可体外快速分离及回收、培养不同侵袭性的肾癌原代细胞群。用原代肿瘤细胞进行体外侵袭实验代表性好,但难以突破肿瘤细胞的有限生存期。

细胞体外侵袭实验中Transwell plate染色技术改良

细胞体外侵袭实验主要应用于肿瘤细胞侵袭和转移能力研究。该实验经常使用Transwell plate通过matrigel穿膜侵袭实验来检测肿瘤细胞的侵袭潜能。但在具体实验中获得真实、最佳实验结果图象并借以说明问题并非简单。

细胞体外侵袭实验常见问题及对策

目的:总结并改进细胞体外侵袭实验的操作经验。方法:采用改进后细胞体外侵袭实验分别研究不同浓度TNFα刺激下的HCCC9810胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱;粉防己碱对HUVEC人类脐静脉内皮细胞迁移能力的抑制作用;VEGF对人结肠癌HT29细胞体外侵袭能力的影响。结果:改进后侵袭试验定位准确,结果清晰。结论:按照作者建议的方法操作,能够缩短实验时间,有助于提高细胞体外侵袭实验的质量。

基底膜侵袭实验技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的研究

目的:研究RAB5A基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响。方法:采用重基底膜侵袭实验,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变。结果：转染PcDNA3.1-RAB5A正义表达载体的AGZY83-a细胞系基底膜侵袭能力增强，转染PcDNA3-AntiRAB5A反义RNA组质粒的Anip973细胞系侵袭能力明显减弱。结论：RAB5A在人非小细胞肺癌的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用，RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程，在细胞内发挥预期作用。

防止流行性出血热侵袭实验动物

卫生部在1984年发出卫防急字132号文“关于进行流行性出血热(又名肾综合征出血热)实验动物带毒情况检查的通知”中提到: 国内1982年、1983年,西安医学院、山西医学院和1984年南京军区医学院都因由大白鼠感染了出血热而传给人,这是由南京中医学院提供的大鼠中分离出来的病毒。根据进一步了解,安徽省卫生防疫站调查。

体外重组基底膜侵袭实验条件及计数方法的探讨

目的:探讨体外重组基底膜侵袭实验中最佳趋化条件及细胞计数方法.方法:采用体外重组基底膜侵袭实验方法,加入不同趋化 剂:成纤维细胞条件培养液、纤维黏连蛋白(FN)、条件培养液与FN联合;HE染色后,采用40×光镜随机视野计数法及利用显微 照相系统全滤膜计数法计数.结果:趋化剂组穿膜细胞数显著高于对照组;条件培养液和FN联合穿膜细胞数显著高于单独条件 培养液组和FN组;条件培养液组穿膜细胞数高于FN组;随机视野计数法与全滤膜计数法相比所得结果误差大.结论:趋化剂能 显著增加细胞的定向穿膜侵袭能力,不同趋化剂的趋化能力各有不同;全滤膜计数法是一种客观准确的细胞计数法.

感染性腹泻患者中缓慢爱德华菌的分离鉴定及侵袭性实验研究

感染性腹泻是一组由不同病原体引起的肠道传染病,也是当今全球性重要公共卫生问题之一.

pcDNA3.1-Annexin A1真核表达载体对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨Annexin A1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法构建重组质粒pcDNA3.1-AnnexinA1,转染至结直肠癌细胞株SW480中,G418筛选稳定表达株,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测转染前后Annexin A1mR-NA及蛋白表达;以空载体转染组及未转染SW480细胞作为对照,通过划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验对转染前后细胞的迁移和侵袭能力进行比较观察和分析。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Annexin A1载体;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测结果均显示,重组体pcDNA3.1-Annexin A1稳定转染细胞株中Annexin A1mRNA及蛋白表达均明显高于空载体转染及未转染组细胞(P<0.01),而后两者间比较差异无统计学意义(P>0.05);重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组SW480细胞的迁移率(0.415±0.002)明显高于空载体转染组(0.267±0.003)及未转染组细胞(0.271±0.002),差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者间差异无统计学意义(P>0.05);与空载体转染组(162.80±12.07)及未转染组(164.25±9.50)相比,重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组穿膜细胞数(221.75±12.07)增多,差异具有统计学意义(P<0.05).结论人Annexin A1基因表达上调能提高结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。

