LRP16通过调控E-钙黏着蛋白的表达促进MCF-7细胞的侵袭生长

LRP16在原代乳腺癌组织中表达水平与雌激素受体α(ERα)表达状态以及腋窝淋巴结侵袭数目密切相关.为研究LRP16基因对乳腺癌MCF7细胞侵袭生长的影响,并探讨涉及的分子机制,采用基质胶黏附实验与Transwell方法,检测内源性LRP16表达抑制MCF7细胞的体外黏附、侵袭生长与迁移特征.结果表明,抑制LRP16在MCF7细胞中的表达,降低了细胞的体外黏附、侵袭与迁移能力;采用FVB小鼠进行的实验性转移试验结果显示,抑制LRP16显著降低了MCF7细胞的肺转移结节数目;为探索可能的分子机制,采用Western印迹方法,检测了LRP16对乳腺癌转移相关分子MMP2,MMP9,CD44和E钙黏着蛋白表达的影响,结果在LRP16抑制的MCF7细胞中只有E钙黏着蛋白蛋白表达上调.进一步的Northern印迹与免疫组化实验结果表明,抑制LRP16可上调MCF7细胞中E钙黏着蛋白基因的mRNA与蛋白表达水平;共转染与双荧光素酶方法检测LRP16对E钙黏着蛋白基因启动子的表达调控效应,结果显示,LRP16抑制E钙黏着蛋白基因基因5′近端启动子的转录激活,该抑制效应选择性存在于内源性ERα阳性细胞,并且依赖于雌激素的存在;染色质免疫共沉淀方法(ChIP)检测ERα与E钙黏着蛋白基因启动子的相互作用,结果显示,在LRP16基因表达缺陷的MCF7细胞中,ERα抗体沉淀到E钙黏着蛋白基因启动子的DNA序列;上述研究结果表明,抑制LRP16基因表达,削弱了激素依赖型乳腺癌细胞的侵袭生长能力,其分子机制涉及了LRP16通过ERα介导对E钙黏着蛋白基因基因转录激活的调控.

整合素αvβ6表达与胃癌细胞侵袭生长的关系

目的探讨整合素αvβ6表达与胃癌细胞侵袭生长的关系。方法用流式细胞术检测胃癌细胞系WiDr、SW480细胞株和人正常角质细胞系HacaT细胞株，在高低密度培养条件下各细胞表面的αvβ6。表达水平；同时将100例胃癌标本高细胞密度易侵袭的肿瘤边缘部分及低细胞密度的肿瘤中心部分制作成200点的组织芯片，用免疫组织化学方法检测整合素αvβ6在胃癌不同部位的分布和表达差异。结果：表达αvβ6的胃癌细胞出现细胞密度依赖的αvβ6表达增加，而缺乏αvβ6表达的癌细胞和正常角质细胞系HacaT细胞在高低密度培养条件下仅邛。表达没有改变。结果组织芯片免疫组织化学检查结果显示胃癌αvβ6阳性表达率为38％，在癌细胞密度高、细胞拥挤的肿瘤边缘部分αvβ6高表达占73．7％（28／38），且αvβ6密布于肿瘤侵袭边缘，而肿瘤中央组织以αvβ6低表达为主，高表达仅占28．9％（11／38）。结论整合素αvβ6表达表明胃癌细胞在侵袭生长。

远华蟾毒精通过下调miR-181a抑制胃癌细胞生长及侵袭研究

目的 回顾性分析胃癌患者样本中miR-181a的表达水平,根据临床病例病理数据分析miR-181a与胃癌的相关性。采用药物干预的方法,观察远华蟾毒精对胃癌细胞中miR-181a表达的影响以及参与胃癌生长及侵袭的作用机制。方法 本实验纳入2019年1月—2020年12月于滨州医学院附属医院诊治的90例胃癌患者的胃部病变标本及血液,另纳入30份癌旁组织样本。远华蟾毒精组使用0.05、0.10、0.50、1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精干预,对照组不加药。RT-qPCR探究组织层面的miR-181a表达水平。比较miR-181a在胃癌患者癌组织和癌旁组织中的表达水平,分析miR-181a表达水平与临床参数的相关性。以胃癌细胞系SGC-7901为研究对象,利用MTT法、细胞凋亡实验和Transwell实验探究远华蟾毒精对胃癌细胞增殖、细胞系SGC-7901细胞活力、侵袭力、细胞凋亡率的影响,并检测远华蟾毒精对miR-181a表达水平的影响。结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-181a呈高表达(P<0.05)。miR-181a低表达的胃癌患者生存曲线优于高表达者(P<0.05)。miR-181a高表达患者间肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移率大于miR-181a低表达(P<0.05);miR-181a高表达与miR-181a低表达患者年龄、体质指数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。远华蟾毒精组细胞系SGC-7901 24、48 h存活率及侵袭数低于对照组,浓度为0.50、1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组48 h存活率低于24 h存活率(P<0.05)。浓度为1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901细胞早期和晚期的凋亡率及总凋亡率高于对照组,且浓度为1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901晚期凋亡率低于早期凋亡率(P<0.05)。与对照组比较,浓度为1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901中miR-181a表达水平降低(P<0.05),且浓度为1.00μg/ml的远华蟾毒精组48 h的miR-181a表达水平较24 h低(P<0.05)。结论 miR-181a表达水平是胃癌患者中的风险基因,远华蟾毒精可以通过下调miR-181a表达来发挥抗癌功能。

