促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶

促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶(mitogen-activatedproteinkinasephosphatases,MKPs)是一类丝/苏氨酸和酪氨酸双特异性的磷酸酶。它在细胞分化、增殖和基因表达过程中起着重要的作用。MKPs可以选择性地结合促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK),对MAPK进行去磷酸化,从而调节MAPK信号通路的活性。另一方面,MAPK也可以激活MKPs,它们的相互作用确保了细胞内信号的精确传递,并参与细胞功能的调节。

电针干预自发性高血压大鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达

背景:近年来大量临床研究表明针刺风池、太冲、曲池等穴位能有效降低血压,可用于高血压,但对其治疗的分子机制尚未阐明。目的:观察针刺大鼠风池、太冲、曲池等穴位对丝裂原活化蛋白激酶信号转导调控系统的影响,从而探讨针刺治疗高血压的分子机制。方法:选取8月龄自发性高血压雄性Wistar大鼠14只,随机分为针刺组和模型组,每组7只;另选取同月龄正常血压雄性Wistar-Kyoto大鼠7只作为对照组。对针刺组大鼠采用电针针刺双侧风池、曲池和三阴交穴,毫针刺太溪和太冲穴。3周后采用RT-PCR方法检测各组大鼠主动脉组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRAN的表达,Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达。结果与结论:与对照组比较,模型组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平升高,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRNA及其蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平降低,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRNA及其蛋白表达水平升高(P<0.05)。提示针刺治疗自发性高血压大鼠可能是通过调控丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径,增强磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达,降低丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1蛋白表达,从而改善血管重塑,降低血压。

促分裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶-2全新抑制剂的3D-QSAR研究

促分裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶-2(MK-2)可以作为治疗类风湿性关节炎(RA)的靶标,并显示出巨大的潜力,此类酶的抑制剂用于治疗RA具有相当好的疗效,一系列β咔啉衍生物对于MK-2具有高的活性和选择性。通过自组织分子场(SoMFA)分析方法建立了MK-2抑制剂———β咔啉衍生物的三维定量构效关系(3D-QSAR)模型。SoMFA模型的相关系数r2=0.731,交叉验证相关系数q2=0.686,标准偏差s=0.388,Fisher检验值F=63.538。该模型具有很好的稳定性和较为满意的预测能力。

PP2C蛋白磷酸酶调控的细胞信号通路研究进展

2C类蛋白磷酸酶是蛋白磷酸酶家族的重要成员,可以对丝/苏氨酸残基特异性脱磷酸。近来研究表明,2C类蛋白磷酸酶控制着大量关键的细胞功能,如增殖、细胞周期阻滞、衰老和细胞程序性死亡、凋亡和自噬等,因而在介导机体免疫反应、衰老、神经发育及肿瘤发生发展中发挥重要的生物学作用。总结PP2C基因各亚型参与介导的重要细胞信号通路,如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)、转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、核转录因子-κB(NF-κB)及DNA损伤应答通路,以期为阐明上述生理病理过程的分子基础和调控机制提供新的思路。

促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶1对肿瘤坏死因子-α介导的心肌损伤的保护作用

目的探讨促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MKP1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导心肌损伤的影响及其机制。方法将野生型(WT)和MKP1转基因(MKP1)小鼠(购自武汉华联科生物技术有限公司)各自随机分为两组:WT、WT+TNF-α组和MKP1、MKP1+TNF-α组。WT+TNF-α组和MKP1+TNF-α组的小鼠按6 mg/kg的剂量腹腔注射TNF-α;WT组和MKP1组的小鼠腹腔注射等量的生理盐水。检测各组小鼠心肌MKP1表达、心肌损伤标志物水平、心肌细胞线粒体分裂相关蛋白、抗氧化剂和呼吸复合物表达以及线粒体凋亡情况,采用t检验分析组间差异。结果与WT+TNF-α组比较,MKP1+TNF-α组的小鼠心肌线粒体分裂动力蛋白相关蛋白1(Drp1)和线粒体分裂因子(Mff)相对表达下调(Drp1:1.80±0.20比1.00±0.30、t=-10.134、P<0.05;Mff:2.80±0.20比1.10±0.30、t=-8.313、P<0.05),差异有统计学意义,还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平升高[GSH:(29±2)nmol/mg比(49±3)nmol/mg、t=12.127、P<0.05;SOD:(2.2±0.1)U/mg比(8.1±0.2)U/mg、t=10.301、P<0.05;GPX:(50±4)U/mg比(172±6)U/mg、t=11.136、P<0.05],差异有统计学意义,线粒体呼吸复合物(complex)Ⅲ和ⅢⅡ相对表达上调(complexⅢ:1.00±0.20比2.20±0.12、t=10.715、P<0.05;complexⅡ:1.10±0.09比1.90±0.08、t=8.312、P<0.05),差异有统计学意义,天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)相对表达下调(Caspase-9:2.20±0.11比1.15±0.09、t=-5.210、P<0.05;bax:2.30±0.12比1.42±0.09、t=-6.006、P<0.05),差异有统计学意义。结论TNF-α诱导心肌损伤的机制涉及线粒体的过度分裂、线粒体氧化还原平衡和能量代谢的破坏以及线粒体凋亡。而MKP1过表达可明显抑制这些不良反应的发生发展,保护线粒体功能,抑制心肌损伤。

