湖羊促性腺激素释放激素受体基因(GnRHR)在消化系统中的表达谱分析

建立湖羊促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因的实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,并采用该方法对湖羊消化系统中胃肠各组织的GnRHR mRNA表达水平进行检测。结果表明:GnRHR mRNA在瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠部位均有表达,其中瘤胃GnRHR mRNA表达量最高,极显著高于其他各组织(P<0.01);网胃GnRHR mRNA表达量极显著高于十二指肠(P<0.01),显著高于瓣胃、盲肠和直肠(P<0.05);皱胃GnRHR mRNA表达量极显著高于瓣胃、空肠、回肠和盲肠(P<0.01),显著高于结肠和直肠(P<0.05);结肠GnRHR mRNA表达量显著高于十二指肠和直肠(P<0.05)。研究证实了GnRHR mRNA在湖羊消化系统中有表达,这为GnRH功能的多样性研究提供了新的依据。

摩拉、尼里/拉菲种公牛促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因序列多态性检测及基因型分析

为了分析摩拉、尼里/拉菲种公牛促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因的遗传多态性,试验对28头摩拉种公牛、40头尼里/拉菲种公牛采用PCR扩增、测序、高分辨率熔解曲线检测的方法对GnRHR基因进行遗传多态性检测。结果表明:摩拉、尼里/拉菲种公牛GnRHR基因存在相同的SNP位点,分别是A13 342G、T13 355G、A13 406T、T17 221C。其中前三个SNP位点位于第一内含子,最后一个SNP位点位于第三外显子,该突变位点使氨基酸编码由酪氨酸变为组氨酸。对于基因分型,摩拉、尼里/拉菲种公牛却出现不同结果,摩拉种公牛13 342位点有2种基因型AA、AG,频率分别为0.607 1,0.329 2;13 355位点有2种基因型TT、TG,频率分别为0.714 3,0.285 7;13 406位点有2种基因型AA、AT,频率分别为0.750 0,0.250 0;17 221位点有2种基因型TT、TC,频率分别为0.750 0,0.250 0。尼里/拉菲种公牛13 342位点有3种基因型AA、AG、GG,频率分别为0.300 0,0.375 0,0.325 0;13 355位点有3种基因型TT、TG、GG,频率分别为0.575 0,0.325 0,0.100 0;13 406位点产生3种基因型AA、AT、TT,频率分别为0.575 0,0.325 0,0.100 0;17 221位点有3种基因型TT、TC、CC,频率分别为0.600 0,0.325 0,0.075 0。尼里/拉菲种公牛检测群体4个SNP位点均处于HardyWeinberg平衡状态(P>0.05)。

促性腺激素释放激素基因及其受体基因的研究进展

作者简要介绍了促性腺激素释放激素基因及其受体基因的位置、结构、表达、调控机理,并初步探讨了这两个基因与繁殖性能的关系。

广西沼泽型水牛垂体中促性腺激素释放激素的免疫组化定位及其受体基因表达

[目的]探讨广西沼泽型水牛垂体中促性腺激素释放激素(GnRH)的细胞定位以及是否存在促性腺激素释放激素受体(GnRH-R)。为GnRH-R的克隆及其序列分析提供理论依据。[方法]采用免疫组织化学ABC法,确定促性腺激素释放激素在垂体中的定位,结合图像分析系统检测GnRH在垂体中的含量,并利用RT-PCR技术扩增其受体基因片段。[结果]腺垂体远侧部中呈现较强的阳性Gn-RH免疫反应,阳性物质主要分布在胞质,胞核呈阴性。神经垂体中无阳性信号。同时,在垂体中扩增出大小为1008bp的GnRH-R基因片段。[结论]腺垂体远侧部边缘区中有大量GnRH及其受体存在,证实垂体前叶是下丘脑-垂体-性腺轴以及多个内分泌轴相互作用的重要部位。