SDF-1对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力作用的相关通路研究

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002、MEK通路抑制剂PD98059对基质衍生因子-1(SDF-1)作用下卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响,初步探讨SDF-1在卵巢癌中的相关作用通路。方法:细胞免疫化学法检测SDF-1不同作用时间及不同作用浓度对卵巢癌细胞中磷酸化Akt(p-Akt)和ERK(p-ERK)表达的影响。选取对数生长期细胞,分别加SDF-1 100ng/ml、CXCR4中和抗体10μg/ml、CXCR4抑制剂AMD3100 1μg/ml、LY294002 50μmol/L、PD98059 50μmol/L。MTT、Transwell细胞侵袭实验检测细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果:随着SDF-1作用时间的延长,p-Akt、p-ERK蛋白表达水平增高;Akt、ERK蛋白的最佳活化时间为30min。作用30min时,随着SDF-1作用浓度的增加,p-ERK1、p-Akt蛋白表达水平增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。SDF-1可明显促进SKOV3细胞的增殖、侵袭能力(P<0.05);但加入CXCR4中和抗体、CXCR4抑制剂AMD3100、通路抑制剂PD98059、LY294002后,SKOV3细胞的增殖、侵袭能力无明显变化(P<0.05)。结论:SDF-1对卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭能力的增强作用可被PI3K/Akt信号通路抑制剂、MEK通路抑制剂所阻断。SDF-1可能通过Ras/ERK信号转导通路、PI3K/Akt信号通路发挥作用。

LncRNA ANRIL靶向miR-214的表达调控卵巢癌细胞增殖与侵袭行为

目的:探讨长链非编码(lncRNA)ANRIL靶向miR-214的表达调控卵巢癌细胞增殖与侵袭行为及其机制。方法:qPCR检测ANRIL和miR-214在卵巢癌组织中的表达情况及ANRIL在不同卵巢癌细胞株中的表达水平;分析ANRIL和卵巢癌患者的临床病理资料之间的关联;双荧光素酶报告基因检测ANRIL与miR-214之间的相互作用;克隆形成实验和MTT增殖实验检测抑制ANRIL的表达后卵巢癌细胞的增殖能力的变化情况,Transwell侵袭实验检测抑制ANRIL的表达后卵巢癌细胞的侵袭能力的变化情况;裸鼠体内成瘤实验ANRIL对卵巢癌细胞成瘤能力的影响。结果:与正常卵巢组织相比,ANRIL和miR-214在卵巢癌组织中的表达相对较高,与其他卵巢癌细胞株相比,SKOV3细胞中ANRIL表达最高,miR-214的表达水平最高;ANRIL的表达与卵巢癌的病理分期相关以及淋巴结转移情况有关,随着分期越高,ANRIL在卵巢癌组织中表达越高,淋巴结转移的患者中ANRIL的表达也相对较高;双荧光素酶实验证实ANRIL能与miR-214的3′UTR特异性结合,调控miR-214的表达与活性;抑制ANRIL的表达后可以促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;抑制ANRIL的表达后,裸鼠体内成瘤能力受到一定的抑制。结论:ANRIL可以调控miR-214的表达,影响卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力。

反义RNA对胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭性的抑制作用

目的:膜研究膜型-1基质金属蛋白酶(MT1- MMP)反义RNA对人胃癌细胞BGC823靶基因表达和侵袭特性的影响方法:利用基因重组技术构建人MT1-MMP反义RNA真核表达载体,转染人胃癌细胞BGC823,应用RT-PCR、MTT、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察人胃癌细胞BGC823转染前后,MT1-MMP mRNA表达水平、细胞生长、明教酶A活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化.结果:成功构建了MT1-MMP反义RNA真核表达载体pasMMP14,将其转染胃癌细胞BGC823后,与阴性对照组相比,实验组MT1- MMP mRNA表达水平降低,抑制率为36%.转染48 h,明教酶A的活化受到了明显抑制.转染72 h,细胞增殖明显受抑(t=2.358,P<0.01 vs空白组:t=2.727 P<0.01 vs阴性组).实验组的穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(t=5.744,P<0.01;t=5.695,P<0.01).结论:反义RNA对人胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭能力具有明显的抑制作用,MT1-MMP基因可作为胃癌抗侵袭治疗的分子靶点.

