Bcl-2家族参与β-淀粉样蛋白对PC12细胞的致凋亡作用

目的 :研究bcl 2家族 (主要是bcl xl和bax)基因及相关蛋白是否参与水溶性淀粉样蛋白对培养的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的毒性作用。方法 :应用电镜和DNA电泳判断细胞损伤途径 ,应用RT PCR ,免疫细胞化学和免疫印迹判断bcl 2家族及其相关蛋白是否参与淀粉样蛋白的损伤作用。结果 :10 μmol/LAβ2 5 35作用 2 4h后 ,电镜和DNA电泳均显示Aβ2 5 35可以导致PC12细胞凋亡 ;RT PCR表明药物作用后 6h ,bcl xlmRNA表达量减少而baxmRNA表达量增加 ;免疫印迹和免疫细胞化学结果显示药物作用后 2 4h ,Bax蛋白增加而Bcl xl无明显改变。结论 :水溶性淀粉样蛋白可以导致神经细胞凋亡 ,bcl 2家族参与了作用环节 ,对阿尔茨海默病的发病起着重要的作用。

细胞凋亡及相关Bcl-2蛋白在大鼠肝促癌中的作用

目的:研究大鼠肝癌促癌阶段促癌物苯巴比妥(PB)对细胞凋亡的作用及其相关基因Bcl-2表达情况。方法:复制大鼠肝癌启动/促进模型,采用TUNEL法检测各实验组不同时相点细胞凋亡率,免疫组化SABC法检测Bcl-2基因蛋白表达情况。结果:高、中、低剂量组和启动组随着时相点的延长细胞凋亡率是降低的,且各时相点间凋亡率均值比较差异显著(P<0.05),而正常组和单纯促癌组各时相点凋亡率基本稳定,无显著差异(P>0.05)。撤除组当撤除PB后细胞凋亡率显著升高,与撤除前一时相点比较差异显著(P<0.05)。Bcl-2基因蛋白表达在高、中剂量组随着时相点的延长呈现增加的趋势,且各时相点间均值比较差异显著(P<0.05)。低剂量组和启动组随着时相点的延长Bcl-2基因蛋白表达呈下降趋势,但各时相点间比较差异不显著(P>0.05)。正常组和单纯促癌组各时相点Bcl-2基因蛋白表达基本稳定,无显著差异(P>0.05)。撤除组当撤除PB后Bcl-2基因蛋白表达显著降低,与撤除前一时相点比较差异显著(P<0.05)。结论:在大鼠肝促癌阶段,促癌物PB能抑制大鼠肝癌前病变的细胞凋亡,增加凋亡相关Bcl-2基因蛋白表达,提示凋亡的抑制可能是促癌作用的机制之一,凋亡的抑制与Bcl-2基因蛋白表达的增加有关。

Bcl-2蛋白质家族调控细胞凋亡机制的研究进展

细胞凋亡是一种受基因调控的响应凋亡刺激的细胞程序性死亡方式.通过线粒体途径引发的凋亡主要由Bcl-2(B-cell lymphoma 2)蛋白质家族成员之间复杂的相互作用进行调控,然而科学界对其具体的相互作用模式一直存在争议.首先综述了近年来Bcl-2蛋白质家族成员之间相互作用的生物学机制,然后总结了细胞凋亡具有双稳性和该家族成员相互作用模式的数学模型,最后通过对目前流行的3种作用模式(即直接激活模式、间接激活模式、统一模式)进行数值模拟和分岔分析,认为统一模式是更合理的作用模式.以期能更好地理解病理细胞中可能存在的作用机制,从而为因凋亡异常引起的癌症、阿尔兹海默症等疾病的治疗和控制提供思路.

肿瘤坏死因子-α诱导成骨细胞凋亡时Bcl-2和Bax蛋白表达变化

目的:了解成骨细胞凋亡发生机制,观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导大鼠成骨细胞凋亡过程中Bcl-2,Bax蛋白表达变化及意义。方法:以原代培养的SD大鼠颅骨成骨细胞为实验对象,分别用含量为0,10,20,30,40μg/LTNF-α刺激成骨细胞。通过对细胞活性、超微结构变化观察TNF-α对成骨细胞凋亡的诱导作用;同时检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达变化。结果:随刺激含量的加大,成骨细胞的活性逐渐降低,细胞凋亡逐渐增加。TNF-α含量为<30μg/L时Bax表达呈稳步上升趋势,30～40μg/L时开始下降。Bcl-2表达在含量为10μg/L的时候轻度上升,在20μg/L回复到正常,后随着剂量的加大Bcl-2表达开始明显下降,30～40μg/L时下降非常显著。对于Bax/Bcl-2相对表达强度与细胞死亡率做相关性分析两者呈显著性正相关(n=25,r=0.827,P<0.001)。结论:蛋白相对比例是决定成骨细胞对TNF-α诱导凋亡的易患性的重要因素。