京海黄鸡促性腺激素释放激素受体基因密码子特性分析

为了了解鸡促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因的密码子特性,以便于为GnRHR基因的表达选择合适的外源表达系统,本研究使用在线工具CUSP、CHIPS及CodonW软件对鸡GnRHR基因的密码子特性进行分析,并与鸡、模式动物基因组和其他动物GnRHR基因密码子特性进行比较。结果显示,京海黄鸡GnRHR基因的ENc值较小,具有较强的密码子偏好性,且偏好以G/C结尾的密码子,GnRHR基因CDS序列中,GC含量大于AT含量;CodonW软件计算结果表明,京海黄鸡GnRHR基因密码子中,密码子GCC、ATC、CTC、CTG、CGC、CGG、AGC、TCC和GTG(RSCU>2)偏好性较强,且均以G/C结尾。对31条鸡基因分析表明鸡偏好密码子中有12种G/C结尾的密码子。与大肠杆菌、酵母菌和小鼠基因组密码子使用频率比较显示,京海黄鸡GnRHR基因密码子偏好性与3种生物相差很大,不适合进行外源表达。与其他动物GnRHR基因密码子偏好性比较显示,禽类GnRHR基因偏好含有或以G/C结尾的密码子,而其他物种的GnRHR基因无强烈的偏好性。聚类分析结果表明,亲缘关系近的物种之间倾向于拥有相同的密码子偏好性。

大白鼠颌下腺促性腺激素释放激素受体(GnRHR)mRNA的RT-PCR和原位杂交的研究

本实验采用 RT- PCR法探讨大白鼠颌下腺是否存在 Gn RH受体 m RNA,并用原位杂交法对其细胞定位进行了研究。结果显示 RT- PCR可扩增出大白鼠颌下腺 Gn RH受体 m RNA的特异性片段 ,其碱基数与设计的一致。原位杂交发现颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有 Gn RH受体 m RNA的杂交信号。信号物质分布于胞质内 ,胞核阴性。上述结果表明大白鼠颌下腺能合成 Gn RH受体 ,颌下腺产生的 Gn RH可作用于颌下腺的靶细胞 ,参与颌下腺生理功能的调节。

Ⅱ型促性腺激素释放激素受体基因组织表达与鸭繁殖性状杂种优势关系分析

试验旨在克隆鸭Ⅱ型促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor-Ⅱ,GnRHR-Ⅱ)基因序列,研究其在鸭生殖轴组织中表达差异与繁殖性状的杂种优势关系。采用RT-PCR方法从鸭生殖轴组织中克隆出GnRHR-Ⅱ基因片段序列,利用Real-time PCR技术分析GnRHR-Ⅱ基因在不同产蛋期高邮鸭、金定鸭及其正反交组合生殖轴组织中的表达,并分析表达差异与繁殖性状杂种优势的关系。序列分析结果表明,克隆序列长度约500bp,属Ⅱ型GnRHR基因序列,与家鸡cGnRHR-Ⅱ序列的同源性达96%。从产蛋早期至高峰期,高邮鸭、金定鸭及其正反交组合垂体中GnRHR-Ⅱ基因的表达量均呈上调趋势,且金定鸭×高邮鸭杂交组合的表达量最高(P<0.01);下丘脑中GnRHR-Ⅱ基因表达量在高邮鸭、金定鸭中呈上调趋势,而在2个正反交组合中呈下调趋势。产蛋早期金定鸭和2个正反交组合卵巢中GnRHR-Ⅱ基因表达量极显著高于高邮鸭(P<0.01),至产蛋高峰期表达量明显下调。杂种优势率分析结果表明,2个正反交组合在42周龄产蛋数和42周龄种蛋受精率性状中都表现出正向杂种优势,在开产日龄和42周龄受精蛋孵化率性状中都表现出负向杂种优势。推测产蛋期前鸭卵巢中GnRHR-Ⅱ基因的暂时性高表达与开产日龄和42周龄产蛋数性状杂种优势相关,垂体组织中GnRHR-Ⅱ基因的持续高表达可能对产蛋高峰期的形成和维持具有重要作用。