抗骨桥蛋白抗体抑制肝泡型棘球蚴侵袭性生长和转移

目的外源性给予抗骨桥蛋白(osteopontin,OPN)抗体,观察其对肝泡型棘球蚴生长和转移的抑制作用。方法采用开腹直视下肝脏穿刺接种泡型棘球蚴组织混悬液的方法(0.1 ml/只,约含原头节400个),建立肝泡型棘球蚴沙鼠模型180只,随机分为3组。实验组和对照组于接种后当天经尾静脉分别注射0.15 ml抗OPN抗体(效价1∶32)和沙鼠注射用的兔血清,共注射17次,前7次每次间隔2 d,后10次每次间隔1周。模型组未作处理。上述3组沙鼠分别于感染后1、20、40、60、80和100 d随机各处死10只沙鼠,观察泡型棘球蚴的生长和转移情况,采用免疫组织化学SP法观察各组沙鼠肝泡型棘球蚴组织中OPN的表达情况。于感染后100 d乙醚轻度麻醉沙鼠后,摘眼球取血,分离血清,用ELISA测定沙鼠血清中OPN的含量。结果感染后1、20、40、60和80 d,实验组与对照组和模型组囊湿重、胸腔淋巴结转移率间的差异均无统计学意义(P>0.05)。感染后100 d,实验组囊湿重、胸腔淋巴结转移率[(7.28±0.38)g、20%]均低于对照组[(9.70±0.61)g、70%]和模型组[(9.32±0.73)g、70%](P<0.05)。免疫组化SP法结果显示,在肝泡型棘球蚴组织中有OPN不同程度的表达,均定位于细胞浆,呈黄色、棕黄色或棕褐色,主要分布在肝泡型棘球蚴纤维囊壁的生发层。感染后1、20、40、60和80 d,实验组与对照组和模型组比较,骨桥蛋白在肝泡型棘球蚴组织中的阳性表达率间的差异无统计学意义(P>0.05)。感染后100 d,实验组骨桥蛋白在肝泡型棘球蚴组织中的阳性表达率(20%)明显低于对照组(80%)和模型组(80%)(P<0.05),且实验组血清中OPN含量[(30.90±2.25)ng/μl]显著低于对照组[(41.03±2.76)ng/μl]和模型组[(42.39±2.85)ng/μl](P<0.05)。结论抗OPN抗体可以降低沙鼠肝泡型棘球蚴组织和血清中OPN的水平,阻断OPN的功能,可抑制泡型棘球蚴的侵袭性生长和转移。

miR-149通过靶向FOXM1基因抑制前列腺癌细胞的生长和侵袭

目的:探讨miR-149对前列腺癌细胞生长和侵袭的影响,并研究miR-149的靶基因及其功能。方法:利用实时荧光定量PCR检测前列腺癌和癌旁组织miR-149和FOXM1 mRNA表达水平。在人前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞中瞬时转染miR-149模拟物和阴性对照miRNA,运用平板克隆形成和Transwell侵袭实验检测细胞生长和侵袭。在细胞中分别转染miR-149靶基因FOXM1的siRNA和siRNA阴性对照,利用Western blot检测FOXM1蛋白表达情况,并检测细胞的克隆形成和侵袭能力。结果:在前列腺癌中miR-149低表达(P<0.01),FOXM1 mRNA高表达(P<0.01)。与对照组细胞相比,转染miR-149模拟物的PC3和DU145细胞克隆数目减少(P<0.01),发生侵袭的细胞减少(P<0.01);FOXM1蛋白水平在转染miR-149模拟物的PC3(P<0.01)和DU145细胞(P<0.05)中较对照组细胞降低。转染FOXM1 siRNA的PC3和DU145细胞中FOXM1蛋白水平较对照组降低,且克隆形成和侵袭能力较对照组明显降低(P<0.01)。结论:miR-149通过靶向FOXM1抑制前列腺癌细胞生长和侵袭,发挥着抑癌基因的作用,可作为前列腺癌分子治疗的有效靶点。