胃癌干细胞在胃癌侵袭、转移中及血管形成中的作用和机制

背景:肿瘤干细胞及其分化的血管细胞对于化疗、分子靶向治疗并不敏感,虽然能够减少肿瘤总体的血供,却助长了肿瘤的浸入及转移,成为治疗失败的主要机制。目的:分析胃癌干细胞在胃癌侵袭、转移中的机制及其在血管形成中的作用。方法:取20株胃癌肿瘤干细胞CSC-G和普通胃癌细胞SGC7901细胞,普通癌细胞培养条件为10%的PBS;肿瘤干细胞CSC-G培养条件为:DMEM/F12(1∶1)、B27(2%)、表皮生长因子(20μg/L)。对2种细胞进行球形克隆形成试验、平板克隆试验以及Transwell侵袭性实验,观察胃癌肿瘤干细胞的侵袭性;测定CD44、E-cadherin中mR NA水平及蛋白表达水平,观察细胞的转移能力;利用细胞划痕试验、Transwell迁移实验和成环实验观察细胞的血管形成能力。结果与结论:(1)普通癌细胞均贴壁生长,肿瘤干细胞CSC-G为悬浮生长,生长后显微镜下显示为梭形间质形态;(2)球形克隆形成试验结果:普通癌细胞瘤球数量显著少于肿瘤干细胞CSC-G(P<0.05);(3)平克隆试验结果:胃癌肿瘤干细胞瘤球数量显著多余普通胃癌细胞(P<0.05);(4)转移性试验结果:胃癌肿瘤干细胞穿过基底膜细胞数显著多于普通胃癌(P<0.05);(5)划痕试验结果:肿瘤干细胞CSC-G迁移距离、成环试验中成环数量显著多于普通胃癌细胞(P<0.05)。(6)结果提示:胃癌肿瘤干细胞侵袭能力高于普通胃癌细胞,且胃癌干细胞迁移能力以及血管成形能力较强,它可以通过形成血管等途径来进一步促进胃癌的发生与发展。

大肠杆菌动力与侵袭力的关系

目的:比较实验室和医院的大肠杆菌动力大小及与其侵袭力是否有关系。方法:用嗜热菌蛋白酶分离单个小肠上皮细胞,再用大肠杆菌侵袭小肠上皮细胞,计数胞体中所含大肠杆菌个数来反应侵袭力的大小。细菌培养后通过穿刺线运动直径判断细菌动力大小。结果:医院菌实验组平均每个细胞内有11个细菌,实验室菌实验组平均每个细胞内有5个细菌,两组经秩和检验差异有统计学意义(Z=-4.837,P=0.000)。实验室细菌动力强于医院细菌。结论:医院大肠杆菌虽然动力弱但其侵袭力强。

体外肿瘤细胞迁移和侵袭定量方法的建立

侵袭是恶性肿瘤最重要的特征之一。肿瘤细胞由其原发部位侵入淋巴管、血管或体腔,部分细胞被血液、淋巴液带到另一部位或器官继续生长,形成与原发瘤同样类型的肿瘤,这一过程即为肿瘤的迁移和侵袭。在肿瘤研究中,肿瘤细胞迁移和侵袭实验是研究肿瘤转移相关特性的重要方法,也是抗肿瘤药物筛选的常用手段。

癌细胞体外实验模型及成型技术现状和展望

传统的癌症研究是通过观察实验小白鼠的活体组织切片了解肿瘤的形成及癌症的各阶段发展情况,相比于活体实验,癌细胞的体外实验因为可以灵活地操控实验变量和实时观测癌细胞生长和发育的特点从而得以快速发展.但进一步的研究发现,在诸如培养皿二维环境中培养的细胞的行为在很大程度上与其实际所处的三维环境中的细胞行为有着巨大的差异.因此借助于微加工和微流体技术以及近年来蓬勃发展的生物3D打印技术、飞秒激光直写技术和水凝胶的紫外光固化等技术,越来越多的癌细胞体外三维实验模型得以制造并用于癌症的研究.但同时,现有的技术也面临着精度与速度的矛盾和模型材料的生物相容性等问题.本文讨论了二维及三维癌细胞体外侵袭转移实验的模型及制造技术的优缺点,简要介绍了最新的研究进展,分析提出了未来几年三维实验模型成型技术的发展方向,为相关研究提供新的实验思路.

姜黄素对前列腺癌细胞生物学行为的抑制作用

目的探讨姜黄素对前列腺癌细胞生物学行为的抑制作用。方法细胞活性实验检测不同浓度的姜黄素对前列腺癌细胞株活性的作用;克隆形成实验检测加入姜黄素对前列腺癌细胞LNCa P的增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测加入姜黄素对前列腺癌细胞侵袭能力的影响;Western blotting检测姜黄素对NF-κB信号通路蛋白的影响。结果25μmol/L浓度的姜黄素对前列腺癌细胞活性影响效果明显;姜黄素对前列腺癌细胞株的增殖和侵袭能力有明显的抑制能力,25μmol/L浓度的姜黄素对前列腺癌细胞中NF-κB信号通路蛋白(P50、P52和c-Jun)抑制效果最佳。结论姜黄素可以在一定程度上通过调控NF-κB信号通路抑制前列腺癌细胞的生物学行为。