人类促性腺激素释放激素受体在垂体外正常组织和癌组织的分布

促性腺激素释放激素 ( LHRH)受体在垂体外正常组织和癌组织的分布及两者性质的比较。

大鼠下颌下腺卵泡刺激素、黄体生成素的分布及与促性腺激素释放激素受体的共定位研究

目的 研究卵泡刺激素 (FSH)和黄体生成素 (LH)在大鼠下颌下腺中的定位、分布及与促性腺激素释放激素受体 (GnRHR)共定位的关系。 方法 采用邻片免疫组织化学共定位方法。 结果 大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、分泌管、排泄管及颗粒曲管上皮细胞均呈FSH和LH免疫反应阳性 ,阳性颗粒分布在细胞质内 ,细胞核阴性。邻片共定位结果显示颌下腺GnRHR免疫反应阳性细胞同样呈FSH免疫反应阳性 ,大部分的GnRHR免疫反应阳性细胞呈LH免疫反应阳性 ,小部分呈免疫反应阴性。两种免疫反应阳性物质均分布在细胞质内 ,细胞核阴性。 结论 大鼠下颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、分泌管、排泄管和颗粒曲管上皮细胞可能以自分泌或旁分泌的GnRH调节自身合成与分泌FSH和LH。

滋阴泻火中药对性早熟模型大鼠促性腺激素释放激素及其受体mRNA表达的影响

目的 :观察滋阴泻火中药对达那唑诱导的性早熟模型大鼠下丘脑促性腺激素释放激素 (GnRH)和垂体GnRH受体mRNA表达的影响 ,探讨滋阴泻火中药的作用机制。方法 :将动物分为正常组、模型组、生理盐水组和中药组。模型组、生理盐水组和中药组动物 5日龄时皮下注射达那唑 30 0 μg ;中药组在 15日龄时开始喂饲滋阴泻火中药 ,生理盐水组同时给予等量的生理盐水。免疫组织化学ABC法观察大鼠下丘脑GnRH的表达 ;逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)观察下丘脑GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达。结果 :和正常组比较 ,模型组和生理盐水组大鼠阴门开启和建立性周期的时间提前 ,下丘脑GnRHmR NA和垂体GnRH受体mRNA的表达升高 ,下丘脑GnRH免疫阳性神经元减少 ;中药组大鼠阴门开启和建立性周期的时间延缓 ,下丘脑GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达降低 ,下丘脑GnRH免疫阳性神经元增多。结论 :滋阴泻火中药可能通过抑制下丘脑GnRH的合成和释放以及降低垂体对GnRH的反应性 ,抑制提前启动的下丘脑 -垂体 -性腺轴功能 ,这可能是滋阴泻火中药治疗性早熟的机理。

大鼠颌下腺雄激素受体的免疫定位及与促性腺激素释放激素受体的共定位关系

目的 :研究大鼠颌下腺雄激素受体 (AR)的存在及其与促性腺激素释放激素受体 (GnRHR)的免疫共定位关系 ,证明颌下腺是雄激素和GnRH的一个靶器官。 方法 :制备大鼠颌下腺石蜡连续切片 ,以免疫组化SABC法分别研究AR和GnRHR的免疫定位。 结果 :大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有AR免疫反应性物质存在。阳性物质分布于胞质内 ,胞核阴性。邻片双标记染色结果显示 :GnRHR免疫反应性物质也存在于上述细胞内。阳性物质分布在胞质 ,胞核阴性。 结论 :大鼠颌下腺存在AR ,是雄激素的靶器官 ,而且 ,雄激素和GnRH在颌下腺有相同的靶细胞 。