miR-101靶向甲基化转移酶3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭

背景与目的:mi R-101在胃癌、结肠癌、乳腺癌以及前列腺癌中表达下调,有类似抑癌基因样作用,然而,其在卵巢癌中的作用尚未明确。该研究旨在探讨mi R-101是否通过靶向调控甲基化转移酶3A(DNMT3A)抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭,从而进一步揭示mi R-101的抑瘤机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测22例卵巢癌组织及癌旁正常卵巢组织中mi R-101的表达改变;将mi R-101 mimics转染于卵巢癌SKOV3细胞,以DNMT3A si RNA为阳性对照,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测外源过表达mi R-101对DNMT3A蛋白表达水平的影响;采用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)和Transwell侵袭实验检测外源高表达mi R-101对人卵巢癌细胞生长与侵袭能力的影响。结果:q RT-PCR检测结果显示,mi R-101在22例卵巢癌组织中的表达水平较癌旁正常组织明显下调;Western blot检测结果显示,外源过表达mi R-101或沉默DNMT3A能下调SKOV3细胞DNMT3A蛋白的表达水平;MTT检测结果显示,转染mi R-101 mimics或沉默DNMT3A 48、72和96 h后D值与对照组比较明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验显示,转染mi R-101 mimics或沉默DNMT3A 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(105±7)个和(107±13)个,与对照组(213±11)个比较能明显减缓SKOV3细胞的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mi R-101通过靶向调控DNMT3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭。

miR-34a抑制人鼻咽癌细胞生长与侵袭

目的探讨miR-34a在人鼻咽癌CNE2细胞中的生物学功能。方法采用MTT、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验分别检测过表达miR-34a对人鼻咽癌CNE2细胞的生长与侵袭作用。结果 MTT检测发现,过表达miR-34a可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长增殖;细胞划痕和Transwell侵袭实验显示,在鼻咽癌CNE2细胞中过表达miR-34a 48 h后划痕愈合率为40.3%±9.0%,与对照组(76.3%±6.8%)比较,能明显减缓CNE2细胞划痕的愈合,转染miR-34a mimics 48 h后穿过基底膜的细胞数为71±10,与对照组(147±5)比较,能明显减缓CNE2细胞侵袭能力(P<0.01)。结论 miR-34a可抑制鼻咽癌CNE2细胞生长与侵袭。

linc00152通过调控DNMT3A和DNMT3B促进人宫颈癌细胞生长与侵袭

探讨linc00152在宫颈癌中的生物学功能及其调控机制。运用qRT-PCR检测人宫颈癌细胞与正常宫颈上皮细胞中linc00152的表达;转染sh-linc00152、si-DNMT3A和si-DNMT3B于HeLa细胞以敲低细胞中linc00152、DNMT3A和DNMT3B的表达水平,采用qRT-PCR与Westernblot法检测转染效率;采用Westernblot法检测sh-linc00152对甲基化转移酶(DNMT)3A和3B蛋白表达水平的影响;采用MTT、Transwell侵袭实验检测sh-linc00152、si-DNMT3A以及si-DNMT3B对人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭的影响。结果显示,linc00152在宫颈癌细胞中的表达水平明显高于正常宫颈上皮细胞(P<0.01);在HeLa细胞中,sh-linc00152组DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平明显低于sh-control组;sh-linc00152组、si-DNMT3A以及si-DNMT3B组HeLa细胞的存活率及穿过基质胶的HeLa细胞数量均明显低于各自对照组。linc00152可能通过调控DNMT3A和DNMT3B信号通路促进人宫颈癌细胞生长与侵袭。

MMPs与EMMPRIN在人脑胶质瘤侵袭性生长中研究的进展

胶质瘤是神经系统最常见的恶性肿瘤,约占颅内肿瘤的40% ～50%左右,治愈率低,预后较差.虽然基因治疗,靶向免疫治疗以及肿瘤干细胞等先进技术在临床取了较大进展,但远期疗效仍未取得突破[1].

