肠侵袭性大肠埃希菌噬菌体DK-13的生物学特性及应用

【目的】筛选并分离出能裂解肠侵袭性大肠埃希菌噬菌体,分析其生物学特性,并探究其对污染猪肉的杀菌作用。【方法】采用双层平板法分离鉴定噬菌体,并测定其最佳感染复数,一步生长曲线等,对其基因组进行测序分析以及裂解功效的测定。【结果】从医院污水中分离鉴定能特异裂解肠侵袭性大肠埃希菌(Enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)的噬菌体并命名为DK-13,其呈典型的蝌蚪状外形,包含一个正二十面体的头部和一个可收缩的螺旋对称的尾部,属于肌尾噬菌体科(Myoviridae)噬菌体;生物学特性表明:最佳感染复数为0.01,潜伏期约为10 min,裂解期约为70 min,噬菌体DK-13能在50℃,pH 5.0-10.0条件下存活。全基因组测序表明,噬菌体基因组长约172 275 bp,GC含量为40.18%,预测其共有293个开放阅读框(open reading frames,ORF),未发现已知耐药基因和毒力基因。应用试验表明:被污染的猪肉中表现的杀菌效果良好,宿主菌的数量明显减少。【结论】分离并鉴定一株新的烈性噬菌体DK-13,DK-13具有潜伏期短、裂解效率高等优势,在食品安全方面具有很大应用潜力。

一株与侵袭性大肠埃希菌O144诊断血清交叉凝集的蜂房哈夫尼亚菌

[目的]对试验中发现的一株与EIEC诊断血清O144:K?发生凝集反应的蜂房哈夫尼亚菌进行较详细的生化与血清学鉴定,为今后的相关细菌鉴定工作提供参考。[方法]参考国家食品卫生检验标准微生物分册GB/T4789-2003、临床微生物手册中的相关方法进行。[结果]该蜂房哈夫尼亚菌菌株生化不典型,且与EIEC O144:K?血清型存在交叉凝集反应。[结论]该菌株为蜂房哈夫尼亚菌中少数的、生化不典型的菌株,若不进行较详细的生化鉴定易误检为EIEC O144:K?。

PCR检测志贺菌和侵袭性大肠埃希菌的侵袭性质粒抗原H基因

目的 建立一种志贺菌和侵袭性大肠埃希菌的PCR诊断方法。方法 根据志贺菌和侵袭性大肠埃希菌的侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因序列 ,设计一对引物 ,优化各种工作条件 ,建立一种PCR诊断方法。结果 本法特异性好 ,敏感性可达 10CFU ,整个实验过程在 6～ 7h内完成。结论 建立的方法在理论和实际应用上都有优越性 。

一起水源型引起肠侵袭性大肠埃希菌暴发疫情的调查研究

目的查明一起幼儿园腹泻暴发疫情的病原学和流行因素。方法从患者粪便中分离培养获得的菌株进行血清学、生化、PCR毒力基因检测和分子分型。从流行病学调查和病人的三间分布分析引起暴发的原因。结果从20份病人粪便中分离到10株菌株,根据生化特性、噬菌体裂解试验、ipaH检测和ERIC-PCR图谱确定为肠侵袭性大肠埃希菌。引起暴发流行的原因为该镇的部分生活污水污染幼儿园的生活用水所致。结论本起腹泻暴发疫情为幼儿园生活用水污染引起的肠侵袭性大肠埃希菌暴发流行;在细菌性痢疾暴发流行时,应该与肠侵袭性大肠埃希菌进行病原学鉴别诊断。

侵袭性大肠埃希菌引起群体食物中毒的实验室快速分析

目的快速分析由微生物引起的71人群体食物中毒的病原菌。方法按GB／T4789．1—14—2003、微生物学及微生物学检验中的方法。结果结合71名食物中毒患者的流行病学调查，样品采集24h后即有了目标菌的初步结果，最后结果与初步结果相符。结论这是一起由侵袭性大肠埃希菌引起的食物中毒。在优势菌生长旺盛的情况下，样品检测可以快速确定初步结果，为事故处理提供参考依据。

一起侵袭性大肠埃希菌食物中毒调查分析

目的探讨防制食物中毒事件发生的对策。方法采用流行病学卫生学和实验室检测方法进行调查分析。结果累计报告病例26例。罹患率32.5%,食物粪便中检出大肠埃希菌。结论该起事件为侵袭性大肠埃希菌(EIECO29:K?)污染食物引起的食物中毒。

广安市首例肠侵袭性大肠埃希菌食物中毒的病原学鉴定

目的:弄清广安市某学校教师聚餐发生的一起食物中毒原因。方法:参照GB/T4789-2003[1]及《细菌学检验》[2],对病人、餐厅从业人员肛拭、粪便进行病原菌检测。结果:21份样品中7份检出肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC),血清型均为O112 ac;K66。结论:本次食物中毒为EIEC所致。