双特异性磷酸酶8通过与促分裂原活化蛋白激酶1相互作用调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖 凋亡

目的:探讨RA-成纤维样滑膜细胞(FLS)中双特异性磷酸酶8(DUSP8)DUSP8与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)1之间的相互作用,及其对RA-FLSs增殖、凋亡的影响。方法:培养RA-FLS和正常FLS,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法检测两组细胞DUSP8 mRNA表达水平。采用细胞转染技术及RNA干扰技术,构建DUSP8过表达细胞系及DUSP8沉默细胞系。CCK-8法检测各组细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印迹法检测各组细胞DUSP8、MAPK1、p-MAPK1、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验分析DUSP8与MAPK1的空间共定位,免疫共沉淀实验分析DUSP8与MAPK1蛋白之间是否存在相互作用。计量资料两组间比较采用独立样本 t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD- t检验。 结果:DUSP8在RA-FLS mRNA[(2.4±0.6)和(11.2±0.8), t=21.63, P<0.001]和蛋白表达[(0.24±0.04)和(0.74±0.08), t=9.45, P<0.001]水平均显著低于FLS。与空白对照组和过表达对照组相比,在RA-FLS细胞转染pcDNA3.1-Myc-DUSP8可显著抑制RA-FLS细胞的增殖[(90.5±5.6),(92.5±1.8),(56.4±4.4), F=138.60, P<0.001],增加细胞凋亡率[(12.7±1.4)%和(12.6±1.3)%和(27.5±3.0)%, F=16.98, P<0.001],上调细胞的DUSP8'[(0.49±0.05),(0.45±0.04)和(0.73±0.07)]、Bax[(0.39±0.06),(0.36±0.05)和(0.89±0.10)]蛋白表达水平,下调ki-67[(1.07±0.12)和(1.11±0.16)和(0.70±0.08)]、p-MAPK1/MAPK1[(0.59±0.06)和(0.65±0.07)和(0.39±0.03)]蛋白表达水平(均 P<0.001);与空白对照组和沉默对照组相比,在RA-FLS细胞转染siRNA-DUSP8可显著促进RA-FLS细胞的增殖[(90.5±5.6)和(91.1±2.9)和(128.3±4.6), F=137.50, P<0.001],降低细胞凋亡率[(12.7±1.4)%和(13.2±1.2)%和(5.4±0.7)%, F=16.98, P<0.001],下调细胞中的DUSP8[(0.492±0.048)和(0.432±0.051)和(0.102±0.024)]、Bax[(0.391±0.062)和(0.411±0.058)和(0.090±0.011)]蛋白表达水平,上调ki-67[(1.07±0.12)和(1.11±0.15)和(1.93±0.22)]、p-MAPK1/MAPK1[(0.59±0.06)和(0.68±0.06)和(0.93±0.11)]蛋白表达水平(均 P<0.05)。间接免疫荧光实验结果表明DUSP8与MAPK1均可在RA-FLS细胞质和细胞核中表达,免疫共沉淀实验验证DUSP8与MAPK1蛋白具有相互作用。 结论:DUSP8通过与MAPK1相互作用调节MAPK1磷酸化,抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖,并促进凋亡。

氯通道ClC-2融合蛋白的原核表达及体外磷酸化

目的检测ClC-2是否能被促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化,为进一步研究其在细胞增殖、分化过程中的调控机制提供基础。方法从含有家兔ClC-2cDNA的质粒pSPORT1中PCR扩增ClC-2胞浆内的羧基端DNA编码序列,构建重组载体pGEX-4T-1/ClC-2CT;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株;经异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,通过GluthathionSepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白;并行融合蛋白的体外磷酸化实验。结果酶切、测序鉴定重组载体pGEX-4T-1/ClC-2CT构建正确,并纯化得到GST/ClC-2CT融合蛋白。而且该融合蛋白能被MAPK磷酸化,而GST不能被MAPK磷酸化。结论氯通道ClC-2能被MAPK磷酸化。