促性腺激素释放激素受体的结构及其生物学功能

促性腺激素释放激素受体(GnRHR)属于类视紫红质G-蛋白结合受体(GPCRs)家族的成员。当促性腺激素释放激素(GnRH)与GnRHR结合后,一系列细胞内信号通路被激活从而调节和表达各种生物学功能。本文对GnRHR的基因结构、分子结构、信号调节及生物学功能等进行了综述。

牙鲆促性腺激素释放激素基因cGnRH-Ⅱ和sbGnRH的克隆与表达特征分析

采用RACE和RT-PCR方法,从牙鲆脑组织中克隆获得了两种牙鲆促性腺激素释放激素cGnRH-Ⅱ（DQ008580）和sbGnRH（DQ074693）的cDNA全基因序列,其长度为607 bp和395 bp,分别编码85和98个氨基酸的GnRH前体,均包含一个信号肽、具有活性的GnRH十肽和一个由蛋白水解位点（Gly-Lys-Arg）连接的GnRH相关肽.氨基酸同源性比较表明,牙鲆促性腺激素释放激素cGnRH-Ⅱ与其他鱼类的cGnRH-Ⅱ基因有较高的同源性,如与鲽科鱼类条斑星鲽的相似性为97.6%,但与哺乳类、爬行类和两栖类动物的同源性较低;sbGnRH与条斑星鲽的相似性为86.7%.采用RT-PCR方法分析了两种GnRH基因在成熟牙鲆个体中的表达,结果表明该两基因在脑区、垂体和性腺中皆有表达,但sbGnRH基因的体内表达部位稍多于cGnRH-Ⅱ.

恐惧应激对大鼠小肠促性腺激素释放激素受体的影响

目的:观察恐惧应激状态下SD大鼠小肠黏膜促性腺激素释放激素(GnRH)受体的分布和表达变化。方法:建立SD大鼠恐惧应激模型,分别取急性应激组(2~12 h)、慢性应激组(1 d^4周)和相应对照组的小肠。用免疫组化和Western blot法检测GnRH受体在各实验组大鼠小肠中的分布和表达变化。结果:免疫组化显示:急性应激组、慢性应激组和相应对照组的小肠黏膜层均呈GnRH受体免疫反应阳性,无明显差异。阳性反应物质定位于细胞膜和细胞质,细胞核呈阴性。Western blot结果表明:在急性应激状态下,GnRH受体表达有增多的趋势,但与相应对照组相比无显著性差异(P>0.05);慢性应激组与其相应对照组相比,GnRH受体表达明显增加(P<0.05)。整个慢性应激过程中,GnRH受体表达增多持续1~4 d。1~3周时,GnRH受体表达降低,3~4周时又有所回升,并接近慢性应激相应对照组。结论:随着恐惧应激时间的延长,GnRH受体在小肠中表达增加。提示GnRH在恐惧应激中,对消化功能的影响具有潜在的生理调节功能。

促性腺激素释放激素受体在雌性山羊颈胸神经节中的分布

目的探讨颈胸神经节是否具备接受促性腺激素释放激素(GnRH)作用的条件。方法实验采用免疫组织化学SP法,观察GnRH受体在雌性山羊颈胸神经节中的分布特点。结果在颈胸神经节中,神经元胞体均为GnRH受体免疫反应阳性,其细胞膜以及膜下胞质中的颗粒状物质呈棕黄色,GnRH受体为强阳性表达,而胞核呈阴性表达。部分神经元可见其突起,呈黄色,GnRH受体为中等阳性表达。卫星细胞也呈黄色,GnRH受体为中等阳性表达。图像分析表明,呈阳性反应的神经元胞体与节内其他阳性成分相比,其GnRH受体相对表达量差异性极显著(P<0.01)。结论在雌性山羊颈胸神经节中,神经元胞体是GnRH发挥作用的主要靶细胞,颈胸神经节具备接受GnRH作用的条件。提示GnRH有可能通过作用于颈胸神经节交感节后神经元上的GnRH受体来影响心肺器官的功能活动,即颈胸神经节可能是心肺功能活动中协调GnRH内分泌调节和该神经节自主神经调节两途径之间的中继站。