PTEN突变与胶质瘤的侵袭性生长

PTEN作为新近发现的抑癌基因,不仅调控细胞的生长发育和凋亡,而且通过对PTEN-Integrin-FAK信号通路的调节从而抑制肿瘤细胞侵袭。研究发现,PTEN在恶性胶质瘤中的突变缺失率较高,本文就PTEN、Integrin和FAK的结构、功能及其在恶性胶质瘤侵袭性生长中的作用进行简要综述。

血管内皮生长因子表达及微血管密度在舌鳞癌侵袭性生长中的意义

目的 探讨血管内皮生长因子 (VEGF)、微血管密度 (MVD)与舌鳞癌侵袭性生长的关系。方法 按Anner oth等描述的肿瘤浸润方式评估舌鳞癌的恶性程度 ,应用免疫组化SP法检测 61例舌鳞癌组织中VEGF、FⅧ的阳性表达 ,并进行微血管计数。分析舌鳞癌组织中VEGF表达 ,MVD与其浸润方式的关系。结果 VEGF阳性表达率及MVD在舌鳞癌浸润方式Ⅲ、Ⅳ型中显著高于Ⅰ、Ⅱ型 (P <0 .0 5 )。结论 VEGF阳性表达和肿瘤新生血管形成在舌鳞癌的侵袭性生长中起着重要作用 ,是舌鳞癌恶性生物学行为的重要标志。

EP3受体各亚型对肝癌Huh-7细胞生长和侵袭的作用

目的 :探讨在肝细胞肝癌Huh-7细胞中前列腺素E2EP3各受体亚型对肿瘤细胞生长与侵袭的作用。方法:对常规培养的人肝细胞肝癌Huh-7细胞,瞬时转染EP3受体的4个亚型EP3-4R、EP3-5R、EP3-6R、EP3-7R,应用RT-PCR实验检测转染细胞EP3受体各亚型的m RNA表达水平;应用Western blot实验检测相关蛋白水平。对转染后的Huh-7细胞,分别给予不同浓度的EP3受体激动剂sulprostone作用24 h,用WST-8细胞增殖测定试剂检测细胞的增殖情况;应用划痕实验检测细胞的侵袭性;应用Western blot实验检测细胞内ERK蛋白磷酸化水平的变化。结果:RT-PCR及Western blot实验结果显示Huh-7细胞EP3受体表达水平明显增高。WST-8实验显示,经10μmol/L sulprostone处理24 h后,过表达EP3-4R、EP3-5R和EP3-7R亚型的细胞增殖率分别达到126.7%、124.0%、123.8%。划痕实验结果显示,过表达细胞的侵袭性分别增加到135.8%、123.5%、128.7%。Western blot显示,EP3-4R、EP3-5R和EP3-7R转染细胞内ERK磷酸化水平分别上调了54.8%、33.4%、44.3%。而过表达EP3-6受体亚型细胞的增殖率、侵袭率和胞内ERK磷酸化水平改变不明显。结论 :Huh-7肝癌细胞中,EP3-4R、EP3-5R及EP3-7R这3种受体亚型对细胞的生长及侵袭有显著促进作用,而EP3-6R亚型则无明显的促进作用。EP3受体促进肝癌细胞生长和侵袭的作用与ERK激活的现象一致。

基质金属蛋白酶与脑胶质瘤侵袭性生长的关系

研究表明，脑胶质瘤的侵袭性与基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases，MMPs）密切相关。肿瘤侵袭转移过程是瘤细胞从原发瘤脱离后向周围和（或）远处组织侵袭和转移的过程，涉及瘤细胞穿过细胞外基质（extracelluarmatrix，ECM）屏障、血管壁的基底膜及穿出血管壁进入宿主微环境的过程。实验证明，瘤细胞侵袭转移能力与其诱导产生蛋白酶降解ECM、基底膜的能力密切相关。

明胶酶及其抑制剂与胶质瘤侵袭性生长之间的关系

胶质瘤侵袭性生长的生物学特性使各种治疗措施难以达到治愈目的。胶质瘤细胞的侵袭行为涉及细胞迁移和附加降解的功能，即指肿瘤细胞通过释放蛋白溶解酶使细胞外基质（exlxacellular matrix, ECM）屏障降解的能力。蛋白酶对ECM的降解是肿瘤细胞侵袭转移的关键，是肿瘤侵袭性的标志。基质金属蛋白酶marx metalloproteinase，MMP）是一类重要的Zn^2＋依赖的内源性金属蛋白酶，