蛋白磷酸酶2A抑制剂对胰腺癌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路的激活作用及对细胞生长的影响

中药斑蝥中的有效成分斑蝥素（CAN）及其衍生物对多种肿瘤细胞具有抑制作用[1-2]，我们发现斑蝥素可抑制胰腺癌细胞的生长和转移[1]。斑蝥素是蛋白磷酸酶2A（PP2A）的选择性抑制剂，PP2A可使细胞信号通路中的多种激酶去磷酸化而失活，这些激酶包括与细胞生长密切相关的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）：细胞外信号调节激酶（ERK）、c-jun氨基端激酶（JNK）和p38等。

双特异性蛋白磷酸酶6在肿瘤中作用的研究进展

双特异性蛋白磷酸酶6(dual specificity phosphatases 6,DUSP6)是一种双特异性蛋白磷酸酶,主要是负反馈调控反转录病毒相关的DNA序列-细胞外信号调节激酶1/2(retrovirus associated DNA sequences-extracellular signal regulated kinase,RAS-ERK1/2)信号通路。而DUSP6对于RASERK1/2信号转导通路的负反馈调节一旦打破,就可能会引起肿瘤,甚至还会出现恶性分化。近年来DUSP6在肿瘤形成、浸润、转移和肿瘤治疗方面的作用,已成为新的研究热点,能有助于许多恶性肿瘤的临床病理的诊断及治疗预后的判断。

β淀粉样蛋白对小胶质细胞促分裂原活化蛋白激酶激酶2和肿瘤坏死因子-α mRNA水平影响

目的:探讨β淀粉样蛋白诱导的炎症反应在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法:采用不同浓度(0,62.5,125.0,250.0nmol/L)的β淀粉样蛋白1-42孵育原代培养的新生大鼠海马小胶质细胞2 h,建立β淀粉样蛋白诱导损伤的神经细胞模型,半定量RT-PCR反应方法观察体外条件下β淀粉样蛋白1-42对小胶质细胞中促分裂原活化蛋白激酶激酶2和肿瘤坏死因子-αmRNA水平的影响。结果:随着β淀粉样蛋白1-42浓度增加,促分裂原活化蛋白激酶激酶2和肿瘤坏死因子-αmRNA水平升高,与β淀粉样蛋白1-42浓度呈正相关。结论:β淀粉样蛋白诱导的炎症反应在阿尔茨海默病的发病机制中具有重要作用。

双特异性磷酸酶2对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的探讨双特异性磷酸酶2(DUSP2)基因对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法首先利用在线分析工具KM plotter分析876例胃癌患者DUSP2表达高低对其总体生存率的影响,并在多种胃癌细胞株(MKN-45、SGC-7901、HGC-27、N-87)中检测DUSP2的表达。进一步构建DUSP2过表达慢病毒载体,包装病毒感染MKN-45细胞,筛选出DUSP2稳定过表达的胃癌细胞株,以空载慢病毒转染并筛选后的胃癌细胞为对照。采用MTS细胞增殖实验检测DUSP2上调表达对胃癌细胞增殖能力的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式检测细胞凋亡变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测DUSP2、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p-ERK(Thr202/Tyr204)、P38、p-P38等蛋白表达水平。结果高表达DUSP2的胃癌患者较低表达者有明显的生存优势,并且DUSP2在多株胃癌细胞中呈低表达。Western blot结果显示DUSP2稳定过表达的胃癌细胞(实验组)中DUSP2表达较对照组明显上调,DUSP2稳定过表达的胃癌细胞株构建成功。MTS实验结果表明,实验组细胞活力较对照组明显下降。实验组细胞凋亡率明显高于对照组。Western blot结果表明,实验组细胞中p-ERK(Thr202/Tyr204)及p-P38表达较对照组显著下调。结论上调DUSP2的表达可显著抑制胃癌细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制与DUSP2抑制了ERK、P38的磷酸化水平有关。

冲击波通过ATP释放、P2受体及激活p38MAPK激酶促进T细胞增殖和分泌白细胞介素2(英文)

