EGFR基因knockdown对肝癌细胞MHCC-97H侵袭迁移能力的影响

目的探讨RNA干扰表皮生长因子受体(EGFR)基因对肝癌细胞株MHCC-97H侵袭和迁移能力的影响。方法构建EGFR基因shRNA,使用Lipofectamine 2000转染MHCC-97H细胞,Real-time PCR和Western blot检测EGFR和pEGFR的表达;细胞划痕、Transwell检测MHCC-97H细胞侵袭和迁移能力的变化。结果与正常组相比,转染EGFR shRNA组EGFR和p-EGFR均显著降低(P<0.05);同时,细胞的侵袭、迁移能力均明显减弱(P<0.05)。结论干扰EGFR可降低MHCC-97H细胞侵袭、迁移能力,降低其远处转移能力。

YB-1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测MCF-7细胞中YB-1 mRNA和YB-1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP-2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性。结果:稳定转染YB-1 shRNA的细胞中YB-1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB-1 shRNA可以沉默乳腺癌MCF-7细胞中YB-1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性。

CRISPR/Cas9敲除pyk2基因对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

为了探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶(proline rich tyrosine kinase2,Pyk2)对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响,设计了2对以pyk2为靶基因的sgRNA片段,以px335质粒为载体,构建CRISPR/Cas9重组质粒,转染至人脑胶质瘤U251细胞中,同时设置野生型U251细胞作为对照组。通过酶切鉴定及Western blot分析筛选阳性单克隆细胞,并测序揭示突变位点。筛选出的阳性单克隆细胞作为实验组,经RTCA法比较后,发现实验组细胞的增殖能力较对照组明显下降,且具有统计学意义(P<0.05);Transwell小室法及划痕实验的结果均证实,较对照组,实验组细胞的体外侵袭及迁移能力受到明显的抑制,差异显著(P<0.05)。作为验证侵袭能力的代表,基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)在Western blot实验中表达量较对照组也明显下降。通过上述方法成功得到目的基因敲除的稳定细胞株,并证实敲除pyk2基因能明显的抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

头颈部鳞状细胞癌细胞中的上皮间质转化机制

上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)对肿瘤转移过程至关重要。在EMT形成中,两个EMT标志性蛋白E-钙粘蛋白和波形蛋白是通过多个信号转导通路被严格控制的。表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和转换生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)通过调节一组独特的转录因子促进EMT的形成,这些独特的转录因子包括Snail和Twist。Snail、Twist和Slug通过直接调控参与细胞黏附、迁移和侵袭的基因诱导EMT的发生。本文将重点阐述头颈部鳞状细胞癌细胞中EMT发生过程中的分子机制,为进一步研究头颈部鳞状细胞癌的转移机制提供理论基础。

白藜芦醇苷对乳腺癌细胞转移潜能影响观察

目的探讨白藜芦醇苷对乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力的影响并初步探讨其可能的分子机制。方法采用MTT法检测白藜芦醇苷对乳腺癌细胞的生长抑制作用,采用划痕实验及Tranwell细胞迁移实验观察白藜芦醇苷对乳腺癌细胞迁移能力的影响,Tranwell细胞侵袭实验观察白藜芦醇苷对乳腺癌细胞侵袭能力的影响,免疫印迹法检测白藜芦醇苷对乳腺癌细胞内转移相关蛋白表达变化的影响。组间比较采用one-way ANOVA和Dunnett法。结果0~7.0μmol/L白藜芦醇苷处理乳腺癌细胞MDA-MB-231 48h后,细胞存活率随着白藜芦醇苷浓度的增加而降低,差异有统计学意义,F=38.394,P〈0.001;同法处理MDA-MB-468细胞株,结果与MDA-MB-231一致,F=107.748,P〈0.001。细胞迁移实验结果显示,与药物未处理组相比,0.5和1.0μmol/L白藜芦醇苷处理细胞8h后,MDA-MB-231细胞的迁移率显著降低（F=14.461,P=0.005）,分别降低了（11.81±0.06）%（P=0.018）和（16.68±0.04）%（P=0.004）;MDA-MB-468细胞的迁移率也明显下降（F=42.272,P〈0.001）,分别下降了（11.44±0.68）%（P=0.006）和（19.77±0.41）%（P〈0.001）。细胞侵袭实验结果显示,与药物未处理组相比,白藜芦醇苷处理MDA-MB-231细胞12h后,细胞侵袭率明显下降,F=105.793,P〈0.001。0.5μmol/L白藜芦醇苷使MDA-MB-231细胞的侵袭率下降了（43.42±0.54）%,P〈0.001;1.0μmol/L藜芦醇苷使MDA-MB-231细胞的侵袭率下降了（41.92±0.46）%,P〈0.001。白藜芦醇苷处理MDA-MB-468细胞16h后,细胞的侵袭率也明显降低,F=136.234,P〈0.001。0.5和1.0μmol/L白藜芦醇苷使MDA-MB-468细胞的侵袭率分别降低了（36.78±0.39）%（P〈0.001）和（38.89±0.86）%（P〈0.001）。蛋白质印迹实验提示,白藜芦醇苷对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的抑制作用可能与白藜芦醇苷抑制N-Cadherin及增加E-Cadherin的表达有关。结论白藜芦醇苷可在体外抑制乳腺癌的迁移及侵袭能力,具有应用于乳腺癌临床治疗的潜能。