Bcl-2蛋白家族与细胞凋亡

Bcl-2蛋白家族是调节PCD的关键元件,它们受自身基因表达量的高低及蛋白质磷酸化的调控。可分为Bcl-2、Bax及BH3三个亚族。Bcl-2类蛋白阻遏PCD,Bax及BH3类蛋白则促进PCD。它们通过形成同源或异源二聚体,以及与胞内蛋白因子的相互作用来调节PCD。对其分子机制的阐明,有助于众多遗传病研究的突破。

线粒体Smac蛋白与Bcl-2蛋白家族的相关性及其促凋亡机制研究进展

细胞凋亡又称程序性细胞死亡,在机体发育分化和维持体内平衡中起着十分重要的作用。机体内存在两类影响细胞凋亡的基因,即促凋亡基因,如Bax、Smac、Htr A2和抗凋亡基因,如Bcl-2、IAPs、p53。Smac是一种线粒体促凋亡蛋白,在凋亡信号刺激下,它与细胞色素C(cytochrome c,cytc)一同释放进入细胞质,经修饰形成成熟的Smac,与Caspase竞争结合IAPs,解除IAPs的抑制作用,激活Caspase,从而促发凋亡。Bcl-2家族蛋白是在细胞凋亡过程中起关键性作用的一类蛋白质,根据Bcl-2家族蛋白的功能,可将其分为两大类:促凋亡Bcl-2蛋白和抗凋亡Bcl-2蛋白。近年来,关于Smac信号通路和Bcl-2家族蛋白相关性的研究越来越多。因此,深入研究其分子机制,可为肿瘤的基因治疗、药物靶点的筛选及抗肿瘤药物的开发提供新的思路。

凋亡调节蛋白Bcl-2家族在手术切除的非小细胞肺癌中的表达

目的 检测凋亡调节蛋白Bcl-2家族Bcl-2、Bax和Mcl -1在非小细胞肺癌 (NSCLC)标本中的表达特征和临床意义。方法 采用链霉亲和素 -过氧化酶连接 (SP)免疫组化法用针对人体的Bcl -2、Bax与Mcl -1的特异性抗体检测这些凋亡调节基因在存档的 5 0例NSCLC患者彻底手术切除的标本中的表达情况 ,并结合临床病理分型和追踪预后分析其表达的意义。结果 ( 1)非小细胞性肺癌标本中抗凋亡因子Bcl -2和Mcl-1分别有 15例 ( 3 0 %)和 2 9例 ( 5 8%)表达阳性 ,有 2 3例 ( 4 6%)的标本中有促凋亡因子Bax表达阳性。Mcl -1与Bax的表达之间存在正相关(P =0 .0 6)。Bcl-2、Bax和Mcl -1的免疫组化染色以胞浆为主。 ( 2 )Mcl-1与Bax在肺癌的不同临床病理分型中没有差异。 ( 3 )Bcl -2的表达与原发性NSCLC手术切除患者总的无复发生存率 (P =0 .0 2 )和无转移生存率 (P <0 .0 1)呈负相关 ,Mcl -1与Bax的表达与预后无关。结论 在NSCLC中 ,Bcl-2家族蛋白Bcl-2、Mcl-1和Bax的表达都很常见。Mcl -1的抗凋亡功能可能是通过在蛋白质水平与Bax相互作用形成异二聚体 ,拮抗Bax的促进凋亡功能而实现的。可能由于它们在凋亡中复杂的相互作用 。

肿瘤免疫治疗中Bcl-2家族蛋白与凋亡蛋白抑制因子IAP研究

阐述了T细胞抗原的研究结果,主要涉及到B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(即Bcl-2)家族蛋白及凋亡蛋白抑制因子(即IAP)。

促细胞凋亡因子Bid蛋白的研究进展

Bid蛋白是Bcl -2家族中促凋亡类的蛋白。它具有可被caspase8酶切调控、高效地诱导细胞色素c从线粒体泄漏到胞浆中的功能 ,从而在细胞凋亡中起着重要的作用 ,因而倍受人们的重视。Bid蛋白的功能被发现以来 ,短短几年间 ,人们从分子生物学、细胞学、结构分析以及利用脂质体模型膜体系等各方面对Bid蛋白进行研究 ,取得了很大的进展。

P53和Bcl-2家族蛋白在胰腺癌中的表达与细胞凋亡的关系(英文)