背景:以往研究发现,冲击波可通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38(p38MAPK),增强CD3和CD28激活的T细胞增殖和分泌白细胞介素2。目的:观察细胞内的ATP向外释放,是否为冲击波增强T细胞功能的潜在机制。设计:以细胞为观察对象,分组对照重复测量观察。单位:吉林大学第一医院骨科研究室。材料:KDE-2001体外冲击波碎石机(北京中科建安医疗技术公司制造)。MAPKp38抑制剂:SB2035801mg(BioSource Inc.,Camarillo,CA);检测磷酸化的p38MAPK试剂盒(Cell Signaling Tehchmology,Inc.U.S.A.);P2受体抑制剂:suramin50mg(BIOMOL ResearchLaboratories Inc,PA),用1.7492mL的IMDM培养基将50mg的suramin配成0.02mol/L的溶液。ATP酶:apyrase200U(Sigma,U.S.A.);P2X7受体阻滞剂:KN-62(BioSource Inc.,Camarillo,CA);p38MAPK抑制剂:SB2035801mg(BioSource Inc.,USA*542Flynn Roas,Camarillo,CA);检测ATP的生物荧光试剂盒/ATP BioluminescenceAssay Kit CLSⅡ(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,Germany)。方法:实验于2005-01/2006-12在吉林大学第一医院骨科研究室完成。①采用体外冲击波碎石机(工作电压7kV、电容0.3μF时,冲击波正相压强23MPa,能量密度0.18mJ/mm2)作用于T细胞,冲击波作用50￣400次。②用特异性的ATP试剂盒检测低能冲击波是否引起T细胞(人外周血单个核细胞和Jurkat T细胞)分泌ATP。③设无拮抗剂和抑制剂的阴性对照组。用人外周血单个核细胞检测低能冲击波对激活的T淋巴细胞增殖的影响,用Jurkat细胞检测低能冲击波对T淋巴细胞分泌白细胞介素2的影响,用抗-p38MAPK抗体及抗-磷酸化的p38MAPK(Thr180/Tyr182)抗体通过免疫印迹法测定Jurkat T细胞上的p38MAPK的表达及磷酸化。主要观察指标:T细胞外的ATP含量、细胞悬液中的白细胞介素2的含量、细胞的增殖和细胞p38MAPK的磷酸化程度。结果:①冲击波作用100,150,200,250,300,360和400次时较无冲击波作用时细胞外的ATP的含量明显增加(P<0.01),并且ATP的增加含量和冲击波的作用次数有依从关系。②加入apyrase,KN-62,suramin的植物血凝素激活的外周血单个核细胞细胞或CD3和CD28激活的Jurkat T细胞,在能量密度为0.18mJ/mm2的冲击波作用100,150,200,250,300,330次时,细胞对3H-TdR掺入量比没有加入apyrase、KN-62或suramin的阴性对照组低(P<0.01),细胞上清液中的的细胞介素-2的活性含量表现为明显增高(P<0.01)。加入ATP、KN-62或suramin后,冲击波激活Jurkat T细胞的p38MAPK的程度明显降低。结论:①低能冲击波能损伤细胞膜而不损伤其他细胞器,引起T淋巴细胞内的ATP过多向细胞外分泌,细胞外过量的ATP过多地激活了P2X7受体,激活细胞内的大量的p38MAPK,最后磷酸化的p38MAPK作为协同刺激因子增强激活的T淋巴细胞增殖及分泌白细胞介素2。②在低能冲击波对T淋巴细胞的功能调节上,T细胞分泌的ATP起到非常重要的作用。

抗β_2GPⅠ抗体/β_2GPⅠ与PLT活化

近年来，血栓性疾病发病率不断上升，严重威胁人类健康和生命，血小板（PLT）活化是血栓形成的始动因素，在血栓形成中起到关键作用。研究发现抗β2糖蛋白Ⅰ（β2GPI）抗体出现在多种血栓性疾病中，常见于抗磷脂综合征，能使体内PLT活化并和纤维蛋白结合，引起PLT聚集，