一起侵袭性大肠埃希菌引起食物中毒暴发的流行病学调查

目的:对侵袭性大肠埃希菌引起的食物中毒暴发进行流行病学调查分析。方法:对中毒患者的呕吐物、粪便及接触可疑食物——猪肉的苫布和案板进行微生物培养鉴定。结果:分别从呕吐物、粪便、苫布和案板样本中检测出侵袭性大肠埃希菌。结论:根据本次食物中毒暴发的特点、临床表现及实验室检测结果,此次食物中毒暴发是因为猪肉被侵袭性大肠埃希菌所污染引起的。

一起由侵袭性大肠埃希菌引起的食物中毒

2007年8月17日某单位食堂发生一起食物中毒事件，午饭后出现集体食物中毒症状。其中5例病重病人送医院住院治疗，取5例肛拭子培养进行微生物检查鉴定。现将结果报道如下。

侵袭性大肠埃希菌IpaC的表达和纯化与检验学研究

目的研究分析侵袭性大肠埃希茵的发病机制,表达和纯化侵袭性大肠埃希茵毒力蛋白IpaC与临床意义。方法将含有ipaC基因的pET32a-ipaC表达质粒载体转化大肠杆菌BL21(λDE3),在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,对诱导后的表达产物进行SDS-PAGE鉴定,并采用QIAexpressionitsTM蛋白纯化系统纯化目的蛋白。结果诱导后的表达产物经SDS-PAGE发现有一相对分子量约为63 kD的条带,其含量约占总蛋白量的13%,对目的蛋白进行纯化后发现,以400 mmol/L咪唑洗脱液洗脱时效果最为理想,纯度可达90%以上。结论 pET32a-ipaC重组表达质粒转化大肠杆菌B121(λDE3),可稳定、高效地表达目的蛋白;QIAexpressionistTM蛋白纯化系统是一种简便、高效的纯化系统,可获得高纯度的目的蛋白。

肠道侵袭性大肠埃希氏菌可视化环介导等温扩增方法的建立

肠道侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)是一种重要的食源性致病菌,可引起人类肠道疾病。本研究建立可视化环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)方法,针对EIEC特异性基因ipaH设计引物,优化反应条件,并对该方法的特异性、灵敏度进行评估。结果显示,所建立的LAMP方法在63℃反应45 min后可凭肉眼或紫外光下观察判定结果,对EIEC的检测灵敏度可达10 pg·μL^(-1)。该方法特异性良好,与其他常见肠道致病菌,如沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应。本研究建立的可视化LAMP方法快速、灵敏度高、对设备要求低,可满足现场快速检测需求。

泉州市某区食品中致泻性大肠埃希菌的检测情况

目的 分析泉州市某区集贸摊点和超市食品中致泻性大肠埃希菌携带情况。方法 选择2021年1—12月从泉州市鲤城区超市以及集贸摊点采集的100份食品样本作为研究对象,严格按照GB 4789—2016《食品安全国家标准食品微生物检验致泻性大肠埃希菌检验》对所有标本开展致泻性大肠埃希菌微生物检验以及毒力基因检测,统计最终的检测结果。比较不同食品类型的致泻性大肠埃希菌检出率差异。结果 100份检测样本当中,总共20份检出致泻性大肠埃希菌,检出率为20.00%;其中包含产肠毒性大肠埃希菌(entero toxigenic Escherichia coli,ETEC)共6株,占比为30.00%;肠致病性大肠埃希菌(entero pathogenic Escherichia coli,EPEC)共5株,占比为25.00%;肠出血性大肠埃希菌(entero hemorrhagic Escherichia coli,EHEC)共5株,占比为25.00%;肠侵袭性大肠埃希菌(entero invasive Escherichia coli,EIEC)共4株,占比为20.00%。牲畜肉类、生禽肉类、凉拌类、海产类以及蔬菜类食品的致泻性大肠埃希菌检出率依次为38.89%、45.00%、5.00%、10.00%、4.55%,其中牲畜肉类、生禽肉类的致泻性大肠埃希菌检出率高于其他食品类型(P <0.05)。分离获得的致泻性大肠埃希菌20株内,出现EHEC的O157共5株;血清凝集予以H7鉴定,其中共有5株EHEC的O157:H7鉴定血清凝集,1株O157在羊肉上分离获得,SLT2、hly、eaeA毒力基因均在H7菌中携带,其他O157共4株,4种毒力基因均为阴性。结论 严格按照有关标准开展微生物检验能有效检出食品中的大肠埃希菌以及致泻性大肠埃希菌毒力基因,有关部门应该要加强卫生监督的力度,确保人民群众的食品安全。

一起由肠侵袭性大肠埃希菌O136∶K78引起的聚集性腹泻暴发

目的明确聚集性食源性腹泻暴发的病原。方法根据现场流行病学调查,对患者肛拭子标本18份,粪便标本2份,厨师粪便标本1份,进行分离培养,对分离到的可疑病原菌进行生化鉴定,采用Real-time PCR技术检测可疑病原菌的ipaH毒力基因,同时进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型分析。结果分离到11株血清型为O136∶K78的肠侵袭性大肠埃希菌,除1份肛拭子外,其余7份患者肛拭子、3份粪便标本Real-time PCR均阳性;除1株菌外,其余10株菌株的PFGE带型一致。结论具有侵袭性相关基因ipaH的O136∶K78肠侵袭大肠埃希菌是本次聚集性腹泻暴发的主要原因。