目的探讨胰腺癌组织(pancreatic carcinoma,PC)中p53和Bcl-2家族(Bcl-2,Bax,BclxL,Bcl-xS)蛋白表达及与细胞凋亡的关系。方法免疫组化法检测35例PC中P53的蛋白表达,将PC分为p53阴性表达组(第1组,n=18)和p53阳性表达组(第2组,n=17);Western blot检测两组PC中P53、Bcl-2,Bax,Bcl-xL和Bcl-xS蛋白表达,TUNEL法检测第1组中凋亡指数(AI)。结果 Bcl-2蛋白在P53阳性PC表达上调,而在P53阴性PC表达下调(P=0.047);Bax和Bcl-xL蛋白在两组PC中表达都明显上调(P=0.274,0.334);Bcl-xS在p53阳性表达PC明显下调,在p53阴性表达组明显上调(P=0.01);在P53阴性和阳性表达PC,AI分别为12.1±2.47和9.1±1.48(P=0.023);Bcl-2家族各成员表达与AI无相关性,而Bcl-2/Bax比率与AI有明显的相关性(P<0.01)。结论 Bcl-2是依赖p53调节的抗凋亡蛋白,Bcl-xS是依赖P53调节的促凋亡蛋白,而P53主要通过调节Bcl-2/Bax比率发挥凋亡调节作用。

主要促进因子超家族成员MFSD2A对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探索主要促进因子超家族蛋白2A(major facilitator superfamily domain containing 2A,MFSD2A)对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法使用慢病毒载体构建差异表达MFSD2A的肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721,由qPCR及Western blotting法评估其转染效率;CCK-8法分析差异表达MFSD2A对细胞增殖的影响,流式细胞术测定转染后细胞的基础凋亡率的变化,Transwell小室细胞侵袭实验明确MFSD2A对细胞侵袭能力的影响。结果在肝癌细胞中上调MFSD2A表达可以显著抑制细胞增殖、促进基础凋亡,同时还可降低细胞的侵袭能力;而下调MFSD2A则可导致相反的效应。结论MFSD2A在肝癌的肿瘤进程中发挥抑癌基因的功能,这种功能主要是通过抑制细胞增殖并诱导凋亡实现的。

小鼠成纤维细胞凋亡与bcl-2结合蛋白

为检测细胞凋亡过程中ｂｃｌ２ 基因的结合蛋白， 用ＰＣＲ 技术扩增小鼠ｂｃｌ２ 基因（ｍｂｃｌ２） 调控区， 经亚克隆后的序列分析证实其准确性． 用５氟尿嘧啶（５Ｆｕ） 诱导小鼠成纤维细胞（Ｃ３Ｈ１０ Ｔ１／２ Ｃｌ ８） 凋亡， 以此ＰＣＲ产物作探针， 对上述细胞的核蛋白质粗提物进行迁移位移法（ＥＭＳＡ） 与ＤＮＡ蛋白质印迹分析． 结果表明， 细胞核内一分子质量为５３ ｋｕ的结合蛋白与ｍｂｃｌ２ 调控区的结合信号在５Ｆｕ 刺激１２ ｈ 后明显增强， 而一种１００ ｋｕ的ＤＮＡ 结合蛋白与该区的结合信号在５Ｆｕ 刺激１２ ｈ 后明显减弱． 因而， ｐ５３ 蛋白有可能是ｂｃｌ２ 的负转录因子， １００ ｋｕ的ＤＮＡ 结合蛋白有可能是ｂｃｌ２ 的正转录因子．

Urocortin调控Bcl-2家族与大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡

目的观察神经肽Urocortin对大鼠缺氧/复氧心肌细胞Bcl-2及相关基因mRNA表达和细胞凋亡的影响。方法培养新生大鼠的心肌细胞并缺氧/复氧处理,用RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bad mRNA表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果Urocortin治疗组Bcl-2的mRNA表达与缺氧/复氧组比较明显增加(P<0.05),Bax的表达明显下降(P<0.05),Bcl-xL、Bad mRNA表达无明显改变(P>0.05)。Urocortin治疗组凋亡细胞率与缺氧/复氧组比较减少(P<0.05)。结论Urocortin调节心肌细胞Bcl-2家族基因转录下凋促凋亡基因Bax表达,上调抑凋亡基因Bcl-2使Bcl-2/Bax比值增加。这可能是Urocortin抗大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的机制之一。

bcl-2家族促凋亡成员——bak与肿瘤

bcl鄄2基因家族是一类细胞凋亡的相关基因,参与细胞凋亡的调控。bak作为该家族的成员,虽发现较晚,但因其显著的促凋亡作用,现在已受到越来越多的关注。本文就bak基因及其蛋白产物BAK与肿瘤之间的关系做一综述。