人促性腺激素释放激素及其转运肽基因的克隆、表达与纯化

研究根据GenBank中已发表的人GnRH2基因mRNA序列以及转运肽基因核苷酸序列,借助Oli-go4.1设计了一对寡核苷酸引物,以引物3'末端的短互补序列退火形成小段双链,从而互为模板和引物,通过引导合成长达90bp的目的序列GnRH/TRS。将其克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pYC1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC1,进一步的序列分析确认其中GnRH/TRS序列的正确性。pYC1经BamHI和EcoRI酶切得到GnRH/TRS片段,然后将此片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组质粒pYC2。经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC2,并转化到大肠杆菌BL21(ED3)plyS实现原核表达。IPTG诱导后成功表达出与预期大小相符的约28ku的融合蛋白,光密度扫描对表达产物进行初步定量,表达产物约占菌体总蛋白的33.3%,表达产物经GlutathioneSepharose4B层析纯化后,得到了纯度较高的GST-GnRH/TRS融合蛋白,为进一步科研和实际应用奠定基础。

卵泡刺激素在大鼠胰腺中的定位及其与促性腺激素释放激素受体共存关系

目的 :研究卵泡刺激素在大鼠胰腺中的分布及其与促性腺激素释放激素受体的共存关系。方法 :采用免疫组织化学法和邻片双标记方法。结果 :大鼠胰腺外分泌部腺泡内的部分腺细胞和胰岛中的部分内分泌细胞呈现FSH免疫阳性反应 ,阳性产物分布于胞质 ,胞核阴性。卵泡刺激素与促性腺激素释放激素受体在大鼠胰岛细胞中有重叠分布。结论 :大鼠胰腺外分泌部的腺泡细胞和胰岛的细胞能表达卵泡刺激素。卵泡刺激素和促性腺激素释放激素受体共存于大鼠胰岛细胞中。表达卵泡刺激素的胰岛细胞可能受促性腺激素释放激素调节。

促性腺激素释放激素及其受体在肿瘤治疗中的应用

促性腺激素释放激素(GnRH)是由下丘脑神经元分泌的一种十肽类激素,其生理功能是调节垂体前叶促性腺激素的分泌,进而刺激黄体生成素及卵泡刺激素的分泌以调节性激素的水平。GnRH对垂体外的多种外周组织的生理功能也有调节作用。近年研究发现,乳腺、卵巢、子宫内膜、前列腺、胰腺、肺、肝脏发生的肿瘤细胞上均有GnRH受体分布,GnRH类似物可抑制这些肿瘤细胞生长。GnRH及其类似物的抗肿瘤效应是通过调节垂体促性腺激素水平来实现的。本文对GnRH及其受体在肿瘤治疗中的应用进展进行综述。

妊娠与非妊娠大鼠子宫内膜促性腺激素释放激素及其受体的免疫组织化学研究

目的 :研究促性腺激素释放激素 (GnRH)及其受体在妊娠与非妊娠大鼠子宫内膜中的分布及相对含量 ,为了解促性腺激素释放激素对子宫内膜的可能功能提供依据。方法 :免疫组织化学ABC法及图像分析技术。结果 :非妊娠大鼠子宫内促性腺激素释放激素及促性腺激素释放激素受体阳性反应发生在内膜上皮、腺上皮及基质细胞。妊娠大鼠子宫内这二者阳性反应主要发生在内膜上皮及基蜕膜的蜕膜细胞 ,妊娠大鼠子宫上皮细胞中的促性腺激素释放激素及其受体的相对含量明显高于非妊娠大鼠子宫内膜。结论 :妊娠与非妊娠大鼠子宫内膜均能表达促性腺激素释放激素及其受体。