番茄SlMAPK9-2基因分离及表达分析

促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在植物生长发育以及多种逆境胁迫响应和激素调控过程中发挥着至关重要的作用。为了研究MAPK基因的结构和功能,利用生物信息学分析以及PCR扩增方法从番茄中分离了1个新的MAPK基因,克隆其c DNA全长序列,命名为Sl MAPK9-2;利用NCBI数据库Blast P工具和在线软件MEME分析发现其具有MAPK保守的结构域和保守基序。系统进化树分析显示Sl MAPK9-2属于D组MAPK,与茄科植物马铃薯和烟草MAPK9位于同一进化树分支。利用数据库PGDD分析发现,Sl MAPK9-2与Sl MAPK16以及Pm MAPK9之间发生了大片段复制事件,且2个基因对的Ka/Ks均小于1,说明经历了达尔文纯化选择。实时荧光定量PCR分析发现,Sl MAPK9-2在不同组织器官中均有表达,在开放花中表达量最高。非生物逆境(高温和盐胁迫)和外源激素(脱落酸和水杨酸)处理可以显著改变Sl MAPK9-2的表达水平。启动子预测分析也发现,Sl MAPK9-2启动子区含有大量响应病原菌、激素、高温及脱水的顺式作用元件。综上,Sl MAPK9-2可能在番茄逆境胁迫应答中发挥重要调控作用。本研究为进一步探索Sl MAPK9-2的生物学功能及作用机制奠定了基础。

温针灸对膝骨关节炎大鼠P53、Map2k3和PGE_2的影响

目的通过观察温针灸对KOA大鼠肿瘤抑制蛋白P53(P53)、促分裂原活化蛋白激酶3(Map2k3)mRNA和前列腺素E_2(PGE_2)蛋白含量的影响,探讨温针灸治疗KOA的可能机制。方法将28只健康的雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和温针灸组,每组7只。正常组常规饲养,余3组大鼠采用关节腔注射木瓜蛋白酶papain联合强迫运动造模处理。造模成功后,温针灸组大鼠选用双侧"膝前穴";药物组大鼠予美洛昔康药物治疗。治疗结束后通过HE染色观察大鼠滑膜组织形态学变化,ELISA检测大鼠血清PGE_2蛋白含量,实时荧光定量PCR法检测滑膜组织中P53和Map2k3 mRNA的表达情况。结果HE染色结果显示与正常组相比,模型组可见明显的炎性细胞浸润,药物组可见少量炎性细胞、部分脂肪细胞和增生的血管,温针灸组可见少量炎性细胞散在分布。与正常组比较,模型组、药物组和温针灸组大鼠血清PGE_2含量、滑膜组织P53 mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,温针灸组、药物组血清PGE_2蛋白含量、滑膜组织P53 mRNA表达水平明显降低(P<0.05);温针灸组与药物组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠滑膜组织中Map2k3 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论温针灸在一定程度上可以减少滑膜组织炎性细胞数量,通过降低PGE_2的含量抑制炎性反应。温针灸能够降低KOA大鼠滑膜组织P53 mRNA的异常高表达。

基于Mekk2-/-小鼠研究贞术调脂胶囊调控β-catenin泛素化的成骨机制

目的观察促分裂原活化蛋白激酶2敲除(Mekk2-/-)小鼠的表型变化以及贞术调脂胶囊(FTZ)含药血清对MEKK2表达影响,探讨FTZ对MEKK2-β-catenin通路以及β-catenin去泛素化的作用机制。方法建立Mekk2-/-小鼠,通过MicroCT检测其与野生型的表型差别;通过FTZ干预Mekk2-/-小鼠和野生型的成骨细胞,运用Western blot观察对β-catenin磷酸化水平的作用;通过FTZ与FGF2干预野生型小鼠原代细胞,观察对MEKK2磷酸化水平的作用;通过C3H10T1/2细胞转染后进行FTZ和Wnt3a干预,观察β-catenin活性变化。结果Mekk2-/-小鼠与野生型小鼠相比,BV/TV、Tb.N、Tb.Th值均较后者降低(P<0.05),Tb.sp无差异变化(P>0.05)。FTZ含药血清增强了野生型小鼠细胞β-catenin的磷酸化水平(P<0.05),但是在Mekk2-/-小鼠细胞中则明显降低(P<0.05)。FTZ含药血清和FGF2干预后的原代细胞中,p-MEKK2/3表达水平均比不干预时细胞增强(P<0.05),且二者提高水平不存在明显差异(P>0.05)。FTZ含药血清和Wnt3a均促进β-catenin活化,而FTZ含药血清和Wnt3a共同干预细胞后,可见β-catenin活化程度更高,效果呈累加效应(P<0.05)。结论FTZ通过激活MEKK2通路,独立于Wnt经典通路促进β-catenin的去泛素化进程。