叉头框转录因子M1对人结肠癌细胞恶性表型的影响

目的结肠癌的侵袭和转移是结肠癌患者死亡的主要原因。文中拟探讨叉头框蛋白M1(Forkhead box M1,FoxM1)对人结肠癌细胞恶性表型的影响。方法应用实时荧光定量PCR(real time-PCR,RT-PCR)和Western blot方法筛选出高表达细胞株HT-29及低表达细胞株HCT-116,应用RNA干扰技术有效下调FoxM1在HT-29细胞中的表达,同时采用过表达质粒调高FoxM1在HCT-116中的表达,2种细胞株根据不转染、转染空载质粒及转染干扰或过表达FoxM1质粒各分为3组:空白对照组、实验对照组、实验组。分别采用划痕实验和Transwell小室法检测上述转染细胞的细胞增殖、迁移与侵袭能力的变化。结果 RT-PCR及Westen blot结果提示,FoxM1在HT-29细胞中高表达,而在HCT-116细胞中呈低表达。应用PEX-2-FoxM1上调HCT-116细胞中FoxM1表达后,细胞的划痕愈合能力HCT-116实验组[(70.92±1.48)%]较HCT-116实验对照组[(18.43±3.01)%]及HCT-116空白对照组[(16.66±2.63)%]显著增强(P<0.05)。HCT-116实验组Transwell小室穿膜细胞数[(186.0±6.8)个]较HCT-116实验对照组[(42.0±2.0)个]及HCT-116空白对照组[(37.0±2.2)个]均增加(P<0.05)。应用pGPH-sh FoxM1下调HT-29细胞中FoxM1表达后,HT-29实验组细胞的划痕愈合能力[(10.37±3.86)%]较HT-29实验对照组[(39.79±2.17)%]及HT-29空白对照组[(67.36±2.61)%]显著下降(P<0.05)。HT-29实验组Transwell小室穿膜细胞数[(53.0±1.8)个]较较HT-29实验对照组[(95.0±2.2)个]及HT-29空白对照组[(118.0±4.0)个]均减少(P<0.05)。结论FoxM1表达与结肠癌的侵袭、转移等关系密切;FoxM1的siRNA干扰可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,人为调高结肠癌细胞株中FoxM1表达则促进细胞的增殖、迁移和侵袭。提示FoxM1可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。

干细胞转录因子Oct4及Sox2对宫颈癌细胞成瘤、迁移和浸润能力的影响

目的探讨Oct4和Sox2对宫颈癌细胞(以下简称HeLa细胞)成瘤、迁移和浸润能力的影响。方法复苏并培养HeLa细胞,分别构建Oct4及Sox2过表达质粒及空载质粒,采用脂质体方法转染至HeLa细胞,按转染质粒的不同分为4组(正常对照组、Oct4过表达组、Sox2过表达组和过表达空载组),铺至6孔板中,每组一个孔(细胞量为1×10^(6)),转染后48h进行PCR验证,转染成功后采取细胞划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell检测细胞侵袭能力及成球实验检测细胞成瘤能力,并采用统计学方法对各组间差异进行分析。结果PCR验证结果显示,Oct4及Sox2过表达组HeLa细胞中Oct4(5376±208.7,2.429±0.1816)和Sox2(133±23.1,1991842±210370)表达显著高于空载组(2.182±0.5183,69.27±11.94)及对照组(0.8582±0.1579,0.7932±0.2134),差异均有统计学意义(F=662.8,89.64,均P<0.0001),表明转染成功;细胞划痕实验结果显示,HeLa细胞中Oct4过表达组迁移率(25.00±5.56)及Sox2(27.00±1.73)低于空载组(36.67±0.57)及对照组(35.67±0.57),差异有统计学意义(F=12.21,P<0.05);细胞侵袭实验结果显示,HeLa细胞中Oct4过表达组侵袭数量(378.3±97.59)及Sox2(374.3±43.89)表达显著低于空载组(552.7±41.48)及对照组(515.7±57.4),差异有统计学意义(F=6.22,P<0.05);成球实验结果显示,HeLa细胞中Oct4过表达组成球数量(8.667±2.082)及Sox2(8.333±1.155)低于空载组(14.67±2.517)及对照组(13.67±1.528),差异有统计学意义(F=9.11,P<0.05)。结论Oct4和Sox 2作为肿瘤干细胞的转录因子具有抑制宫颈癌细胞的侵袭、转移及生长的作用,为宫颈癌的早期治疗和预防提供新方向。