Bc1-2家族是人参皂甙Rg1抗黑质神经元凋亡的重要调控蛋白

目的 探讨Bc1 2、Bc1 x1和Bax蛋白在人参皂甙Rgl抗帕金森病 (PD)小鼠模型黑质神经元凋亡过程中的可能作用。 方法 PD模型组单纯以 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)腹腔注射C5 7BL小鼠 ;预防组预先 3d腹腔注射Rg1(2 5、5 0、10 0mg kg) ,再注射MPTP ,以Niss1染色、TH组织化学染色、TUNEL染色观察黑质神经元的变化 ;免疫组织化学染色检测Bc1 2、Bc1 x1和Bax蛋白表达。 结果 5 0和 10 0mg kgRg1预处理PD模型鼠能使黑质致密带 (SNc)部位的Niss1和TH染色阳性神经元增多 ,TUNEL染色阳性率降低 ,以及Bc1 2和Bc1 x1表达增加 ,Bax表达减少。 结论 Rg1预处理对PD模型鼠黑质神经元凋元有明显的保护作用 ;Bc1 2和Bc1

维泰醇对小鼠淋巴白血病细胞促进凋亡的作用及其机制

维泰醇(alternol)是利用红豆杉树皮中一种微生物菌诱变株,经过发酵、纯化等工艺分离出的新型单体化合物。本研究探讨维泰醇对小鼠淋巴白血病(L1210细胞)的作用及其机制。采用MTT法检测维泰醇对细胞活力的影响,用形态学方法、DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡,以Western blotting法检测与凋亡相关蛋白的表达。维泰醇对L1210细胞的增殖有明显抑制作用;处理后的细胞表现出凋亡特有形态学改变,细胞凋亡比率的增加有时间依赖性;维泰醇能降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm),增加细胞内活性氧(ROS)的水平,并引起细胞DNA发生片段化,形成典型的梯状条带;维泰醇能下调Bcl-2/Bax表达比率,并且上调caspase-3和caspase-9的表达,但是对caspase-8的表达没有明显的影响。维泰醇可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导L1210细胞凋亡。

减少氧糖剥夺/复氧后脊髓星形胶质细胞凋亡:抑制高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路的作用

背景:脊髓损伤后,星形胶质细胞核内高迁移率族蛋白B1被释放到细胞外,通过与细胞膜表面受体结合激活核转录因子κB引起脊髓水肿或者炎症等一系列病理反应,但有关高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路调节氧糖剥夺/复氧损伤后脊髓星形胶质细胞凋亡的研究尚少。目的:分析高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路对氧糖剥夺/复氧后脊髓星形胶质细胞凋亡的调节作用。方法:体外培养新生一二天SD大鼠(山西医科大学动物中心提供)脊髓星形胶质细胞,建立氧糖剥夺细胞损伤模型,并分别复氧培养6,12,24 h,ELISA法检测培养基内高迁移率族蛋白B1质量浓度,Western blot法检测细胞内高迁移率族蛋B1、Bcl-2、BAX蛋白表达量,MTT法检测细胞存活率,以此筛选最佳复氧时间进行以下实验。取第4代脊髓星形胶质细胞,分4组培养:正常组、氧糖剥夺/复氧组、氧糖剥夺/复氧+丙酮酸乙酯组、氧糖剥夺/复氧+核转录因子κB抑制剂组,复氧培养24h后,ELISA法检测培养基内高迁移率族蛋白B1质量浓度,Westernblot法检测细胞内高迁移率族蛋B1、核转录因子κB、Bcl-2、BAX蛋白表达量,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与结论:(1)各检测结果显示复氧培养24 h为最佳复氧时间,用于后续实验;(2)与正常组比较,氧糖剥夺6 h/复氧24 h组高迁移率族蛋B1、核转录因子κB蛋白表达及细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2/BAX比值降低(P<0.05);与氧糖剥夺6 h/复氧24 h组比较,氧糖剥夺6 h/复氧24 h+丙酮酸乙酯组、氧糖剥夺6 h/复氧24 h+核转录因子κB抑制剂组细胞存活率、Bcl-2/BAX比值升高(P<0.05),核转录因子κB蛋白表达、细胞凋亡率降低(P<0.05);(3)结果表明,高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路参与调节氧糖剥夺/复氧后脊髓星形胶质细胞的凋亡。

Bcl-2及bFGF在维拉帕米诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡中的表达

目的探讨维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的凋亡作用,观察凋亡过程中原癌基因蛋白质(Bcl2)和碱性成纤维细胞生长因子(baic fibroblast growth factor,bFGF)的表达变化。方法应用80mg·L-1Ver作用于体外培养的人RPE细胞12h、24h、48h,吖啶橙(acridineorange,AO)荧光染色及透射电镜观察RPE细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Bcl2mRNA和bFGFmRNA表达变化。结果经Ver作用的体外培养的人RPE细胞具有典型的凋亡形态学特征:核染色质浓染、边集;细胞体积缩小。同时RPE细胞Bcl2mRNA表达下降;而bFGFmRNA表达随着作用时间延长,呈增高趋势。结论Ver可诱导体外培养人RPE细胞凋亡,凋亡过程中Bcl2表达逐渐下降,而bFGF表达增强。