异钩藤碱通过下调CaN、ERK2和上调MKP-1的表达抑制大鼠心肌细胞肥大

目的研究异钩藤碱抑制大鼠心肌细胞肥大的作用并探讨其可能的作用机制。方法采用乳SD大鼠原代心肌细胞培养法,建立心肌细胞肥大模型;HE染色观察细胞形态学变化,采用图像分析系统测量心肌细胞的表面积、BCA法测定细胞蛋白质含量,确定药物抑制心肌细胞肥大的作用;实时荧光定量PCR检测细胞中CaN及ERK2 mRNA的表达、Western blotting检测细胞中MKP-1蛋白的表达,探讨药物作用的可能机制。结果异钩藤碱1μmol/L、10μmol/L明显抑制AngⅡ诱导心肌细胞表面积和蛋白含量的增加,改善心肌细胞形态学;明显抑制AngⅡ所致CaN、ERK2 mRNA表达的增加,而各浓度组则显著升高MKP-1蛋白的表达。结论异钩藤碱具有抑制大鼠心肌细胞肥大的作用,其机制可能与抑制AngⅡ所致CaN、ERK2 mRNA表达和升高MKP-1蛋白的表达有关。

芍药苷通过调节MAPK通路减轻高糖诱导的H9c2细胞损伤

目的探讨芍药苷(PF)对高浓度葡萄糖(HG)诱导H9c2细胞损伤的作用及机制。方法H9c2细胞分别用PF 250,300,350μmol·L^-1、葡萄糖35 mmol·L^-1(HG组)、SB2035803μmol·L^-1、SP60012510μmol·L^-1、U012615μmol·L^-1单独或联合PF 350μmol·L^-1处理3 h,加葡萄糖35 mmol·L^-1继续孵育21 h。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测活化胱天蛋白酶3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平及P38促分裂原活化的蛋白激酶(P38 MAPK)、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和c-Jun N端激酶激酶(JNK)蛋白磷酸化水平。结果与HG组相比较,HG+PF 300和350μmol·L^-1组、HG+SB2035803μmol·L^-1组、HG+SP60012510μmol·L^-1组、HG+U012615μmol·L^-1组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶3和Bax蛋白显著下调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白显著上调(P<0.05)。与HG组相比较,HG+PF 300和350μmol·L^-1组P38 MAPK,ERK1/2和JNK磷酸化水平显著下调(P<0.05,P<0.01),HG+SB2035803μmol·L^-1组P38 MAPK磷酸化水平显著下调(P<0.01),HG+SP60012510μmol·L^-1组JNK磷酸化水平显著下调(P<0.01),HG+U012615μmol·L^-1组ERK1/2磷酸化水平显著下调(P<0.01)。结论PF通过抑制MAPK通路活化来抑制HG诱导的H9c2心肌细胞毒性和凋亡,从而减轻HG诱导的H9c2心肌细胞损伤。

碱性成纤维细胞生长因子对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK/ERK、MKP-1通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK1/2、ERK1/2及MKP-1表达的影响。方法:培养人涎腺腺样囊性癌细胞株(ACC-2),MTT比色法测定不同浓度bFGF对细胞增殖的影响;免疫沉淀法纯化蛋白并ERK试剂盒测定ERK活性;免疫印迹法测定p-MEK1/2、p-ERK1/2及MKP-1表达。结果:MTT实验显示bFGF明显增强ACC-2细胞增殖,免疫沉淀法显示bFGF上调ERK活性,免疫印迹法显示bFGF明显增强p-MEK1/2、p-ERK1/2表达及抑制MKP-1表达。结论:bFGF可促进人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖,其途径与上调ERK活性、激活MEK/ERK通路、抑制MKP-1表达有关。

氧化应激和炎症反应中Nrf2/HO-1与MAPK的相关性

核因子E2相关因子2(Nrf2)是一种细胞内转录调节因子,血红素加氧酶1(HO-1)是其最重要的下游调控产物之一,两者的级联反应在机体抗炎和抗氧化系统中十分关键。而促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)参与体内多种氧化应激和炎症反应过程并发挥重要调控作用。MAPK与Nrf2/HO-1信号通路间具有复杂的相互作用,且这一作用在不同的研究条件下并不一致。不同的MAPK可不同程度地影响Nrf2的活化,进而影响HO-1的表达;另外,HO-1降解胆红素的产物一氧化碳及其他Nrf2调控的基因也可能对一些MAPK具有调节作用。同时,细胞内其他信号分子的影响进一步增加了MAPK与Nrf2/HO-1信号通路相互作用的多样性。