DKK-1基因在人胰腺癌生长、侵袭中的作用机制

Dickkopf-1(DKK-1)是一种分泌型糖蛋白,作为DKK家族重要的成员,已被证实在多种肿瘤的发生、发展中起复杂多变的作用,如在肝细胞癌、结肠癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、口腔癌和多发性骨髓瘤中DKK1均呈高表达,表现出促癌基因的作用;而在乳腺癌、恶性黑色素瘤中其表达减少,表现出抑癌基因的作用。目前,多数研究证实DKK-1在胰腺癌中的表达升高,而有关其在胰腺癌生长、侵袭中的作用机制研究较少,本文就DKK-1基因在人胰腺癌生长、侵袭中的研究进展作一概述。

miR-223通过靶定EPB41L3促进胃癌生长和侵袭的研究

目的探讨miR-223对胃癌细胞生长和侵袭的影响,并研究miR-223的靶基因及其功能。方法利用实时定量PCR检测原发性胃癌和转移性胃癌间miR-223的表达水平。利用脂质体LipofectamineTM2000在胃癌细胞中瞬时转染miR-223的ASO以及对照寡核苷酸,运用平板克隆形成和transwell侵袭实验检测细胞生长和侵袭。生物信息学方法预测miR-223的靶基因,分别利用GFP报告载体实验和Western blot检测转染miR-223 ASO和对照细胞中靶基因3'UTR的荧光强度以及靶基因的蛋白水平。在细胞中转染靶基因的siRNA和对照,利用Western blot检测靶基因的蛋白表达情况,并检测细胞的克隆形成和侵袭能力。结果实时定量PCR结果显示miR-223在转移性胃癌中高表达(P<0.05)。与对照组细胞相比,转染miR-223 ASO的细胞克隆数目减少(P<0.05),发生侵袭的细胞减少(P<0.05)。生物信息学显示EPB41L3 3’UTR含有miR-223的结合位点。与对照组相比,miR-223 ASO降低EPB41L3 3'UTR的荧光强度(P<0.05),而对突变的3'UTR没有明显影响。miR-223 ASO组细胞中EPB41L3的蛋白水平较对照组升高(P<0.05)。转染EPB41L3 siRNA的细胞中EPB41L3的蛋白水平较对照组降低,而克隆形成和侵袭能力较对照组明显升高(P<0.05)。结论 miR-223通过抑制miR-223的表达而调控胃癌细胞的生长和侵袭,暗示miR-223可能与胃癌的生长和转移相关。miR-223具有作为胃癌分子治疗和预后靶标的潜能。

整合素与胶质瘤新血管生成及侵袭性生长的关系

整合素是指细胞与细胞或细胞与细胞外基质相关联的细胞膜表面的一族细胞粘附分子。主要介导细胞与细胞及细胞与细胞外基质之间的相互粘附和双向信号传导，对细胞的生长、增殖、分化、凋亡等过程起到重要的调控作用。研究发现。整合素介导的粘附行为和信号传导．在肿瘤的发生、发展、新血管生成、侵袭性生长等阶段亦发挥重要的作用。胶质瘤是中枢神经系统最为常见的恶性肿瘤。

骨肉瘤生长侵袭相关调控蛋白的研究进展

通过阐述骨肉瘤相关调控蛋白与骨肉瘤生长迁移之间的联系,从而探讨针对性治疗骨肉瘤的新方向。通过筛选骨肉瘤生长侵袭中相关通路中具有高表达的蛋白,从而研究对比增强或抑制骨肉瘤生长侵袭作用的相关蛋白。目前发现,生存素、TRIM35蛋白、Neurensin-2蛋白能够强烈促进骨肉瘤的生长侵袭,LATS2蛋白能够抑制骨肉瘤的生长侵袭。在骨肉瘤生长侵袭的研究进展中发现了许多促进肿瘤生长的信号通路,其中一些特异性蛋白在骨肉瘤的发生发展中作用都很强烈,通过研究其特异性蛋白标志物和能够影响其发生发展的主要信号通路并进行实验验证,从而找出更好更新颖的治疗骨肉瘤的方法。

miR-200b抑制人舌癌Tca8113细胞生长与侵袭

目的:探讨miR-200b对人舌癌Tca8113细胞的生物学功能。方法运用MTT法、细胞划痕实验、Transwel 侵袭实验检测miR-200b对人舌癌Tca8113细胞的生长、迁移和侵袭能力。结果 MTT检测发现,过表达miR-200b可抑制人舌癌Tca8113细胞的生长,具有时间依赖性;细胞划痕实验显示,转染miR-200b模拟物48 h后伤口愈合率为(56.47±3.18%)与对照组(92.26±2.31%)比能明显减缓Tca8113细胞划痕伤口的愈合,差异有统计学意义(<0.01);Transwel 侵袭实验显示,转染miR-200b模拟物36h后穿过基底膜的细胞数为(76±5)与对照组(182±11)比能明显减缓Tca8113细胞侵袭能力,差异有统计学意义(<0.01)。结论 miR-200b可抑制人舌癌Tca8113细胞生长与侵袭。